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文档简介
.,1,AKTAPrimer层析系统的应用技术,专业基础实验,.,2,PrinciplesofOperationforChromatographyTechniques,现代柱层析技术的原理,GelFiltration,IonExchange,HydrophobicInteraction,Affinity,ReversedPhase,基本知识,.,3,层析介质,硅胶氧化铝聚酰胺大孔树脂分子筛凝胶离子交换凝胶亲和层析介质反相层析介质,基本知识,.,4,AKTA-分离和纯化各类生物分子,天然蛋白质重组和融合蛋白质肽类寡核苷酸质粒病毒抗生素生物碱,TCM。等等,基本知识,.,5,AKTAPrimer系统组成,AKTAPrime+PrimeView,AKTAPrimer,.,6,AKTAPrime主机,AKTAPrimer,.,7,AKTAPrime主机,AKTAPrimer,.,8,AKTAPrime流程图,AKTAPrimer,.,9,AKTAPrime流程图,.,10,面板操作按钮及简要操作命令,.,11,面板操作按钮,.,12,面板操作按钮,按OK进入子菜单;按ESC退到上级菜单;按上下箭头,可选择菜单命令、调整参数等。,.,13,面板操作按钮,分布收集器前进一管,停止程序或方法运行,梯度运行过程中,按此键,系统将保持当前浓度运行,而流速和分步收集继续,再按一下,继续梯度运行,按此键,系统暂停运行,包括泵和收集,再按一下,继续,.,14,操作命令简介,主菜单,.,15,预编好的方法模板,运行保存的方法,手动运行,编辑方法,将方法拷入电脑或拷回,检查系统状态,设定系统参数,.,16,子菜单以ManualRun为例:,操作命令简介,.,17,单位ml、min,浓度%B,收集单位ml、min、drop,收集数量(每管),限压(保护层析柱)MPa,缓冲阀位1-8,样品阀位waste、load、inject,开始,梯度(长度ml/目标浓度%B),流速ml/min,.,18,PrimeView软件系统-数据采集,AKTAPrimer,.,19,运行曲线图谱(Curve):记录系统采集到的全部数据,系统开始运行后,自动开始记录,结束后,自动保存。,运行日志(Logbook):记录系统收到的所有指令,.,20,AKTAPrimer,.,21,PrimeView数据采集,选择浏览曲线及设定曲线颜色,设定X,Y轴的坐标范围,AKTAPrimer,.,22,实验题目蛋白质脱盐,实验目的1.了解层系技术的理念,基本操作和应用2.掌握分子筛层析的原理,了解其用途;3.熟悉AKTAPrime的操作。实验原理,实验的基本内容,.,23,实验材料,层析介质葡聚糖凝胶G25分离对象脱除含1M硫酸铵的小牛血清中的盐实验试剂0.15M的氯化钠溶液,.,24,实验注意事项,设置限压0.3MPa。排尽注射器内的空气,从上样阀注入样品环,注射器放在原位不拔出。,.,25,实验思考题,蛋白质分离纯化的方法有哪些?请列举2种以上,并阐述其原理。利用凝胶层析法分离混合样品时,怎样才能得到较好的分离效果?现有含谷氨酸(Glu)、甘氨酸
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