微生物标本的采集方法与运送PPT课件

临床微生物检验标本的采集,我们应该追求：“准确的病原学诊断”“针对性病原学治疗”正确的微生物标本采集和运送，是准确的病原学诊断的前提！,微生物让人类步步为营,基本原则,1.及时采集微生物标本作病原学检查（早期采集）2.在抗菌药物使用前采集标本（早期采集）3.采样时严格执行无菌操作（无菌采集）4.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂（无菌采集）5.送检标本应注明来源和检验目的6.采样后立即送检7.做好防护（生物安全）,如何提高细菌阳性检出率？,标本采集时机标本采集方法标本的质与量标本的运送与保存镜检筛选合格标本（退检制度）高质量、多种分离培养基培养环境,二、标本的处理,一些对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送。其他所有的标本采集后最好在2h之内送到实验室。若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存，如支气管洗液、心包液、痰、尿等标本应保存在4环境中，脑脊液等则要在25保存。患者标本中可能含有大量致病菌，不管标本运送距离远近，都必须注意安全防护。标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装好，防止送检过程中倒翻或碰破流出。,最有价值的细菌学检测项目,血液培养脑脊液培养脓液培养痰液培养粪便培养尿液培养生殖道标本培养厌氧标本培养其他无菌体液培养,血培养标本采集与运送,血培养是进行血流感诊断的最佳手段,血培养概念:,采集患者的血液或无菌体液标本,送至微生物实验室培养检测.检测原本无菌的血液及体液中是否有细菌存在.如有细菌,则极有可能为致病的细菌.进一步进行鉴定/药敏试验.,完整的血培养过程,医师开出送检单护理人员收集送检样本实验室检测、分离并鉴定导致血流感染的微生物三级报告：为临床医生提供抗菌药物敏感性试验结果,目前血培养的问题：,采血时机不合适采血套数不够采血量不足只做需氧培养，不同时做厌氧培养采血前或采血时正在使用抗生素治疗,血流感染与血培养的规范实践,“只有在发热时，才需要进行血培养。”,关于血培养指征,想采就采,？,血培养的指征,当怀疑血流感染或脓毒症时，应常规行血培养怀疑患者有血流感染的症状有：不明原因的发烧(38)或体温过低(36)白细胞增多（10,000/ul），粒细胞减少（1,000ul）休克，寒颤，僵直严重的局部感染(脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂肾炎，腹部术后感染，)心率异常加快低血压或高血压呼吸频率加快,“何时采血进行血培养，无特殊时间要求。”,关于采血时机,？,采集血培养样本的最佳时间,尽可能在患者寒战或开始发热时采血在患者接受抗生素治疗前采血如患者已经应用抗菌药物进行治疗，应在下一次用药之前采血培养,采血部位,通常采血部位为肘静脉。疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜。对疑为细菌性骨髓炎或伤寒患者，在病灶或者髂前（后）上棘处严格消毒后抽取骨髓1ml作增菌培养。常规血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置中采集，检出污染或定植菌的可能性较大,“为减轻患者痛苦，只从一个穿刺部位采一份血液标本即可。”,关于采血套数及部位,？,基本概念,成人“一套”血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶各一个，也叫“一份”注意：一次穿刺采血，算“一套”，采集第二套应从另一个穿刺点获得。儿童一般只做需氧培养，但仍需从多个部位采集多次。特殊患者才考虑厌氧培养。,采血套数,Weinsteinetal.DetectionofBloodstreamInfectionsinAdults:HowManyBloodCulturesAreNeededJClinMicrobiol.2007;45:3546-3548,表皮葡萄球菌的临床意义,23套血培养，有助于污染的判断。,Tokars,JI.ClinInfectDis2004;39:333,污染菌,致病菌,？,采集1套无法判断是病原菌还是污染菌。,关于血培养套数与采血部位,每位患者每次采血最少2套，3套更好初发患者，绝不能只采1套标本多个穿刺部位采血。因多部位同时发生污染的几率较小，便于对结果进判断,“两套血培养采集间隔无特殊要求。”,关于采血间隔,？,关于标本采集间隔时间,只要怀疑血液细菌感染，应即刻采集。采血培养应该尽量在使用抗菌药物之前进行，在1h内采集23次做血培养。对间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来之前0.51h采集血液，或于寒战或发烧后1h进行。入院前两周内接受抗菌药物治疗的患者，连续3d，每天采2份。可疑细菌性心内膜炎，在1到2小时内采集3份血标本，如果24小时后阴性，再采集3份以上标本,“每瓶采集多少血液无特殊要求。”,关于采血量,？,采血量(ml)与检出率的关系,Overall,血培养物每增加一毫升，真性菌血症成年人微生物的检出率增加3,但并非越多越好，超过一定数量的采血量会稀释培养瓶内的肉汤，使肉汤无法有效中和血中的抑制物质（补体、抗体、抗生素）。所以血液与肉汤的最佳比例为1：51：10,关于采集血液量,采血量是影响灵敏度最关键因素成人一份标本2个培养瓶（需氧厌氧），每瓶810ml，共20ml；要求至少采两份标本，即40ml。儿童一般只需采集需氧瓶，在保证采集血量1总血量下，一般为15ml采血量不足时应优先保证需氧瓶，因临床90以上的感染为需氧菌或兼性需氧菌感染,先采生化、凝血标本，再采血培养标本。”,关于各种血液标本的采集顺序,？,血培养对无菌操作的要求比注射、采集生化、凝血等其它标本要高。所以要最先采集血培养标本。污染率的指标是50ml、盒盖易于开启，不含防腐剂和抑菌剂。标本采集后应及时送检、及时接种，室温下保存时间不得超过2小时（夏季保存时间应适当缩短或冷藏保存），4冷藏保存时间不得超过8小时。但应注意淋病奈瑟菌培养时标本不能冷藏保存。,二、常见病原体,尿液中常见病原体：80%为革兰阴性杆菌，其中以大肠埃希菌最为常见。20%为革兰阳性菌，其中以肠球菌为多见。此外，真菌感染也增多，尤其是念珠菌,尿液中常见病原菌,革兰染色阳性菌革兰染色阴性菌金黄色葡萄球菌淋病奈色菌肠杆菌科大肠埃希菌链球菌属菌种沙门菌属菌种肠球菌属菌种肺炎克雷伯菌腐生葡萄球菌肠杆菌属菌种棒状杆菌属菌种变形杆菌属菌种分枝杆菌属菌种沙雷菌数菌种真菌假单胞菌属菌种,生殖道标本,生殖道标本采集,1尿道分泌物：A男性清洗尿道口，用棉拭子采取从尿道口溢出的脓性分泌物或插入尿道内24厘米取出分泌物。B女性清洗尿道口，用灭菌拭子轻轻深入前尿道内，旋转拭子采集标本。2阴道分泌物扩张阴道，用灭菌棉拭子采集阴道口内4厘米内侧壁或后穹隆处分泌物培养。3宫颈分泌物扩张阴道，用灭菌棉拭子插入宫颈管2厘米采取分泌物，转动并停留1020秒，让拭子充分吸附分泌物，或用去针头的注射器吸取分泌物，将所采集分泌物置入灭菌试管内送检。4前列腺液清洗尿道口，冲洗尿道膀胱，按摩前列腺，使前列腺液溢出，用无菌容器收集。5精液受检者应在五天以上未排精，清洗尿道口，采用手淫法或体外排精法，射精于无菌容器送检。,厌氧培养标本的采集,一、标本采集与运送,标本的采集与运送是否适当，对厌氧菌培养能否成功至关重要。注意：标本不能被正常菌群所污染。应尽量避免接触空气。,标本的采集方法,一般情况下，应从无正常菌群寄居的部位采取标本。不宜做厌氧菌培养鼻咽拭子；齿龈拭子；痰和气管抽取物；胃和肠道内容物、肛拭；接近皮肤和黏膜的分泌物；褥疮溃疡及黏膜层表面；排出的尿或导尿；阴道或子宫拭子；前列腺分泌物。经皮肤黏膜组织采集标本时，皮肤表面需要2%碘酒消毒，以防正常菌群的污染。采取标本时应尽量避免接触空气，多使用针筒抽取，减少标本与空气接触的机会。,二、临床常见的厌氧菌,厌氧菌（anaerobicbacteria）是指一大群在有氧条件下不能生长，必须在无氧条件下才能生长的细菌。厌氧菌分为两大类：一类是有芽胞的革兰阳性梭菌，另一类是无芽胞的革兰阳性及革兰阴性的杆菌与球菌。根据革兰染色性、形态、鞭毛、芽胞、荚膜和代谢产物等可将无芽胞厌氧菌分成40多个菌属，300多个菌种和亚种；有芽胞厌氧菌只有一个菌属，即梭菌属，共130个种。厌氧菌广泛分布于自然界和人体中。除梭状芽胞杆菌能以芽胞的形式在自然界中长期存活外，其他绝大多数无芽胞厌氧菌均存在于人和动物体内。在人体正常菌群中，厌氧菌占有绝对优势。,三、临床意义,正常情况下，厌氧菌同需氧菌及兼性厌氧菌之间保持着微生态的动态平衡。如长期使用广谱抗生素、激素、免疫抑制剂等，在发生菌群失调、机体免疫力下降或细菌进入非正常寄居部位时，这些厌氧菌即可作为条件致病菌导致内源性感染。厌氧菌分布十分广泛，是体内正常菌群的组成成员，多为条件致病菌；厌氧菌的感染遍及临床各科，且多为混合感染；厌氧菌对常用的氨基糖甙类抗生素耐药，而对甲硝唑普遍敏感。,（一）厌氧菌感染的条件,在正常情况下，人体组织的氧化还原电势（Eh）可阻止厌氧菌的繁殖。组织缺氧或氧化还原电势降低均可造成厌氧菌生长繁殖的适宜环境，易于遭受厌氧菌感染。机体免疫功能下降，易并发厌氧菌感染。如接受免疫抑制剂、抗代谢药物、放射治疗、化学药物治疗的患者，其全身免疫功能受损，厌氧菌感染率相当高。一旦厌氧菌进入适合其生长繁殖的感染部位，即可进行繁殖和损伤组织，由坏死组织吸收余氧，进而降低Eh，更有利其大量繁殖，产生内毒素、外毒素、侵袭性酶、酸类、气体及其他毒性产物，造成组织进一步损伤、坏死和全身中毒。,（二）厌氧菌感染的临床特征凡有下列情况者应怀疑厌氧菌感染：,感染组织局部产生大量气体某些厌氧菌可产生大量气体，造成组织肿胀和坏死，皮下有捻发音，通常是产气荚膜梭菌感染的特征。感染部位多发生在黏膜附近口腔、肠道、鼻咽腔、阴道等黏膜，均有大量厌氧菌寄生，这些部位及其附近有破损，极易发生厌氧菌感染。深部外伤如枪伤后，人或动物咬伤后的继发感染，均可能是厌氧菌感染。分泌物有恶臭，或为暗血红色，并在紫外光下发出红色荧光，均可能是厌氧菌感染。发红色荧光的分泌物，可能有产黑色素普鲁沃菌和不解糖紫单胞菌；分泌物或脓汁中有硫磺颗粒，为放线菌感染。长期应用氨基糖甙类抗生素治疗无效的病例、新近有流产史者，以及胃肠手术后发生的感染，均有可能是厌氧菌感染。分泌物涂片经革兰染色，镜检发现有细菌，而常规培养阴性者；或在液体及半固体培养基深部长的细菌，均可能为厌氧菌感染。,人体各部位常见正常菌群,皮肤：葡萄球菌属、JK棒状杆菌、痤疮丙酸杆菌、革兰阳性厌氧杆菌、革兰阳性厌氧球菌铜绿假单胞菌口腔：肺炎链球菌、草绿色溶血链球菌、肠球菌、奈瑟球菌属、大肠杆