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kozak序列kozak序列: Kozak consensus sequence, Kozak consensus or Kozak sequence 人类起始密码子周围的序列存在于真核生物mRNA的一段序列,其在翻译的起始中有重要作用。 核糖体能够识别mRNA上的这段序列,并把它作为翻译起始位点。注意这段序列并不是ribosomal binding site (RBS)核糖体结合位点,而是帽子结构。 真核生物基因中起始密码子上下游的最佳序列为,-3位为嘌呤碱基;+4位为G,起始密码子AUG中的A处于+1位。A/GCCAUGG被称为kozak序列或扫描序列。 KOZAK是一个女科学家,她研究过起始密码子ATG周边碱基定点突变后对转录和翻译所造成的影响,并总结出在真核生物中,起始密码子两端序列为: G/N-C/N-C/N-ANNATGG,如GCCACCATGG、GCCATGATGG时,转录和翻译效率最高,特别是-3位的A对翻译效率非常重要。该序列被后人称为Kozak序列,并被应用于表达载体的构建中。 所谓Kozak规则,即第一个ATG侧翼序列的碱基分布所满足的统计规律,若将第一个ATG中的碱基A,T,G分别标为1,2,3位,则Kozak规则可描述如下: (1)第4位的偏好碱基为G; (2)ATG的5端约15bp范围的侧翼序列内不含碱基T; (3)在-3,-6和-9位置,G是偏好碱基; (4)除-3,-6和-9位,在整个侧翼序列区,C是偏好碱基。 Kozak规则是基于已知数据的统计结果,不见得必须全部满足,一般来说,满足前两项即可。 真核引物设计需在ATG前加上GCCACC 不论全长还是部分,在做真核表达时,一般都要带上kozak序列,用部分cDNA时,还要加上ATG。多加一些上游序列对你有利,因为一些上游序列自带KOZAK序列;或其他促进表达的序列。.有利于引物设计,因为从ATG开始设计引物,不是每个基因都可以的。引物扩增时头几个容易错,在上游序序列就没关系了。 加Kozark sequence(GCCACC),kozak sequence是用来增强真核基因的翻译效率的。是最优化的ATG环境,避免ribosome出现leaky scan在真核起始过程中,由Met-tRNAi,eIF-2和GTP形成了三元复合体(ternary complex)再结合40S小亚基形成前起始复合物(preinitiation complex)。此复合物的形成分为二步:首先GTP和eIF-2结合,以增加此因子与Met-tRNA结合的效率。然后三元复合体再与40S亚基结合。核糖体结合位点由起始密码子所决定,在某些起始密码子上游邻接序列也可能十分重要,被称为Kozak序列(ACCAUGG)
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