CTAB法提取基因组DNAVIP

CTAB法30提取玉米（或其它植物）基因组DNA1) 取0.51 g玉米叶片，加入液氮粉碎，加入2mL 2% 65保温的2CTAB抽提液，混匀，65保温3060min。2) 加入等体积的氯仿/异戊醇（24：1），轻缓颠倒混匀，10000r/min，离心5min。3) 取上清，加入1/10体积（约0.2mL）的65的10CTAB/NaCl溶液，颠倒混匀。4) 用等体积的氯仿/异戊醇（24：1）抽提，10000r/min，离心5min。5) 取上清，加入（正好）等体积的CTAB沉淀液，颠倒混匀，如沉淀可见，继续做下步，否则，65保温30min。6) 4，2700 r/min，离心5min。7) 去上清，用高盐的TE buffer重悬（0.250.5mL）。（可65保温30min，至大部分溶解）。8) 加入0.6体积的异丙醇沉淀核酸，充分混匀，4，10000 r/min，离心15min。9) 去上清，80%乙醇洗涤沉淀，干燥，用尽可能少的TE buffer重悬。高盐的TE buffer 终浓度 配制50ml10mM Tris.Cl, pH8.0 0.5ml(1M 母液)0.1mM EDTA, pH8.0 0.01ml(0.5M 母液)1M NaCl 1.8g室温可保存几年CTAB提取液终浓度 配制200ml2%(W/V) CTAB 4g100mM Tris.Cl, pH8.0 20ml(1M 母液)20mM EDTA, pH8.0 8ml(0.5M 母液)1.4M NaCl 10.22g室温可保存几年10CTAB/NaCl溶液(10%CTAB/0.7M NaCl)在80ml H2O中溶解4.1g NaCl，缓慢加入10g CTAB，同时加热并搅拌。如果需要，可加热至65溶解。定容至100ml。CTAB沉淀液终浓度 配制100ml1%(W/V) CTAB 1g50mM Tris.Cl, pH8.0 5ml(1M 母液)10mM EDTA, pH8.0 2ml(0.5M 母液)室温可保存几年CTAB法提取植物干品（或真菌）基因组DNA（自己改进版）10) 取0.2g叶片，加入液氮粉碎，加入800L 2% 65保温的2CTAB抽提液，混匀，65保温3060min。11) 加入600L的氯仿/异戊醇（24：1），轻缓颠倒混匀，10000r/min，离心5min。12) 取上清(约600L)，加入1/10体积（约60L）的65的CTAB/NaCl溶液，颠倒混匀。13) 用等体积(约600L)的氯仿/异戊醇（24：1）抽提，10000r/min，离心5min。14) 取上清(约450L)，加入0.8体积的异丙醇沉淀核酸，颠倒混匀，（如沉淀可见，继续做下步，否则，-20保温1020min）。15) 4，12000 r/min，离心10min。16) 去上清，用高盐的TE buffer重悬（约100L），（可65保温30min，至大部分溶解, 加(1 L) Rnase A (10 mg/mL) 37 30-60min。17) 加入0.8体积的异丙醇沉淀核酸，充分混匀（如没有沉淀，-20保温1020min），4，12000 r/min，离心15min。18) 去上清，70%乙醇洗涤沉淀，干燥，用尽可能少的TE buffer重悬（3060L）。以0.8%琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA大小及提取质量；紫外分光光度计法检测DNA纯度（将DNA稀释50倍后分别测OD260和OD280，并计算OD260/OD280的比值）。CTAB法提取植物基因组DNA（改进版）19) 取0.2g叶片，加入液氮粉碎，加到2ml离心管，加入1000L 2% 65保温的2CTAB抽提液，混匀，65保温3060min。20) 加入900L的氯仿/异戊醇（24：1），充分混匀，12000r/min，离心15min。21) 取上清(约850L)，加入1/10体积（约85L）的65的CTAB/NaCl溶液，颠倒混匀。22) 用等体积(约850L)的氯仿/异戊醇（24：1）抽提，12000r/min，离心15min。23) 取上清(约700L)，加入等体积的异丙醇沉淀核酸，充分混匀，（ -20过夜）。24) 4，12000 r/min，离心20min。25) 去上清，用高盐的TE buffer重悬（约400L），（可65保温30min，至大部分溶解, 加(4-6 L) Rnase A (10 mg/mL) 37 30-60min。26) 加入等体积的异丙醇沉淀核酸，充分混匀（-20 1-2h），4，12000 r/min，离心20min。27) 去上清，75%乙醇洗涤沉淀，干燥，用尽可能少的d