血液学检验及临床应用PPT课件

1,.,1,血液学检验及临床应用,绿洲医院检验科,1,.,2,阴道分泌物检查,1,.,3,MajorObjectives,掌握阴道分泌物理学检查、病原生物学检验熟悉细菌性阴道病的发病机理和阴道分泌物检查的质量控制了解生理状态下，女性阴道的组织解剖学、生理学特点和阴道分泌物标本的采集重点阴道分泌物理学和病原生物学检验难点阴道分泌物病原微生物形态学特征,上页,1,.,4,概述,为女性生殖系统分泌的液体，主要由阴道粘膜渗出液、宫颈腺体及子宫内膜分泌物混合而成，总称阴道分泌物，又称“白带”(1eukorrhea)。,阴道分泌物(vaginaldischarge),上页,1,.,5,不同时期女性阴道的结构和功能特点：1、阴道的组织解剖学特点,上页,1,.,6,青春期：雌激素上皮增厚，层次,2、生物化学作用,表层,中层,底层,绝经期：雌激素缺乏上皮变薄,上页,1,.,7,表层细胞角化的阴道鳞状上皮（10100）,上页,1,.,8,中层阴道鳞状上皮细胞（1040）,返回,上页,1,.,9,第一节标本采集与处理,-采集前24h禁止性交、盆浴、阴道灌洗及局部用药等-采样所用器具必须清洁干燥、无菌、无化学药品或润滑剂-应根据不同的检查目的来选择采集部位-应根据不同检测方法进行阴道分泌物涂片的制备-采集后立即送检,阴道分泌物采集要求：,返回,上页,1,.,10,标本采集及处理,阴道分泌湿片显微镜检查【标本采集】1.插入窥器，暴露阴道和宫颈后，观察分泌物的色泽，用灭菌试子从阴道上1/3处取分泌物。【方法与结果】在载培片上加1滴或2滴生理盐水，将阴道分泌物与生理盐水混合成悬液，加盖玻片后，在显微镜下检查。将阴道分泌物加生理盐水作涂片，用高倍镜检查，主要依靠上皮细胞、杆菌与球菌的比例、白细胞的数量划分清洁度。,1,.,11,标本采集及处理,在低倍镜（1010）下检查，寻找呈典型晃动运动的毛滴虫。在高倍镜（1040）下检查，观察假丝酵母菌（孢子和假菌丝）和毛滴虫，以及线索细胞。线索细胞为阴道上皮细胞表面吸附或聚集着许多球杆菌，是细胞呈颗粒状外观，细胞边缘模糊不清呈锯齿状。注：将标本溶于一滴生理盐水，并加入一滴10%KOH溶液，更容易识别假丝酵母菌，因为KOH能将其他细胞溶解。,1,.,12,标本采集及处理,【临床意义】阴道分泌物清洁度分级的临床意义湿片检查见到活动滴虫，可诊断滴虫性阴道炎，但其敏感性仅38%-82%，尤其是对无症状的滴虫感染者诊断率较低。湿片中观察到假丝菌或芽生孢子支持假丝菌性阴道病的诊断，10%KOH湿片检查的敏感性85%。,1,.,13,标本采集及处理,一般认为当线索细胞占全部上皮细胞的20%-96%以上时为线索细胞阳性。根据线索细胞能准确诊断85%至95%的细菌性阴道病。卵巢功能不足、雌激素减低、阴道上皮增生较差时可见到阴道杆菌减少，易感染。当清洁度为-度时常可同时发现病原微生物,提示存在感染引起的阴道炎和/或宫颈炎/盆腔炎。,1,.,14,标本采集及处理,【判断结果】在油镜下（fOX100）下检查涂片、观察阴道菌群的情况及有无线索细胞。正常阴道菌群以乳酸杆菌占优势，可能有少量的球菌和棒状杆菌。乳酸杆菌为大的革兰阳性杆菌，末端钝圆或平齐，呈单根、链状或栅栏状排列。细菌性阴道炎是乳酸杆菌减少或消失，而其它细菌增多，呈混合菌群。阴道加德纳菌为革兰染色不定性球杆菌，厌氧菌包括动弯杆菌、普氏杆菌或阳性球菌。,1,.,15,标本采集及处理,2、阴道分泌物涂片革兰染色显微镜检查【标本采集】插入窥器，暴露阴道和宫颈后，观察分泌物的外观，用棉拭子从阴道壁上1/3处取分泌物。阴道分泌物标本采集前24小时（最好72小时）内禁止性交、盆浴、阴道灌洗及局部用药等，以免影响检查结果。分泌物经固定于革兰染色后，置于显微镜下观察。,1,.,16,标本采集及处理,【临床意义】革兰染色镜检观察细菌的染色性、形态和排列，观察假丝酵母菌孢子和假菌丝。革兰染色镜检观察阴道分泌物中线索细胞的敏感性和特异性高于湿片法，分别为89%和93%。,1,.,17,标本采集及处理,3.宫颈分泌物涂片革兰染色显微镜检查【标本采集】插入窥器，暴露阴道和宫颈后，如果宫颈口外面的分泌物较多，先用灭菌拭子清楚过多的分泌物。将女用取材拭子插入宫颈管内1-2cm，稍用力转动，停留10-30秒后取出。分泌物经固定于革兰染色后，置于显微镜下观察。,1,.,18,标本采集及处理,【临床意义】宫颈分泌物涂片革兰染色镜检多形核白细胞数I15/HPF，或油镜下可见每视野多形核白细胞10个提示有宫颈感染，为诊断粘液脓性宫颈炎的指标之一。革兰染色诊断宫颈淋病奈瑟球菌感染于培养的符合率50%-70%，确诊需做淋病奈瑟菌培养。,1,.,19,标本采集及处理,1,.,20,第二节阴道分泌物理学检查,一、颜色与性状二、阴道清洁度三、阴道分泌物pH测定,上页,1,.,21,一、颜色与性状,白色稀糊状、透明似蛋清，无气味、量少等。,正常阴道分泌物:,上页,1,.,22,异常阴道分泌物:,常见于应用雌激素药物后卵巢颗粒细胞瘤,2.脓性：,多见于滴虫化脓性细菌感染,常见于滴虫性阴道炎,1.大量无色透明粘性：,上页,1,.,23,白色豆腐渣样或凝乳状小碎块,4.血性,分泌物内混有多少不定的血液，有特殊臭味,真菌性阴道炎的特征,可见于宫颈息肉、子宫粘膜下肌瘤等,3.豆腐渣样,上页,异常阴道分泌物:,1,.,24,返回,5.黄色水样,病变组织变性、坏死所致,常见于子宫粘膜下肌瘤、宫颈癌等,稀薄均匀粘度很低,见于细菌性阴道病（bacterialvaginosis，BV）,6.灰白色奶油样,上页,异常阴道分泌物:,1,.,25,二、阴道清洁度,根据阴道分泌物生理盐水涂片，高倍镜下观察白细胞、上皮细胞、乳酸杆菌与杂菌的多少初步判断。,上页,1,.,26,阴道分泌物清洁度分级,上页,1,.,27,返回,上页,1,.,28,三、阴道分泌物pH测定,一般采用pH试纸测定法正常：阴道分泌物呈酸性pH4.5(多在pH44.5之间)pH值增高：正常见于幼女和绝经期妇女异常见于各种阴道炎,返回,上页,1,.,29,第三节阴道分泌物病原生物学检验,一、阴道毛滴虫(trichomonasvaginalis,TV)二、细菌1.阴道加德纳菌(gardnerellavaginalis，GV)2.弯曲弧菌（Mobilancus）3.淋病奈瑟菌（Neisseriagonorrhoeae）三、阴道真菌（vaginalfungus）,上页,1,.,30,阴道毛滴虫,阴道的致病性厌氧寄生原虫，虫体为845m，呈梨形或椭圆形，无色透明，大小多为WBC的23倍,细胞核,前鞭毛,后鞭毛,波动膜,轴柱,上页,1,.,31,阴道毛滴虫形态（生理盐水涂片）,上页,1,.,32,阴道毛滴虫形态（革兰染色）,梨形,园形、三角形,无色透明环,上页,1,.,33,阴道毛滴虫形态（革兰染色）,皱缩形,异形,上页,1,.,34,阴道加德纳菌(gardnerellavaginalis，GV),为革兰阴性或染色不定（有时可呈革兰阳性）的球杆菌，有细胞壁，无鞭毛，不形成荚膜和芽胞兼性厌氧最适温度3537最适pH6.06.5，pH4.5时不易生长，pH4.0不生长,上页,1,.,35,革氏染色：大小：O.5m1.5m2.5m；形态：具有多形性，呈小杆状或球状；排列：呈单个或成双排列。正常：无此菌或仅见少许。细菌性阴道病：可见到大量的加德纳菌。,上页,1,.,36,返回,上页,1,.,37,弯曲弧菌(Mobilancus),为厌氧菌革兰氏阴性弧菌形态：呈弧形，两端尖细；排列：呈单个或呈双排列。正常：无此菌或仅见少许。细菌性阴道病：除最常见的是加德纳菌外，其次是动弯杆菌。,上页,1,.,38,革兰氏阴性弧菌,上页,1,.,39,线索细胞（cluecell）,是诊断BV的重要指标之一定义：是阴道鳞状上皮细胞的胞质表面粘附大量GV及Mobilancus或其他厌氧菌，其边缘不整齐，呈锯齿状，为线索细胞。,上页,1,.,40,上页,1,.,41,粘附大量细菌（美兰盐水湿片染色法）,上页,1,.,42,附：细菌性阴道病,阴道生态环境的改变，GV和大量致病性厌氧菌增多，GV可产生丙酮酸和氨基酸，脱羧基生成的胺促使阴道pH值升高；精液可使阴道pH值升高，在此环境下GV逐渐形成优势菌。厌氧菌产生的胺可导致上皮细胞脱落和大量分泌物排出，阴道分泌物中氨增加，产生特殊腥臭味，导致BV的发病。BV属STD。GV还可引起早产、产褥热、新生儿败血症。,上页,1,.,43,阴道分泌物增多，灰白色稀薄均匀如奶油样分泌物的pH值4.5胺试验阳性(即有鱼腥气味)线索细胞阳性。(以线索细胞检出20为阳性)，革兰染色见特定菌群分布第4项加上前3项中2项即可诊断BV,返回,实验室诊断标准：,上页,1,.,44,淋病奈瑟菌（Neisseriagonorrhoeae）,俗称淋球菌人类是淋球菌的唯一宿主，主要引起泌尿生殖系统粘膜的急性或慢性化脓性感染淋病是发病率较高的性传播疾病之一临床上多表现为急性症状，少数为慢性过程,上页,1,.,45,为革兰阴性双球菌形态：似肾形或咖啡豆状排列：常成双排列，凹面相对急性淋病患者的淋球菌常被吞噬于中性粒细胞内慢性淋病患者的淋球菌多分布在细胞外,上页,1,.,46,细胞内细胞外,上页,1,.,47,涂片革兰染色法将分泌物涂片作革兰氏染色后，选择细胞均匀部位，油镜观察；白细胞内或细胞外呈肾形或咖啡豆状，成对排列，凹面相对的革兰氏阴性双球菌；报告：找到“细胞内或细胞外革兰氏阴性双球菌”。,检查方法及方法学评价：,上页,1,.,48,涂片革兰染色法简便、快速，阳性结果结合不洁性生活史及症状，即可作出初步诊断。但病情较轻者，涂片中淋球菌较少，形态不典型，又位于细胞之外时，则往往难以下结论。还必须从形态上与其他革兰阴性双球菌鉴别。,上页,检查方法及方法学评价：,1,.,49,淋病奈瑟菌形态鉴别,淋球菌其他革兰阴性双球菌,上页,最终靠培养鉴定,1,.,50,培养法是诊断淋病的重要手段对于涂片检查呈阴性的可疑患者，可作淋球菌培养,上页,检查方法及方法学评价：,1,.,51,淋球菌直接玻片协同凝集反应淋球菌的抗体致敏具有SPA的金黄色葡萄球菌可以和分泌物中的淋病奈瑟球菌抗原发生凝集反应。简便、快速、特异性高。,上页,检查方法及方法学评价：,1,.,52,多聚酶链反应(PCR)法可检测到微量的淋球菌DNA，敏感性较高。但也正由于敏感性很高，所取标本即使仅有极微量的污染，也可显示为阳性。,上页,检查方法及方法学评价：,1,.,53,直接荧光抗体染色法将抗淋球菌抗体用荧光素标记以后，加到可疑病人的涂片上，如为阳性，则可在荧光显微镜下见到发特异荧光的淋球菌。简便、快速，对死菌也可呈现阳性。,返回,上页,检查方法及方法学评价：,1,.,54,阴道真菌,一种条件致病菌，约1015的健康妇女阴道内寄居有念珠菌，平时并不致病当阴道抵抗力降低或局部环境改变时，容易引起真菌性阴道炎，属于性传播疾病使人类致病的阴道真菌85%为白色念珠菌,上页,1,.,55,找到真菌为诊断真菌性阴道炎的依据可直接作阴道分泌物涂片检查。采用湿片法、染色法或培养法,上页,检查方法：,1,.,56,湿片法：取10氢氧化钾或盐水涂片镜检，找到单个或成群卵圆形、无色透明的孢子或假菌丝或菌丝，即可报告“找到真菌”；该法在识别孢子或假菌丝或菌丝上较染色法困难。,上页,1,.,57,阴道真菌（湿片法：真菌孢子、菌丝）,上页,1,.,58,革氏染色法：取少许阴道分泌物涂片，风干后革兰染色，油镜下寻找革氏阳性的孢子、菌丝或假菌丝,孢子,菌丝孢子,上页,1,.,59,返回,阴道真菌常可与其他病原生物发生混合感染,上页,1,.,60,革兰氏染色法,革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：载玻片固定。在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，固定。草酸铵结晶紫染1分钟。自来水冲洗，去掉浮色。用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。,1,.,61,革兰氏染色法,用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。用复红染液复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌即被区别开。,1,.,62,革兰氏染色法,革兰氏染色步骤：加结晶紫12滴1分钟后自来水冲洗加碘液12滴30秒后自来水冲洗加脱色液1滴1530秒内自来水冲洗加复红1滴515秒内自来水冲洗。,1,.,63,第四节阴道分泌物检查的质量控制,严格做好实验前质量控制，把好标本采集送检关严格做好实验中质量控制，把好标本的检测关严格做好实验后质量控制，把好检测结果报告关,上页,1,.,64,一、严格做好实验前质量控制把好标本采集送检关,及时告知患者正确做好采样前的准备；严格按照阴道分泌物采集要求进行采样送检在寒冷天气，检查TV的标本要采取保温措施送检，防止TV活动能力明显减低或死去，使湿片法检出率降低；淋球菌易自溶，可使阳性标本变成阴性结果，因此，采