流式细胞仪分析技术应用PPT课件

.1，实验室流式细胞术单细胞分类技术，2，flow cytometry(FCM)是一种快速准确地定量分析和分类单个细胞理化特性的新技术。3，流式细胞术最大的特点是在不破坏细胞及小器官或粒子的结构和功能的情况下，在荧光探针的帮助下，在分子水平获得多个信号，对细胞进行定量分析或纯化。细胞不破坏，快速，大量，准确，敏感，定量，流式细胞术的特点。4，(1)流动系统(2)光学系统(3)数据处理系统，1。流式细胞术的基本结构：5，通过流式细胞仪进行细胞分类，主要是在需要进一步培养和研究具有某种特性的细胞时进行的。细胞分类原理，6，压电晶体，机械振动，充电，充电，(a)分类基本原理，7，分类速度：单位时间内分类的细胞数。与悬浮液中的细胞含量成正比。分类纯度：除以所有收获的细胞的比例，选择的目的细胞。排序收获量：设置实际收获的分离细胞和通过测量点的分离细胞的比例。纯度成反比。分类产量：您可以在细胞悬浮组中确认目标细胞的总量，然后获得分类后目标细胞的实际产量。与分类速度成反比。(b)排序的技术要求，8，参数：FS，SS，FL数据显示方法(单参数直方图，双参数散点图，二维轮廓，假三维轮廓，三参数散点图)门分析技术，第二节数据显示和分析，9，FS:反映粒子大小SS:反映粒子内部结构复杂性FL:反映粒子荧光的数量，一，参数，10，单参数直方图2参数直方图：点图二维轮廓3参数直方图多参数分析，直接分析矩形图，语句分析：REGION和GATE设置，2，数据显示方法，11，由一维参数(散射光或荧光)和粒子数(计数)组成，反映相同散射光或荧光强度的粒子数。(a)单参数直方图，12，单参数直方图，相对单元格数，13，双参数直方图：纵轴和横轴分别表示被测量细胞的两个测量参数，可以根据这两个参数确定细胞在图表中的表示位置。双参数信号通常使用对数信号，最常用的点是点密度图。其中，每个点代表一个细胞，点图表示使用粒子密度反映相同散射或荧光强度的粒子数。(b) 2参数直方图，14，1。双参数直方图点图，15，2。由二维等高线、相似地图的等高线组成，其本质也是双参数直方图。在轮廓图中，每个连续曲线都有相同的细胞相对或绝对代数，即“轮廓”。曲线的水平越高(越是内线)，代表的细胞就越多。等高线越密，细胞数量的变化率就越高。16，二维等高线，17，3。假三维等高线，18，(3) 3参数直方图，19，多参数分析：细胞用多色荧光表示，受激发光激发后，结果荧光信号和散射光信号可以根据需要进行联合分析。(4)流式细胞术的多参数分析，20，Gate设置：从其中一个选定参数的直方图中选择要分析的特定细胞组(根据该图表中单元格组的分布)，并要求该样本的所有其他参数组合的直方图仅反映该细胞的分布。根据门的形状，它将再次分为线性门、矩形门、圆形门、多边形门、任意形状门和十字形门。，第三，门分析技术，21，A淋巴细胞b单核细胞c中性粒细胞A，b，c都是任意球，22，线性门，23，样品制备标记染色液相芯片技术质量管理，4节流式细胞术免疫测定技术要求，24、外周血淋巴细胞样品制备分离单个核细胞培养细胞的样品制备蛋白酶消化系统吹炼，使附着细胞脱落，清洗尼龙网过滤，第一，准备免疫检查样品。25，制备机器酶处理化学试剂处理新鲜物理组织单细胞悬浮液，表面活性剂处理单细胞悬浮液保存低温(1年)乙醇或甲醇保存(2周)甲醛或聚甲醛保存(2月)，26，1 photospherebufferinsalineorhbss(ca/mg free)1mm EDTA 25 mmhepeph 7.01 bovine serum(heat-in activated)，27，淋巴细胞：1xHBSS(withCa /Mg这些细胞不容易聚集，所以即使公式中没有EDTA，也不会出现问题。粘合细胞(stickycells):升高EDTA 5mM，使用透析后的FBS(againstCa /Mg freePBS)。有些细胞活性比较粘，EDTA抑制了这种情况。 28，附着细胞株：用Trypsin处理后，准备单细胞悬浮液时，使细胞变圆(记住不要过度作用)，5%的血清培养液含有5ml，均匀粉碎细胞悬浮液。离心后，使用索丁布调整细胞浓度。如果需要，可以增加EDTA浓度(5mM)，防止细胞再次点燃。Sortingbuffer 5mMMgCl2和25至50g/mLDNAaseI(SigmaD-4513)或Sortingbuffer 0.83mMMgCl2和20 udnaseii(SIG mad)这种制造方法减少了死细胞释放的DNA引起的细胞粘连现象。29、尽可能地荧光光谱重叠小路西法PE-Cy5/APCFITC-Isotype:设定语音调节门，消除抗体非特异性吸附的影响2/CD34-PE；FITC-Isotype:端阳管控制，校正3/cd38-fittc设置；PE-Isotype:端阳管控制，补偿设置4/CD34-PE；CD38-FITC:检测和分类管道，49，处理红细胞物理组织标本的适当准备方法机械温度