血小板抗原、抗体检测和应用.ppt

2020/6/8,1,血小板抗原、抗体检测和应用广州血液中心付涌水,2018年广州地区采供血量,全血：53.11万单位（42.92万单位）机采血小板：6.95万治疗量（6.67万治疗量）手工分离血小板：101366U2017年全国采血量：4956吨,2020/6/8,2,血小板抗原,血小板相关抗原：-白细胞抗原（HLA系统,HLA-I）.-红细胞抗原（血型系统,ABH、Lewis、I及P）.-其它（CD36）血小板特异性抗原(HPA):-血小板表面膜糖蛋白Glycoprotein(GP).-共鉴定出38个抗原.,HPA等位基因频率,PrimoRoman,TransplantImmunologyVolume10;2002,Pages165-181,EuropeanBioinformaticsInstituteDatabase,CD36(GPIV)抗原缺失,Platelets:亚洲人:3-11%北美:2.5%非洲:7.8%高加索人:0.06%I型:AbsentfromPlateletsandMonocytes输血或怀孕存在免疫应答风险II型:AbsentfromPlateletsonly,亚太地区不同人群中CD36缺失I型分布频率,8,检测技术,HPA和HLA分型PLT抗体检测,HPA与HLA等位基因分型特异性血清分型,HPA抗体HLA抗体,1、HPA和HLA抗原基因分型技术,限制性片段长度多态性（RestrictionFragmentLengthPolymorphism，RFLP）序列特异性寡核苷酸探针技术（SequenceSpecificOligonucleotide,SSO）序列特异引物PCR技术（PCRSequenceSpecificPrimer,PCR-SSP）DNA测序（SBT）,方法,PCR-SSP:最简单常用，快速经济PCR-RFLP:繁琐，无法对HPA-4基因分型PCR-ASO:繁琐，不太容易判断结果DNA序列分析法:操作复杂，成本较高,2.抗体检测技术,-同种、自身,HPA抗体检测技术,酶联免疫吸附实验（enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）:MACE,PAKPLUS.固相红细胞粘附实验（SolidPhaseRedBloodCellAdherenceAssay，SPRCA）或混合细胞粘附实验（MRCA）免疫荧光法：血小板免疫荧光试验（PIFT）、流式细胞仪分析法（FCA）和抗原包被珠子介导的Plt相关抗体检测法(Luminexscreeningassay)单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验MAIPA,MACE,PIFT和MAIPA检测方法比较,2020/6/8,15,应用,血小板交叉配型,血小板输注无效的定义产生原因：HPA特异性抗体：占8%以PLT特异性糖蛋白抗体GPb/a抗体阳性为主，占HPA特异性抗体83.3%；经MAIPAPLT抗体特异性分析，50.0%患者存在抗HPA-3a抗体；33.3%患者HPA-3b抗体呈阳性，只有少量其他HPA抗体。HLA抗体为主，64%;HLA-类抗体中，以抗HLA-A2、-A11及-B40最为常见；CD36抗体：占16%自身抗体：12%,血小板输注无效,临床资料,MASPAT(交叉配型),PIFT,HLA+HPA基因分型,抗体特异性鉴定：抗HLA-class-I抗HPA药物性HPA抗体自身抗体,血小板交叉配型,CD36表达检测(流式法)；抗体特异性筛查(ELISA法、MAIPA)；交叉配型（固相凝集试验）。HLAmatchmaker:HLA三级结构的相似性来执行HLA配对的策略；,2020/6/8,18,建立HLA/HPA/CD36供者分型库,2020/6/8,19,CD36缺失供者库,2020/6/8,20,我国部分民族CD36在血小板上的缺失频率,2020/6/8,21,CD36缺失患者的输血,输什么样的血液：I型缺失还是II型缺失；,2020/6/8,22,疾病的诊断,1.新生儿同种异体免疫性血小板减少症(FNAIT）2.血小板输注无效(RTP）3.输血后紫癜（PTP）4.自身免疫性血小板减少症(AITP）5.输血相关急性肺损伤（TRALI）,23,FNAIT动物模型,2020/6/8,24,TRALI的小鼠模型,2020/6/8,25,不同组小鼠的PO2检测结果,2020/6/8,26,不同组小鼠的SO2检测结果,2020/6/8,27,支气管-肺泡灌洗液蛋白浓度检测结果,2020/6/8,28,小鼠肺湿/干重比及外部形态,2020/6/8,29,黎*，女，37岁，广西壮族，有反复流产史。血小板和单核细胞CD36表达流式检测：CD36I型缺失；（1）2009年，孕5月，胎死宫内，行引产术（第一次引产时输过血）；（2）2010年1月，孕7月，发现胎儿腹水，行引产术；（3）2011年，孕5+月，发现死胎，鼻部畸形，行引产术；（4）2013年8月，死胎，胎儿水肿，行引产术；（5）？（6）2015年，孕8月，生育水肿胎儿（7）2016年1月，孕3月，向*，黎*丈夫，湖南汉族，39岁，血小板抗体检测阴性，血小板和单核细胞CD36表达均呈阳性。,GPIV抗体引起的FNAIT病例,胎儿血小板CD36流式检测结果,血小板CD36表达阳性：一抗法Beckman单抗：阴性，一抗法4F9单抗：阳性抗人IgG：阳性,胎儿PLTs（来自脐血）直接与二抗（Goatanti-human-IgG：098）反应,患者抗体筛查结果胎儿抗体筛查结果,-HLAclassI：POS-HLAclassI：NEGGPIV（CD36抗体）：POS不规则抗体筛查：阴性Coombs：阴性夫妻双方染色体核型：正常血型：女方O，Rh（+）;男方A，Rh（+）其他检查：SLE、风湿组合、D二聚体等无异常,脐血结果（治疗前）,分别于孕23周+3、孕27周+1行脐穿：,antibody,Name,临床检测结果：B超结果,B超结果宫内妊娠，胎儿存活，胎儿发育相当于27+5孕周。胎儿异常：NF增厚，心脏扩大：腹水。大脑中动脉收缩峰值流速增高（1.5MOM），考虑胎儿贫血。,临床治疗（30周+）,为纠正胎儿严重贫血和血小板低下，宫内输注“O”型、CD36（-）红细胞（洗涤红细胞）：4次，0.5U/次宫内输注“O”型+CD36（-）机采血小板输注血小板：2次，0.5U/次,胎儿各阶段血常规,胎儿输血前血常规：Hb：39g/L，HCT：0.128，PLT：12X109/L,胎儿输血后血常规：Hb：113g/L，HCT：0.338，PLT：105X109/L,胎儿出生2天后血常规：Hb：161g/L，HCT：0.506，PLT：122X109/L,出生31周+,病人出院一周后，在顺德妇幼保健院，急产；胎儿出生后，状态尚可.,第八次怀孕：,实验室检测：超声检测（24周）：无水肿，但大脑中动脉仍升高（提示贫血）胎儿HPA抗体检测（26