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文档简介

.,题目：蛋白质沉淀反应,.,一、实验目的,掌握几种使蛋白质沉淀的方法；掌握蛋白质可逆沉淀与不可逆沉淀的区别；理解蛋白质变性和沉淀的关系。,.,二、原理,蛋白质是亲水胶体，正常状态下，蛋白质分子表面具有水化膜和电荷层，能保持其胶体溶液的稳定性，在一定因素的影响下，蛋白质会失去电荷和脱水沉淀。蛋白质的变性与沉淀之间没有必然联系,.,蛋白质沉淀反应（一）蛋白质的盐析作用（二）乙醇沉淀蛋白质（三）重金属盐类沉淀蛋白质（四）生物碱试剂沉淀蛋白质,.,（一）蛋白质的盐析作用,加盐类如硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等可以破坏蛋白质胶体周围的水膜，同时又中和了蛋白质分子的电荷，因此使蛋白质产生沉淀，这种加盐使蛋白质沉淀析出的现象称盐析。盐溶现象为低盐浓度可使蛋白质的溶解度增加，实验时要加足够量的盐。蛋白质的盐析作用是可逆过程，用盐析方法沉淀蛋白质时，较少引起蛋白质变性，经透析或用水稀释时又可溶解。,.,（二）乙醇沉淀蛋白质,有机溶剂如酒精、丙酮等可使蛋白质产生沉淀，这是由于这些有机溶剂和水有较强的作用，破坏了蛋白质分子周围的水膜，因此发生沉淀作用。若及时将蛋白质沉淀与丙酮或乙醇分离，蛋白质沉淀则可重新溶解于水中。,.,（三）重金属盐类沉淀蛋白质,溶液pH在蛋白质等电点以上时，重金属盐类(如Pb2+、Cu2+、Hg2+及Ag+等)易与蛋白质结合成不溶性盐而沉淀。重金属盐类沉淀蛋白质通常比较完全，故常用重金属盐除去液体中的蛋白质。但应注意，在使用某些重金属盐(如硫酸铜或醋酸铅)沉淀蛋白质时，不可过量，否则将引起沉淀再溶解。此时的溶解为生成憎水胶体的缘故。,.,（四）生物碱试剂沉淀蛋白质,生物碱是植物中具有显著生理作用的类含氮的碱性物质。凡能使生物碱沉淀，或能与生物碱作用产生颜色反应的物质，称为生物碱试剂。如鞣酸、苦味酸和磷钨酸等。当蛋白质溶液pH值低于其等电点时，蛋白质为阳离子，能与生物碱试剂的阴离子结合成性盐而沉淀。溶液中的蛋白亦能被有机酸沉淀，其中以三氯醋酸的作用最为灵敏而且特异。因此被用于蛋白质的首选沉淀剂，只能沉淀蛋白质，不能沉淀其水解产物，加热可除去。,.,三、实验材料,实验材料：鸡卵清蛋白液，吸管（1mlx4，2mlx4，0.5mlx1，5mlx2），试管（1.5x15cmx14），水浴锅，滴管，电炉实验试剂：苯酚（0.5%），硫酸铜（1%），硫酸铵固体，95%乙醇，NaCl，醋酸铅，鞣酸，苦味酸，冰醋酸
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