正相色谱柱的使用

.,正相液相色谱柱的使用与维护,.,分离模式的选择,.,正相吸附色谱极性:固定相流动相固定相-极性流动相(己烷,庚烷)-非极性极性物质后出峰,正相色谱,.,正相色谱柱的特点,.,色谱柱的分类,.,色谱柱的分类,按基质材料分类,硅胶基质柱,聚合物柱,ZrO2柱等,.,色谱柱的分类,.,正相液相色谱柱,正反相使用均可,绝不可沾水,正反相使用均可,.,正相色谱柱的活化,活化注意要点：1、保存溶剂：一般正相新柱出厂是用95%的正己烷：5%乙醇或纯异丙醇或正己烷保存；例外：比如氰基柱既可以用作正相柱，也可以用作反相柱，一些厂家就用纯甲醇封柱。2、异丙醇过渡：粘度大高柱压；小流速：0.2mLmin-1；先流路后过柱；约0.5h后换上流动相；若有缓冲盐，则应先用不含盐的同比例的流动相过柱，避免析出。,.,氨基柱柱效检测,流动相：10乙酸乙酯90正己烷流速：1.0mLmin-1标准溶液：乙苯（或甲苯）苯甲酸甲酯检测波长：254nm参考(标准JB5226-91)液相色谱仪测试用标准色谱柱,此方法同时适用氰基柱、硅胶柱,.,氨基柱使用后冲洗,正相条件适用后：首先50倍柱体积异丙醇（注意低流速）其次50倍柱体积甲醇最后异丙醇过渡到正相流动相条件柱子长期不用的情况下，冲洗干净后用异丙醇或者正己烷保存。,.,色谱柱再生,柱子使用一定时间后：柱效下降、老化，可以用以下方法清洗柱子恢复柱性能,方案1：依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、异丙醇、甲醇冲柱子（各以0.5ml/min的流速，20倍柱体积），再换流动相,.,色谱柱再生,方案2：清洗时依次用10倍柱体积的下列溶液冲洗：95水/5乙腈THF四氢呋喃95乙腈/5水再走流动相即可,若反相使用后柱效下降再生冲洗方法同上过程，并保持95乙腈/5水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min过夜冲洗,.,色谱柱再生（除水再生）,诸如保留时间漂移等选择性改变的一些色谱症状，可以归因于固定相的改变，但是填料可能还是完好的。这是因为正相色谱固定相的水分含量常常是个影响选择性的关键参数，大部分溶剂都内含有小部分的溶解水分，柱子在长期使用后吸附的水分使柱效下降，此时应除水使柱效恢复。,除水方案：用含2.5%二甲氧基丙烷（dimethoxypropane）和2.5%冰醋酸的正己烷冲洗色谱柱30个柱体积，可以去除色谱柱中水分并恢复色谱柱原来或所需要的选择性,.,氰基柱的使用,氰基柱作反相色谱，操作和维护和C18柱完全相同，但是与氨基柱一样，反相使用时-NH2与-CN会水解。尤其pH在1.5-7.0范围以外这种极端酸性或碱性条件下柱寿命会下降很快，使用时应注意。,氰基柱用于正相使用时没什么问题，当柱子使用一定时间后，柱效下降，老化，可按如下清洗方法恢复柱性能。清洗时依次用10倍柱体积的下列溶液冲洗：氯仿、异丙醇、二氯甲烷再走流动相即可。,.,附录：色谱柱柱内体积和平衡时间,单次样品运行时间=分析时间+色谱柱平衡时间色谱柱平衡时间=10倍柱内体积流速,4.6x500.5m5min4.6x300.3mL3min4.6x150.15mL1.5min4.6x1501.54mL15min4.6x2502.57mL25min2.1x500.10mL5min60sec2.1x300.06mL3min36sec2.1x150.03mL1.5min18sec,色谱柱柱内平衡时间尺寸体积流速(mm