肉毒梭菌ppt课件

4.2.7肉毒梭菌,本节主要内容：,肉毒梭菌的主要特征,肉毒梭菌致病机理,肉毒梭菌的检验,一、生物学特性：,1.形态及染色,肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属，革兰氏染色阳性(老龄菌是阴性），约为41m的大杆菌，多单在，偶见成双或短链，两侧平行，两端钝园，直杆状或稍弯曲，芽胞为卵圆形，大于菌体宽度，位于次极端，使菌体呈匙形或网球拍状，偶有位于中央，常见很多游离芽胞。有48根周生鞭毛，运动迟缓，无荚膜。,welcometousethesePowerPointtemplates,NewContentdesign,10yearsexperience,1.最严格的厌氧菌2.生长最适温度：2837：pH为6.87.6，产毒的最适pH为7.88.2。3.产毒培养温度：不同菌型产毒的最适培养温度不完全相同。C、D型温度高些为宜，35培养3d即可，而E型菌低温度长时间培养效果较好。4.对营养要求不高：在普通培养基上都能生长。,welcometousethesePowerPointtemplates,NewContentdesign,10yearsexperience,5.在含有肉渣的液体或者半流动培养基中，肉毒梭菌生长旺盛且产生大量气体，A、B、F三型表面浑浊，底部有粉状和颗粒状沉淀，并能消化肉块，变黑有臭味；而C、D、E三型表明清亮，絮片状生长，粘贴于管壁。6.在葡萄糖鲜血琼脂平板上，菌落较小，扁平，颗粒状。中央低落，边缘不规则，有的菌落还有大的溶血环。7.在卵黄琼脂平板上生长，菌落及其培养基周围表面覆盖着特有的彩虹样薄层，但G型没有,葡萄糖鲜血琼脂（A型）,（C型）,3生化特性,肉毒梭菌能分解葡萄糖，麦芽糖及果糖，产酸产气，能液化明胶，缓慢液化凝固血清，使牛乳消化，产生H2S，但不能使硝酸盐还原为亚硝酸盐。肉毒梭菌的生化性状很不规律，即使同型，也常见到株间的差异。,4.抵抗力,分类：,肉毒梭菌能产生外毒素即肉毒毒素（大分子蛋白），根据毒素的抗原特异性将其分为A、B、C（1、2）、D、E、F、G七个型别。,抵抗力：,A型毒素经602分钟加热，差不多能被完全破坏，而B、E二型毒素要经702分钟才能被破坏；C、D二型毒素对热的抵抗更大些；C型毒素要经过902分钟加热才能完全破坏，不论如何，只要煮沸1分钟或75加热510分钟，毒素都能被完全破坏。肉毒毒素对酸性反应比较稳定，对碱性反应比较敏感。某些型的肉毒毒素在适宜条件下，毒性能被胰酶激活和加强。,二致病机理,肉毒毒素是一种神经麻痹毒素，主要抑制神经末梢释放乙酰胆碱，引起肌肉松弛麻痹，特别是呼吸肌麻痹导致死亡。,肉毒毒素的毒性极强，是目前已知在天然毒素和合成毒剂中毒性最强的生物毒素，据称，精制毒素1克能杀死400万吨小白鼠，一个人的致死量大概1微克左右。,三、检验方法,培养基：庖肉培养基、卵黄琼脂培养基、明胶磷酸盐缓冲液。,试剂：肉毒分型抗毒诊断血清、胰酶（活力1:250）、革兰氏染色液。,实验动物：小白鼠,检验程序,检样,毒素检测,增菌、产毒培养30，5d,报告（一）,毒素检测,报告（二）,分离培养,培养检查,毒素检测,报告（三）,增菌产毒培养30，5d,观察生长性状，染色镜检,观察菌落性状染色镜检,报告(一)：检样中有无肉毒毒素以及有何型肉毒毒素。(如仅为了肉毒中毒诊断，即可结束检验)报告(二)：对增菌产毒培养物，一方面做生长特性观察，同时检测肉毒毒素。报告检样中有无肉毒梭菌以及有何型肉毒梭菌。（有些样品如土壤、泥沙等基本上不可能含有毒素，则应从培养着手）报告(三)：欲获纯菌株，可用增菌产毒培养物进行分离培养，对所得纯菌株进行形态、培养特性等观察及毒素检测，其结果可证明所得纯菌为何型肉毒梭菌。（一般情况下，没有必要从检样中分离纯的菌株，但研究或特殊需要例外）,肉毒毒素检测,注射液中若有肉毒毒素存在，小白鼠一般多在注射后24h内发病、死亡。,液态或固体（明胶磷酸盐缓冲液）样品经过适当处理后离心，取上清液实验,上清液及其胰酶激活处理液,分别进行小白鼠腹腔注射，各3只，每只0.5mL，观察4d,确证试验,毒力测定,定型试验,选取证实含有肉毒毒素的增菌产毒培养物（必要时可重复一次适宜的加热处理）接种卵黄琼脂平板，35厌氧培养48h。肉毒梭菌在卵黄琼脂平板上生长时，菌落及周围培养基表面覆盖着特有的虹彩样(或珍珠层样)薄层，但G型菌无此现象。根据菌落形态及菌体形态挑取可疑菌落，接种庖肉培养基，于30培养5d，进行毒素检测及培养特性检查确证试验。,分离培养,（1）毒素检测：试验方法同上。（2）培养特性检查：接种卵黄琼脂平板，分成两份，分别在35的需氧和厌氧条件下培养48h，观察生长情况及菌落形态。肉毒梭菌只在厌氧条件下生长而在需氧条件下不生长。,肉毒梭菌的检出（增菌产毒培养试验）,取庖肉培养基三支，煮沸10min15min，做如下处理：,第一支：急速冷却，接种检样均质液1mL2mL；,第二支：冷却至60，接种检样，继续于60保温10min，急速冷却；,第三支：接种检样，继续