抗原抗体反应ppt课件

，名称：张瑞玲学号：201590147专业：药物化学过程：免疫基本原理，第七章抗原与抗体相互作用，第1，PPT学习交换，第1节：抗原抗体反应特性，阶段，2，PPT学习交换，PPT学习交换抗原抗体的结合不是通过共价键形成的，而是这个特定部位之间短距离分子力相互作用的结果。这种魅力只在很短的距离内有效。因此抗原决定基和抗体结合部位需要空间上的密切接触，才能产生足够的结合力。这种分子间的互补结构决定了抗原抗体结合的特异性。3，PPT学习交流，抗原抗体分子之间的力。4，PPT学习交流，5，PPT学习交流，抗原抗体交叉反应，抗原抗体特异性反应，交叉反应，无反应，6，PPT学习交流，2，抗原和抗体结合的可逆性，抗原抗体结合反应是可逆反应Ab AgAb:Ag抗原抗体结合是分子表面的结合。影响因素：a .抗体对该抗原的亲和力越高，结合越强，b .环境因子对复合物的影响越不容易解开；-ph；离子强度应用：由于抗原抗体结合的可逆性，通过亲和层析分离纯化抗原或抗体；利用正在测试的抗原和标准抗原与抗体的竞争定量测定抗原或抗体。例如，辐射灭亡检查法、酶联免疫吸附分析法等、7、PPT学习交流、3、抗原和抗体反应之间的关系-eg沉淀反应、抗体过量、平衡点、抗原过量、抗体、抗原、前导带、后带、抗原抗体沉淀量以沉淀反应为例，在添加固定量抗体的试管第一行中依次添加一定浓度的抗原进行反应，结果随着抗原浓度的增加，沉淀出现得很快，但如果抗原超出一定范围，沉淀速度和沉淀量反而随着抗原浓度的增加而减少，或者直到最后才发生沉淀等反应参与抗原和抗体浓度如何合适，适合度很快，相反速度很慢。当看起来最快的反应出现时，抗原抗体的浓度比或数量被比作抗原抗体反应的最佳比率(optimalratio)或等效点(equivalencepoint)。抗原和抗体比例的最佳范围称为等效带。在最佳反应条件下，抗原抗体几乎全部组合成复合体，上等液基本上没有自由抗原和抗体。如果抗原或抗体浓度超过这个范围，可见反应的速度和复合物的数量就会急剧减少，或者在上等液中，可以测量玻璃抗原或抗体。抗原抗体比率似乎不合适的反应没有出现。带状现象(zonephenomenon)。抗体太多，称为前带。抗原过量时，被称为后代(postzone)。在同一抗原抗体反应系统中，无论抗原和抗体浓度如何变化，其沉淀反应的最佳比例总是不变的，Marrack提出的网状学说说明了抗原抗体反应率的机制。天然抗原大部分为2价以上，抗体在抗原和抗体在对等带中结合时，交叉成具有三维结构的晶格复合物，产生肉眼可见的沉淀物。如果抗原或抗体过剩，则过剩处方的结合价格不饱和，可能形成小的复合体，出现更多的自由抗原或抗体，看起来没有反应。但是当抗原或抗体是单价时，无论抗原与抗体的养比关系是否合适，都不能出现可见的反应现象。9，PPT学习交流，3，抗原和抗体反应阶段，10，PPT学习交流，抗体和抗原结合时，如果是颗粒抗原，就会出现凝集现象；如果是可溶性抗原，则产生沉淀作用，对抗原抗体反应是次要的过程。抗原与同种抗体相遇，在适当条件下，无论彼此的数量如何，立即形成特异性结合，形成抗原-抗体复合体，这一过程通常在称为反应第一阶段的几秒钟内完成。3，抗原和抗体反应的阶段，11，PPT学习交流，第一阶段后，第二次发生抗原和抗体之间的进一步交联，形成了网络上的聚集体。可见的凝聚和沉淀被称为反应的第二阶段。第二阶段是抗原抗体网格生长的阶段，速度慢得多。影响因素：严重依赖温度、离子强度等外部条件，但更重要的是需要合适的抗原抗体分子比例。只有在两者的结合价格相互饱和的情况下，才能连接到一个大网格样本聚集体，发生聚集或沉淀。12，PPT学习交换，抗原抗体凝集(沉淀)反应形成条件：1，抗原结合价格必须在2以上；2、抗体结合价格也必须在2以上。3、抗原抗体可以形成复合物，但不一定能形成沉淀物；4、抗原抗体结合要求其结合价格相互饱和时，形成大分子聚集体；5、抗原严重超标时，只有溶解状态的抗原抗体复合物出现不沉淀，因此在免疫检查中称为全带现象。13，PPT学习交换，影响第2节抗原抗体反应的因素，14，PPT学习交换，第一，反应物自身因素，抗原：理化特性，抗原类型和数量1，抗原决定物的数量和类型，溶解性抗原和相应的抗体反应沉淀，颗粒单价抗原和抗体的结合没有可见反应。粗糙的细菌容易在生理盐水中自行凝固。红细胞和IgG抗体不会直接引起凝集。15，PPT学习交换，反应物本身因素，抗体：来源，特异性，亲和性，效价2，抗体是血清反应的关键因素，对反应的影响从以下三个方面来看，3360(1)来源：与来自其他动物免疫血清的反应性有差异。兔子等大部分动物的免疫血清具有宽而平等的带，可溶性免疫复合物只有抗原过量时才容易出现。像马这样的大动物和人的免疫血清对等带很窄，少量抗原或抗体过量可以形成可溶性免疫复合物；家禽免疫血清不能与哺乳动物的补体结合，高盐浓度(80g/LNaCl溶液中沉淀现象明显)。单克隆抗体一般是沉淀反应或絮凝反应(2)特异性和亲和力是影响检查结果准确性的两个关键因素。免疫动物早期获得的抗血清特异性好，但亲和力低。后期获得的抗血清一般具有较高的亲和力，但长期免疫使免疫血清中抗体的种类和反应性更加复杂。因此，为了保证和提高测试结果的可靠性，诊断用的试剂应尽可能使用特异性强、黏附性强的抗体。16，PPT学习交流，(3)浓度：抗体浓度通常相对于抗原。在适当的浓度下才会出现明显的反应现象。因此，很多检查要进行抗体预滴定，找出最佳反应浓度。17，PPT学习交换，2，环境因素，电解质：生理盐水或缓冲液ph :pH6 pH9温度：15 40，37 最佳，18，PPT学习交换，1。电解质，抗原抗体结合后亲水性变为疏水性，此时易受电解质影响，如果电解质存在合适的浓度，抗原抗体就会失去部分电荷，相互凝集或沉淀，产生可见反应。没有电解质，就不会出现可见反应。一般血清检查使用85g/LNaCl溶液作为抗原抗体的稀释液和反应液。在这里，Na和Cl-银可以分别中和胶体粒子的电荷，降低胶体粒子的电位，形成可见的沉淀物或凝聚体。但是如果电解质浓度太高，就会出现非特异性蛋白质沉淀，盐分。补体参与的溶解细胞反应除了需要相同渗透的NaCl溶液外，还需要Mg2和Ca2离子参与。19，PPT学习交换，2 .ph，适当的pH是抗原抗体反应的必要条件之一。血清检查一般适合ph6-9，超出此范围会影响抗原和抗体的理化性质，从而导致假阳性或假阴性结果。当PH值为3左右时，接近细菌抗原的等电点，就会出现非特异性酸聚集，形成幻想。20，PPT学习交换，21，PPT学习交换，3 .温度，抗原抗体反应一般在15 40范围内，最佳温度为37 。在此范围内，温度越高，分子运动速度越快，抗原抗体接触机会增加，反应速度快，但也容易产生复合物释放。温度越低，反应速度越慢，但抗原抗体结合结实，易于观察。某些特殊抗原抗体反应需要特定的温度，例如冷凝集素在4 与红细胞结合，在超过20 的地方反而被溶解。22，PPT学习交换，T，23，PPT学习交换，4，作用时间，抗原抗体反应必须有足够的时间，不同的反应时间，24，PPT学习交换，并且抗原抗体反应在液相中反应时，适当的震动和搅拌，促进抗原抗体分子的接触，促进反应速度，25，PPT学习交换，第3节：主要抗原抗体反应类型，免疫电泳，对流免疫电泳，对流免疫电泳，26，PPT学习交换，第三抗抗原和抗体反应-免疫检测法，抗原和抗体结合后可见的反应，凝集，可见性反应的情况下，对抗原抗体分子适当比例的要求远远高于对方的绝对数量。这意味着在进行免疫检查时，要注意抗原抗体剂量；相反，提高可见度或测试可能性，可以大大提高免疫测定法的灵敏度。27，PPT学习交流，第一，聚集反应，聚集反应是指粒子抗原(聚集源)及其抗体结合反应的可见性现象。完全的细菌、红细胞等微粒抗原与相应的抗体混合，在一定条件下凝聚。抗原被称为聚集源(agglutinogen)。抗体与凝集素，28，PPT在杂交，2，沉淀反应，抗原为可溶性分子时抗体结合形成沉淀。1、絮状物沉淀反应在众多试管中添加等量抗体和增量抗原，在中性条件下接受37度绝缘1-2h，就能看到絮状物沉淀。可以找到抗原抗体反应的适当比例，用于检测抗原抗体的分子比例。29，PPT学习交换，寻找抗原抗体反应的适当比例，30，PPT学习交换，2，环沉淀反应，试管中添加抗体后抗原抗体阶段混合，37度绝缘10-20min，两个界面出现环沉淀。不能用于定量测量。这种检查主要用于确认追踪抗原，例如在法医中确认血液，力学用于检查媒介昆虫的微量抗原，因为这种技术的灵敏度低，所以不能分析、确认两种以上抗原，目前很少使用。31，PPT学习交换，3，双向扩散测试，琼脂抗原和抗体分别扩散到对方，以最适当的比例形成抗原抗体沉淀线，观察该沉淀线的位置、形状和对比关系，对抗原或抗体进行定性分析。靠近抗原孔的沉淀线表明抗体含量较大。抗体孔附近表明抗原含量更多。如果没有出现沉淀线，则出现抗体或抗原过剩。另外，如果出现多个沉淀线，抗原和抗体都不是单一成分。因此，可用于确认抗原或抗体的纯度。抗原，抗体存在多个系统时，会出现多个沉淀号。，32、PPT学习交换，双向扩散法操作：1%-5%盐水准备，4mL倒入显微镜用玻璃片，凝固后穿孔。中心孔液滴抗原，外部周孔液滴抗体，用于测定抗体效价。中心孔液滴抗体，外周孔液滴抗原，抗原的存在和用于定性抗原检测。33，PPT学习交换，抗原抗体为单系统浓度不同，抗原抗体为单系统时抗原浓度不同，沉淀弧的特性不同：抗原抗体为多系统时产生的沉淀弧多，相互不干涉。右，34，PPT学习交换，两种检查抗原(Ag-1，3.Ag1)具有相同的表位，形成完全融合的沉淀线抗体，两种抗原是完全不同的(Ag-1和Ag-24)抗体是双价，两种抗原(Ag-1，3 . ag1)作为抗原分析的这项技术是目前免疫化学中最常用的识别技术之一。35，PPT学习交换，4，单向免疫扩散，也称为单向琼脂扩散，是定量抗原的检测方法。与双向扩散不同，是在琼脂中包含一定数量的抗体，在孔内放入未知量的相应抗原。在37度保温过程中，孔内抗原向周围扩散，形成抗体和沉淀环。根据沉淀源的大小确定抗原的含量。36，PPT学习交流，5，免疫电泳，37，PPT学习交流，a，免疫电泳，免疫电泳是区域电泳和免疫二维扩散的结合，Grabar和Williams(1953)最先报道。首先使用带电泳技术将电荷和分子量不同的蛋白质抗原在琼脂中分离，然后平行于电泳方向在两侧开槽，添加抗血清。在室温或37 下扩散，每个带蛋白在该位置与抗体反应，形成电弧沉淀线，38，PPT学习交流，b，对流免疫电泳，对流免疫电泳，对流免疫电泳本质上是用于定向加速度的免疫双扩散技术，基本原理是在一千板中制造两行孔，在每个孔中添加测试中的抗原，将相应的抗体放入一个孔中，抗原放入阴极侧，抗原放入阴极侧。通电后，带负电荷的抗原游向阳极抗体侧，抗体通过电渗透流向阴极抗原侧，在两者之间或抗体的另一侧(抗原过剩时)形成沉淀线。39，PPT学习交换，c，火箭电泳，单向扩散发展的定量技术，本质上是加速度的单向扩散。在含有抗体的琼脂平板的一端打孔抗原。添加要测试的标本后，将抗原制成阴极，进行电泳。抗原游泳以阳极进行，抗原抗体比例适当时发生结合沉淀，随着游泳抗原减少，沉淀逐渐减少，形成峰状沉淀区域，形状类似火箭，抗体浓度保持不变，峰高与抗原量成正比。40，PPT学习交换，3，补体结合试验(CFT)，抗体与细菌、红细胞等颗粒抗原结合，形成抗原抗体复合物时，补体会产生溶解细菌、溶血效果。补体结合检查可以测量患者血清中补体的总量，也可以测量未知抗原或抗体的数量。测定人血清补体总量的方法以绵羊红细胞的溶血为指南。羊红细胞与抗阳红细胞结合时，放入患者血清观察溶血程度。41，PPT学习交换，补体结合试验，42，PPT学习交换，4，中和试验，特定抗体抑制多种抗原的生物活性(细菌外毒素的毒性，酶活性，病毒的感染性等)反应例如，在临床实验诊断中确定了风湿性患者的抗链球菌o抗体反应。43，PPT学习交换，四节免疫亲和层析，生物聚合物具有根据