3-2基因工程的基本操作程序.ppt

1.2基因工程基本操作程序原理技术应用，北京理工大学附属中学寿命学，重组人胰岛素(Humulin youprolin)，1982年10月世界上第一个商业化的基因重组人胰岛素美国上市，事故1:如何使用大肠杆菌生产重组人胰岛素？构建基因组文库基因的分离和克隆，想法2:如何从人类基因组中分离胰岛素基因？想3:从基因组库中获取人的胰岛素基因，引入大肠杆菌，也能成功表达吗？怎么了？构建cDNA库，思考4: mRNA为基础，能否合成没有内含物的胰岛素基因？聚合酶链反应(PCR)，事故5:如何快速扩增胰岛素基因(cDNA)？聚合酶链反应(PCR)，变性，退火，三阶段扩展，变性：双链DNA裂解成为单链DNA退火：部分引物与模板单链DNA的特定互补部位相匹配并结合扩展：以目的基因为模板合成互补的新DNA链，6:5，氨基酸序列mRNA序列DNA序列人工合成，DNA合成器，想7:用什么限制酶把质粒和胰岛素基因切成酶，把目的基因插入Tetr基因吗？事故8:将重组质粒导入大肠杆菌后能否表达？如果不是，该怎么修整？把BamH类胰岛素基因和质粒切开，放入DNA结合酶，得到重组质粒了吗？9:如何根据标记基因筛选含有重组质粒的大肠杆菌？重组反应混合物需要转换成amp stets/AmprTetr Escherichia coli菌株吗？如何将Amp琼脂平板上的群体从Tet平板复制到原位，比较两平板上群体的生长，同时挑选含有重组质粒的群体？定向复制策略双酶切连接，思考10:如何避免质粒和目的基因的自环化？大肠杆菌合成胰岛素有生物活性吗？如何确认胰岛素基因在大肠杆菌中是否成功表达？通过酵母、基因工程生产干扰素(糖蛋白)时，需要选择(大肠杆菌/酵母)作为受体细胞吗？说明原因。要种植转基因抗虫棉，目标基因和受体细胞分别是什么？如何将目标基因导入受体细胞？如何确认棉花的染色体DNA中插入了抗虫基因？目标基因成功表达的象征是什么？使用基因探针如何知道目标基因是否转录了mRNA？如何知道Bt基因是否成功翻译成Bt毒蛋白？目标基因在大肠杆菌中表达蛋白。将表达的蛋白质注射给动物免疫，产生相应的抗体，提取抗体。从转基因生物中提取蛋白质，经过凝胶电泳，将凝胶的蛋白质转移到硝化纤维素膜上。将抗体与硝化纤维素膜的蛋白质杂交，检测蛋白质，检测蛋白质：使用抗原抗体杂交：检测出的是蛋白质，“探针”是抗体，目的基因的检测和鉴定，是否存在，分子水平检测，个体水平识别，分子混合技术，抗原抗体杂交，为什么人类tPA基因要和绵羊哺乳基因一起重组？为什么选择受精卵作为受体细胞？如何将重组tPA基因引入受精卵？(07天津圈)以下图片是获得转基因抗虫棉的技术过程。图中：(1)A过程所需的酶是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _(2)B过程及其结果是质粒作为载体必须具备的两个条件_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _，(3)C过程的培养基中不仅要包含必需的营养素，琼脂，激素，还要添加_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _(4)利用DNA分子杂交原理测试再生植物，d过程应采用_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _作为探针。(12年海淀区期)大肠杆菌pUC18质粒的lacZ基因中未插入外源基因，LacZ基因表达-galactosidase，如果培养基中含有IPTG和X-gal，X-gal被-galactosidase水解为蓝色，elacz基因相反，形成了白色的群体。选择培养基中