三食品微生物检验的试剂及配制PPT课件

第三章食品微生物检验常用试剂和配方掌握常用染料的性质及其染色制备技术。熟悉常用试剂、缓冲液和物质浓度的制备技术。了解培养基的种类和一些常用培养基的使用，掌握常用培养基的制备技术。第一节染料和染液制备技术第一节染色原理微生物染色的基本原理是通过物理和化学因素进行的。物理因素：毛细现象、细胞和细胞物质对染料的渗透和吸附等。化学因素：正负离子之间的相互吸引等。根据电离后所带电荷的性质，染料的类型可分为以下几种：1 .酸性染料：如酸性红、刚果红、伊拉克红、藻红、苯胺黑、苦味酸等。2.碱性染料：一般有碱性红、中性红、孔雀石绿、藏红、结晶紫、亚甲蓝、甲基紫等。细菌很容易被碱性染料染色。3.中性(复合)染料：如曙红亚甲蓝、莱特染料和金莎染料(常用于核染色)。4.简单染色：这些染料化学亲和力低，主要是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶剂，如苏丹红染料，5.染色细菌标本的检验方法染料，细菌染色的染料酸性染料(阴离子染料):染色离子带有负电荷，可与带正电荷的物质结合使其着色。当细菌溶液的酸碱度降低到正电性时，酸性染料可以用来染细菌。(伊拉克红、刚果红)碱性染料(阳离子染料):与带负电荷的物质结合，细菌通常带负电荷。因此，碱性染料(碱性品红、亚甲蓝)通常用于细菌染色。复合染料：碱性染料和酸性染料的组合(曙红亚甲蓝、曙红天青)。纯染料：不能与染色物质生成盐。6。碱性染料的离子带正电荷，可以与带负电荷的物质结合。由于细菌卵的等电点较低，在中性、碱性或弱酸性溶液中生长时，它们通常带负电荷，因此碱性染料(如亚甲蓝、结晶紫、碱性变红或孔雀石绿等)也是如此。)通常用来给它们上色。酸性染料离子带负电荷，可以与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产生酸，培养基的酸碱度降低时，细菌的正电荷增加，因此容易被酸性染料如曙红、酸性变红或刚果红染色。中性染料是前两者的结合，也称为复合染料，如曙红亚甲蓝、曙红天青等。1.常见染料的溶解度表3-12。普通染料的制备，第2节。常见试剂的制备技术，第1节。缓冲溶液的制备技术，第10节，第2节。物质浓缩溶液的制备技术，第1节。溶液浓度的表达方法2。物质浓缩溶液的制备方法3。溶液浓度的调整4。普通酸碱物质浓度的计算，第11节。三、酸碱度指示剂制备技术，12，4，血清学试剂制备技术，血清学实验第5，13，5章，生化试剂制备技术和试验方法，什么是微生物生化试验？指通过生化方法确定微生物的代谢物、代谢模式和条件，从而鉴定细菌的类型和属的试验。由于细菌的酶系统不同，代谢产物也不同，而且这些产物具有不同的生化特性。因此，生物化学方法可以用来鉴定一些在形态学和其他方面不容易区分的细菌。(1)向培养物中加入一些底物和指示剂，观察接种和培养后培养基的酸碱度变化。2.向培养物中加入试剂，观察它们与细菌代谢物的颜色反应。3.根据酶作用的反应特性，确定酶的存在。4.根据细菌对物理、化学条件和药物的敏感性，观察细菌的生长。要测试的细菌应该是新鲜培养物。培养18-24小时。2.要测试的细菌应该是纯培养的。3.观察反应时间。观察时间通常为24或48小时。4.应进行必要的控制测试。5.提高阳性检出率，选择至少2-3个可疑菌落分别进行检测。生化试验分类(1)糖(酒精)代谢试验(2)氨基酸和蛋白质代谢试验(3)有机酸盐和铵盐代谢试验(4)酶试验(17)、(1)糖(酒精)代谢试验(1)糖醇发酵试验(2) v-p试验(3)甲基红试验(Mr)、(18、1)糖醇发酵试验，原理：不同的细菌有不同的能力分解各种糖醇和产生的代谢产物。有些能分解各种糖醇，有些只能分解1-2种糖醇，有些能分解糖醇产生酸和气体，有些能分解糖醇产生酸但不产生气体。根据这些特征，可以识别细菌。糖发酵试验的原理是，不同的微生物发酵糖的能力不同，产生的分解产物也不同，这可以作为细菌分类和鉴定的一种手段。大肠杆菌/产气肠杆菌，葡萄糖，CH3 COOCCH，HCOOH，甲酸氢酶，H2，CO2，伤寒沙门氏菌，葡萄糖，CH 3 COCH，HCOOH，指示剂：溴百里酚蓝pH7.2(蓝色)，例如，20，普通糖醇，单糖：葡萄糖，甘露醇，木糖，半乳糖鼠李糖二糖：乳糖，蔗糖，麦芽三糖：棉子糖多糖：菊粉，肝糖，戊醇：甘露醇，山梨糖醇，肌醇，味茂春，21，2)测试方法，(1)试剂：在糖发酵培养基中，常用的指示剂是酚红和溴百里酚蓝，它们对颜色反应更敏感，但不太稳定。溴甲酚紫和酸变红相对稳定，特别是对于发酵缓慢的细菌，培养时间相对较长，所以最好选择两者。(2)培养基：液体糖发酵管、半固体糖发酵管、固体糖发酵管、双糖(或三糖)高层斜面发酵管。22、2)试验操作方法：用无菌操作方法，用接种针或环除去分离培养的纯菌，接种到糖发酵管中。如果是半固体培养基，接种针用于穿刺接种。在361.0的温度箱中培养一段时间(几个小时到两周)，然后每天观察结果。在糖发酵试验中，应注意杜氏小管的插入方法。2.接种后，轻轻摇动试管使其均匀，并防止倒置的小管进入气泡。注：24、荷兰人小管充盈不良，会导致荷兰人小管出现气泡，影响观察结果。首先，试管中充满培养液，然后用医用注射器吸取一定量的培养液，将培养液中的空气排空，将针伸到杜氏小管的底部(以防止气泡的产生)，将培养液缓慢推入杜氏小管，直到出现膨胀(表面张力效应)，然后培养液过量，使培养液润湿杜氏小管的外表面。由于培养液具有一定的粘性，当湿杜氏细管靠着试管放置时，它可以慢慢滑到试管底部，而不会碰到试管底部。嘿。25，气泡，导管，气泡，阳性，阳性，阴性，培养基变黄，培养基不变色，不产生气泡，结果记录：产酸不产气，阳性，带，阳性，带 8853；指无产酸产生气体，阴性，带“-”，26，2.V-P试验(乙酰甲基甲醇试验)，1)原理：一些细菌能分解葡萄糖蛋白胨水介质中的葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸被浓缩脱羧成乙酰甲基甲醇。后者在强碱环境中被空气中的氧气氧化成二乙酰。在-萘酚和肌酸的催化下，二乙酰和胍在蛋白胨中生成红色化合物，称为V-P()反应。伏安测试(伏安测试)用于确定一些细菌利用葡萄糖生产非酸性或中性最终产品的能力。一些细菌在糖代谢过程中通过糖酵解途径产生丙酮酸。由于不同细菌含有不同的酶，丙酮酸的代谢也不同。大肠杆菌、产气肠杆菌、VP试验阴性。实验原理，例子。29，应用：主要用于大肠杆菌和产气肠杆菌的鉴定。该测试通常与磁共振测试一起使用。一般来说，前者是阳性细菌在37培养48小时后，加入40%的KOH510滴，然后加入等量的5%-萘酚溶液，剧烈振荡，然后置于37培养箱中30分钟以加速反应。观察培养基的颜色变化。(3)结果观察和记录(1)如果发酵管为红色，则为阳性；如果发酵管为黄色或铜绿色，则为阴性；如果它是负的，它是负的。 31。注意：对于VP实验，要注意自由振荡！反应时间长。32，中文名称：大肠杆菌，菌种保藏号：CVCC3038特征特性：非耐酸异养最适温度37.pH7.27.4各种碳水化合物均可发酵，不含柠檬酸盐，如葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇接触酶阳性，氧化酶阴性，脲酶阴性。磁共振试验阳性，VP试验阴性通用名称：埃希氏菌专用名称附加词：大肠杆菌，33，3。甲基红试验，1)原理：肠杆菌科的每一个属都能在葡萄糖分解过程中发酵葡萄糖并产生丙酮酸。在进一步的分解中，由于葡萄糖的不同代谢途径，可以产生大量的酸性产物，如乳酸、琥珀酸、乙酸和甲酸，这可以将培养基的酸碱度降低到pH4.5以下，并变成甲基红指示剂。甲基红试验呈阳性；一些细菌脱羧丙酮酸形成酮和醇的中性产物。培养液的酸碱度大于5.4。甲基红指示剂为橙色，甲基红试验为阴性。测试了不同细菌分解葡萄糖和产生酸的能力。大肠杆菌、葡萄糖、产气肠杆菌、指示剂、分解物、甲基红pH5.4(橙色)。甲基红试验的实验原理，pH4.5，pH5.4，例，35，2)试验方法：选择少量新鲜培养物进行试验，接种于磷酸葡萄糖蛋白胨水培养基中，在361或30(优选30)培养3-5天。从48h开始，每天取1毫升培养液，加入1-2滴甲基红指示剂，立即观察结果。(1)鲜红色或橙色为阳性，浅红色为弱阳性，Mr: (2)橙色或黄色为阴性，MR-，从发现阴性并培养至第5天即可判断结果。37岁，磁共振VP测试原理和照片。38，1。吲哚基质(吲哚)试验2。H2S测试3。脲酶试验，(2)氨基酸和蛋白质代谢试验。39，1。吲哚试验(吲哚基质试验)，1)原理：一些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚。吲哚的存在可以通过颜色反应来显示。吲哚与对二甲氨基苯甲醛结合形成玫瑰吲哚，这是一种红色化合物。吲哚试验，色氨酸分解反应：吲哚反应：不同的微生物有不同的酶系统，有些细菌含有色氨酸酶，能分解培养基中蛋白胨中的色氨酸。大肠杆菌，色氨酸，产气肠杆菌，色氨酸酶，H2O，检测：玫瑰吲哚，H2O，玫瑰红色，吲哚试验阳性，吲哚试验原理，吲哚阴性-，例如，试验方法：取3份胰蛋白酶水培养基，接种大肠杆菌1号，接种产气杆菌2号，接种未知菌3号，37培养24h48h。将几滴吲哚试剂沿着试管壁滴在培养物的液体表面上，并观察结果。3)结果观察和记录显示玫瑰红，阳性反应，阴性反应，如无红色记录，记录-。 43，靛蓝矩阵测试原理和照片，靛蓝矩阵，2。硫化氢产生试验，1)原理：一些细菌可以分解培养基中的含硫氨基酸产生H2S，H2S可以形成黑色沉淀的硫化铅或硫化亚铁，在培养基中加入铅或铁离子来鉴别细菌。方法和结果(1)琼脂穿刺：培养基：三糖铁培养基，含硫酸亚铁(或醋酸铅)的半固体培养基。操作：用接种针沿管壁将试验菌接种到含有醋酸铅或硫酸亚铁的培养基中，在37培养24-48h后观察结果。结果：培养基由黑色变为阳性。当产生的硫化氢量小时，为了便于观察结果，在进行穿刺接种培养时，必须沿培养基壁进行。(2)醋酸铅试纸法：培养基：含半胱氨酸的半固体培养基，用醋酸铅浸泡过的滤纸条。操作：穿刺接种待测细菌培养基，挂醋酸铅线对结果的观察和记录表明，培养基的底部是黑色和阳性的，而培养基的底部不是黑色和阴性的。注意-， 47，3。脲酶分解试验脲酶(Urease)试验，1)原理：一些细菌能产生脲酶，分解尿素并产生2分子氨，使培养基呈碱性，并使培养基中的酚红指示剂呈粉红色。培养基由黄色变为红色，呈阳性。来识别细菌。1)接种2)脲酶阳性3)脲酶阴性。48、2)测试方法：选择大量培养18 24小时的待测细菌，将它们紧密包被，接种在尿素琼脂斜面上，不要到达底部，留底部控制颜色变化。分别在培养后2、4和24小时观察结果。培养基变成粉红色为阳性，而颜色不变为阴性。如果是阴性，培养应持续4天以作最终判断。49、尿素酶试验图，阳性，3)结果观察记录介质为粉红色，阳性，记录介质颜色不变，阴性，记录-，50，(3)呼吸酶试验，氧化酶试验，过氧化氢酶试验，硝酸盐还原试验，氰化钾试验，51，1。氧化酶试验，1)原理33，360氧化酶氧化细胞色素c，氧化细胞色素c氧化二甲基对苯二胺盐酸盐，产生玫瑰红至深紫色醌，然后与-萘酚结合产生靛酚蓝，靛酚蓝是一种蓝色反应氧化酶，或细胞色素氧化酶，是细胞色素呼吸酶系统的末端呼吸酶。在氧化酶试验中，酶首先氧化细胞色素C，然后氧化细胞色素C氧化对苯二胺产生显色反应。本实验中，肠杆菌科为阴性，弧菌科、非发酵菌为阳性(少数除外)，奈瑟氏球菌均为阳性。测试方法：取白色清洁滤纸，涂片菌落。加入一滴二甲基对苯二胺盐酸盐溶液，阳性者呈粉红色并逐渐加深。加入一滴-萘酚溶液，阳性者在半分钟内就会出现亮蓝色。底片在两分钟内不会变色。为了鉴定奈瑟氏球菌的种类，细菌属都是阳性的。此外，它也用于区分假单胞菌属和肠杆菌科，前者是阳性，而后者是阴性。莫拉菌和产碱杆菌都是阳性的。异常结果：奈瑟菌有脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等9种致病菌，引起流行性脑脊髓膜炎的上呼吸道症状：鼻咽炎等全身感染症状：高热、出血或血瘀；脑膜炎症状：头痛、呕吐、颈部僵硬；导致淋病和新生儿淋球菌性结膜炎。氧化酶试验注意事项：试验过程中避免接触含铁物质，避免假阳性。(2) 10g/L四甲基对苯二胺盐酸盐或10g/L四甲基对苯二胺盐酸盐水溶液为无色溶液，在空气中易氧化失效。因此，新试剂应经常更换，并放在棕色瓶中。如果试剂已经变成深蓝色，它们应该被丢弃。55，试剂，1%二甲基-对苯二胺盐酸盐，1%-萘酚-乙醇溶液，56，56，和，蓝色是，不变色或粉红色是-，57，2。过氧化氢酶试验，1)原理：一些细菌可以分泌过氧化氢酶，加入过氧化氢后，过氧化氢可以分解成水和氧气，产生气泡，这是一个积极的反应。58，2)试验方法：用滴管将1-2滴1%二甲基对苯二胺盐酸盐试剂直接滴到培养物上，加入1-2滴1%-萘酚-乙醇溶液，在30秒内判断试验结果。3)结果观察记录显示30秒内出现蓝色反应。如果它