Tullgren土壤动物分离漏斗

Tullgren土壤动物分离漏斗参考：P W Murphy, Progress in Soil Zoology （土壤生态学的进展）, 75-110页, Butterworths, J Brady, J Appl Ecol 6, 391-402, 1969年12月。仪器用途：Tullgren土壤动物分离漏斗已经在全世界使用了超过50年时间，是采用干式或湿式将土壤生物从土壤样品中分离出来的最好仪器。测量原理：将土壤或干草样品放在漏斗可移动的上半部分。灯的热度和光线为土壤样品创造一个大约14的温度梯度。这就刺激节肢动物和其他的生物体向下运动，穿过薄纱到达漏斗底部的收集槽中。灯的位置可以调节，使土壤的温度逐渐上升，从而防止这些慢速运动的生物在干硬的土壤块中被困住。过滤网周围有通风口以防止土壤样本变硬板结。如果要采用湿式采集，则将漏斗灌满水，将薄纱放好，线虫类或其它会游泳的生物收集在漏斗的底部，可以间隔一定时间，将底部抽出来（这种方法适合收集黄金线虫），有没有灯都可以。 特点：可进行干式或湿式采集，精密的铝漏斗构造，收集槽有塞子以防止生物丢失，设计简单，易于操作。 技术参数（6联或12联）：-漏斗数量：6个或12个-漏斗直径：顶部：152mm；底部：14mm-标本收集器直径：25-50mm-总长度：1.0m-总高度：83cm-总宽度：6联：21cm；12联：38cm 主要采集工具1捕虫网 根据用处不同可分为空网、扫网、水网和刮网。按照国家在测报调查上的规定，标准的捕虫网，其网口直径1/3米，网长2/3米，手柄1米。为了调查虫情密度，操网的方式，扫捕的幅角，扫捕的时间和次数，均应有统一的规定。空网 用透气、坚韧、浅色的珠罗纱、尼龙纱等制成，专门用来采集蝴蝶、蜂类、蜻蜒等飞翔迅速的昆虫。扫网 用来扫捕树丛、杂草中隐蔽的昆虫，因而要用较结实的白布或亚麻布制作网袋，网框和网柄都要选择坚固的材料，以承受扫网时较大的阻力。水网 用来采集水生昆虫。一般用铜纱、铝纱和尼龙丝制作。刮网 在树皮上采集昆虫时，可用粗铝丝作架，前面连接上一段有弹性的钢条，缝上白布的网袋，底端可捆上个小瓶，以便接虫。2采集伞 专门用来采集不善于飞翔、跳跃而又有假死性的昆虫。3吸虫管 专门用来采集蚜虫、小蜂、蓟马、粉虱等身体脆弱不易拿取的微小昆虫。4诱虫灯 主要用于夜间活动且具有趋光性的种类。黑光灯、诱虫账幕。5马氏诱捕器 为一种不具诱引装置的静止诱捕器，由Malaise于1937年所设计。基本上是由一方开口的棉纱或尼龙纱网制成，网色为黑色或绿色。可定点布置在林地、灌木丛等环境中，捕捉小型飞翔昆虫和寄生蜂等。6. 贝氏漏斗是一种附加有驱赶作用的分离集虫器。这种装置最早由意大利昆虫学家Berlese 设计，随后又由瑞典人Tullgren用灯泡作热源修改而成。所以，此类设备又称作Berlese-Tullgren漏斗。现在主要用来采集土壤、枯叶中的昆虫。7毒瓶 即杀死昆虫的器具。现常用乙酸乙脂、敌敌畏等药物作为毒瓶的毒剂。在广口瓶中放入适量的脱脂棉，用长滴管滴入毒剂，然后用硬纸片卡住。这类毒剂挥发速度快，作用时间短，因而要适时补充药剂。8三角纸袋 是用长方形的纸折叠成的三角纸袋，主要用于标本的暂时保存。二、采集方法1 观察和搜索法 要采到需要的标本必须了解昆虫的生活习性及活动场所。有许多昆虫营隐蔽生活，在树皮下和树干内可到天牛、吉丁甲、小蠹虫、木蠹蛾、透翅蛾、象甲和扁甲的幼虫或其它虫期，某些蚧虫、蚜虫等；巢蛾类和天幕毛虫在树冠中作丝巢，可采到春幼虫或蛹；卷叶象甲藏在紧密的卷叶筒中。同翅目的蚜虫、木虱和蚧虫的分泌物常易为人所发觉，也可根据与其共生的蚂蚁、或其天敌瓢虫、草蛉等来采集蚜虫和蚧虫。沫蝉的若虫的分泌物在枝上形成泡沫，其自身躲在里面；亦可根据昆虫的声音、粪便等作为线索进行采集。2 网捕法 利用捕虫网捕捉昆虫的方法。对于会飞善跳的昆虫不论其是活动还是处于静止状态，均应网捕，以免其逃逸。3 震落法 利用不少昆虫具有假死性的特点，突然猛击其寄主植物，使其落入网虫、采集伞或白布单等工具内。4 诱捕法利用昆虫的各种趋性采集昆虫标本的方法。（1） 灯光诱捕 是最常用的一种诱捕法。（2） 食物诱捕 如利用糖醋酒液诱集地老虎、金龟甲等。（3） 信息素诱捕（4） 颜色诱捕 黄盘诱蚜等。（5） 马氏网诱捕5 陷阱法可捕捉蟋蟀、步甲等地面活动的种类。6 器械分离采集法（1） 干燥分离 即利用筛网分离的方法。主要用于粮食害虫，亦可用于大型土壤昆虫。（2） 水洗分离 主要用于小型土壤昆虫。（3） 冲洗与浮选技术（4） 贝氏漏斗三、采集的时间与地点昆虫种类繁多，生活习性各异。一般来说，一年四季均可采集，但由于昆虫的发生期和植物的生长季节大致是相符的，每年晚春至秋末，是昆虫活动的适宜季节，也是采集昆虫的最好时期。但具体到某一特定类群，则要根据该类群的生活习性及你所迁定的采集对象来确定。采集地点也要根据采集目的而定，根据不同种或类群所处的生态环境而选择合适的地点。从一般意义上来讲，采集场所大致有：空中、植物上、地面、土壤中、水中、动物体上和昆虫体内。土壤中的昆虫类群主要有：原尾目、双尾目、鞘翅目的金龟甲、叩头甲、拟步甲、根象甲、步甲、虎甲、芫菁、叶甲、小蠹虫和天牛；直翅目的蝼蛄；等翅目的白蚁、膜翅目的蚂蚁；半翅目的土蝽、及同步翅目的蚧虫、蚜虫等。水中的昆虫类群主要有：鞘翅目的沼梭、龙虱、水龟虫、豉甲等；半翅目的划蝽、仰泳蝽、负子蝽、固头蝽、水黾等；蜻蜒目、毛翅目、广翅目、Ji翅目（石蝇）、蜉游目昆虫的幼期，以及脉翅目昆虫的水蛉、长翅目的水蝎蛉幼虫和某些双翅目昆虫的幼虫。普通土壤动物调查准备工作取样仪器：手拣取土器：钢管打造而成，长30cm，直径8cm，上部加厚能忍受叩打干漏斗取土器：钢管打造而成，直径5cm，长30cm，距底端5cm处开双侧瞭望窗口（长2.5cm），上部加厚能忍受敲打 湿漏斗取土器：钢管打造而成，直径3cm，长30cm，距底端5cm处开双侧瞭望窗口，上部加厚能忍受敲打大环刀：高20cm，直径30cm，底部锯齿状磁盘：2个，或中等大小解剖盘2个铁锤：8kg铁锤1把，4kg铁锤1把小铁铲：长25cm，底端成锐三角形，宽2cm，外形成竹片状，2把取样袋：普通硬质塑料胶袋100个，能容耐土壤1kg，大型硬质塑料胶袋20个，能容耐枯枝落叶2kg标签纸：4捆，加铅笔5只酒精：70%，50kg；95%食用酒精稀释即可镊子：2把，嘴尖剪：眼科剪1把针：医用银针2盒50ml小烧杯4个小培养皿4个分离仪器：灯泡：250w红外线灯泡20个，对应灯头15个；60w灯泡100个，对应灯头20个，电线若干米，移动多孔插座5-10个（不低于10A）玻璃漏斗：100个，上口径宽约7cm，柄口径约0.5cm，配备内径0.5cm，长30cm的乳胶管止血夹：100个，能夹住乳胶管小指环：300个，可用注射用青霉素瓶洗干替用，若保存标本增加指环数量烘虫箱6-10个：木制品即可，分两层，上层内壁涂成白色，安装60w灯泡（距离样品15cm），下层涂成黑色，如图，隔板约12个圆孔，容耐漏斗用大型干漏斗：6-20个，要定制小型干漏斗：80个，要定制小型湿漏斗：80个，要定制不锈钢铁丝网：2mm孔径，5m；1mm孔径，5m锥形瓶：50ml，广口鉴定仪器：体视显微镜，1台：底座有向上的光源。10w以下节能灯2个，配电线和灯头土壤动物图鉴1套吸水纸：3包，擦镜纸2包记录纸若干（点击图片得到原图）虫箱示意图 以上设备（不包括显微镜与图鉴），资金预算5000元森林土壤动物的取样过程每一林分选择5-10块（亚热带地区）具有代表性的样地，面积为1010m2，分4个土壤层次(凋落层，0-5cm，5-10cm，10-15cm)3种分离方法(干漏斗法、湿漏斗法、手拣法)取样。干漏斗法主要分离跳虫、蜱螨等陆生土壤动物，湿漏斗法主要分离线虫、线蚓等湿生性的土壤动物，手拣法主要分离不能用漏斗法分离的较大尺寸的土壤动物，如蚯蚓等。凋落层的取样使用环刀法大环刀与普通环刀。尹文英的不锈钢大环刀(直径30cm，高20cm)与干漏斗法配套使用，这种环刀高度较大，可以较好地防止土壤动物逃逸，并且取样面积固定，容易换算。取样时先用大环刀罩住凋落层，双手用力缓慢的旋转，直到环刀的刀锋进入土壤层，然后把凋落物拣入到黑色厚质塑料袋中，取样过程中仍要防止蜘蛛等活动性强的土壤动物逃逸，记下标签，称为凋落层的一个样。使用该环刀，凋落层的取样面积是：ALD=3.14r2=3.14 (30/100)2 1/4普通环刀(直径8 cm，高12 cm)与湿漏斗法配套使用,取样过程如上所述。使用该环刀，凋落层的取样面积是：ALW=3.14 r2=3.14 (8/100)2 1/4土壤层的取样使用廖崇惠发明的取土器，取土器分为三类，第一类与干漏斗配套使用，直径5 cm，高20 cm，这类取土器有较少的直径，管壁上开有双向窗口，能容易取出土壤，也能避开大的石块和粗的树根，使用该取土器，土壤层的厚度均统一到5 cm，土壤层的取样面积是：ASD=3.14 r2=3.14 (5/100)2 1/4第二类取土器与湿漏斗配套使用，直径3 cm，高20 cm，构造同第一类，只是直径更少, 使用该取土器，土壤层的厚度均统一到5 cm，土壤层的取样面积是：ASW=3.14 r2=3.14 (3/100)2 1/4第三类与手拣取样配套使用，直径8 cm，高25 cm，管壁没有开口，上部套有厚实的钢冒，能忍受叩打，下部的刀锋能迅速进入土壤，整个构造类似于空心不锈钢管, 管壁有0-20cm的刻度，从刀锋向上15cm处开有瞭望口，使用该取土器，土壤层的厚度均统一到15 cm，土壤层的取样面积是：ASH=3.14 r2=3.14 (215/100)2由于手拣的取样面积是4个，于是对应的直径变化为4开根号倍，如果是3个对应3开根号倍每一土壤层按同样方法，取数个，记下标签，称某一土壤层的一个样(看图)。分离提取如上所述，用不同取样器收集到的特定土壤与凋落层样品，各自适合手拣法以及干、湿漏斗法分离土壤动物。(1)手拣法：现场用手拣取土器，钻取15 cm厚的土壤层，取4个混合放入瓷盘中，用镊子检出肉眼所见的土壤动物，直接放入70%酒精瓶中固定(2)干漏斗法：用大环刀收集到的凋落层样品用改良的大型干漏斗收集，其构造如上面图所示：加热装置为250w的红外线灯泡，灯泡可用铁丝网笼住，避免温度过高，灯泡掉落；网筛为复式的筛网，小网眼1mm，大网眼10mm；漏斗柄口径1.5cm，直接与收集瓶(75%酒精溶液或者苦味酸溶液)相连。样品放入筛网中，加热启动时，不同大小的土壤动物均可透过网目，进入收集瓶，加热时间以凋落物出现燥、焦为度，一般2小时以上，分离效率一般可达90%以上，完毕以后，打开盖子用手拣审查。用廖崇惠的干漏斗取土器收集到的土壤样品用小型的干漏斗收集，其构造如图所示加热装置为40-60w的灯泡，数十个小型干漏斗集成若干个烘虫箱。要求同组实验内的不同处理，放入同一烘虫箱分离，以保证分离效率一致。土壤动物同样通过网目掉入收集指管中，分离时间不低于48小时。(3)湿漏斗法用普通环刀收集到的凋落物样品，以及用廖崇惠的湿漏斗取土器收集到的土壤样品用小型的湿漏斗收集。湿漏斗的收集方法跟小型干漏斗基本一致，只是漏斗中装入水，下部的乳胶管用止血夹夹住。水以浸润样品下端为宜。加热开始4小时后，即要求取出一次土壤动物，防止线蚓等自溶，分离时间不低于48小时。土壤动物的计算目前的论文需要，一般要求换算成密度，即每平方米多少个，个体数换算成的密度也叫做多度计算如下：如果每一个指管的收集到个体数为N,包括，那么多度：凋落物层=NLD/ALD+NLW/ALW土壤层0-5cm: =NS5D/ASD+NS5W/ASW土壤层5-10cm: =NS10D/ASD+NS10W/ASW土壤层10-15cm: =NS15D/ASD+NS15W/ASW土壤层15-20cm: =NS20D/ASD+NS20