（优质医学）化学发光免疫分析技术.ppt

化学发光免疫分析技术，1，第10章化学发光免疫分析技术，第1节感慨所述的化学发光2，化学发光效率第2节化学发光剂和标记技术，化学发光剂2，发光剂的标记技术，2，第3节化学发光免疫分析的类型1，直接化学发光免疫分析2，化学发光酶免疫分析3，电化学发光免疫分析4，临床应用发光免疫分析：将发光分析和免疫反应结合起来4、第一节的概述、5、放射免疫技术、酶联免疫技术、发光免疫技术、三种经典标记技术6、发光：是分子或原子中的电子在吸收能量后从基态(低能量能级)转变为激发态(高能量能级)返回基态发射光子的过程。 根据形成激发态的分子能源分为：光发光、生物发光、化学发光等。 7、光致发光是指发光剂(荧光素)一旦照射短波长的入射光，则电子吸收能量转变为激发状态，一旦返回基底状态，则发出长波长的可见光(荧光)。 所谓生物发光，是在生物体内产生的发光现象，例如萤火虫的发光，反应基质是萤火虫荧光体，在荧光素酶的催化下，利用ATP能量生成激发状态氧化型荧光体，回到基态时多馀的能量作为光子被放出。8、化学发光(chemiluminescence )是指化学反应过程中光的发光现象。 某种物质(发光剂)在化学反应时，吸收反应过程中产生的化学能，使反应的产物分子和反应的中间状态分子中的电子转变为激发状态，电子从激发状态返回基态时，以释放光子的形式释放能量的现象称为化学发光。 一、化学发光、九、一些化学反应可以释放足够的能量，将参与反应的物质激发成发光的电子激发态，如果激发的是反应产物分子，则该反应过程称为直接化学发光。 反应过程简述如下： a十BC*C*C h中为光子，C*表示c为单线激发态。10、激发能传递到没有参与其他化学反应的分子d，d分子被激发成电子激发态，d分子从激发态返回基态时发光的过程称为间接化学发光。 反应过程由a十BC*C*十DC十D*D*D十h、11、化学发光效率由生成激发态生成物分子的化学激发效率(CE )和激发态分子的发光效率(EM )决定。 化学发光反应的发光效率、光照能量的大小及光谱范围完全取决于发光物质的性质，各种发光反应与其特征化学发光光谱具有不同的化学发光效率。 二、化学发光效率，12，第二节化学发光剂和标记技术，13，涉及到化学发光反应的能量转移，以最终释放光子的形式释放能量的化合物称为化学发光剂或发光基质。 一、化学发光剂、14、可作为化学发光剂使用条件：发光的量子收率高； 其物理化学特性必须与标记或测定的物质一致能与抗原或抗体形成稳定的偶联结合物其化学发光多为氧化反应的结果在使用的浓度范围内对生物体无毒性。15、直接化学发光剂直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需要酶的催化作用，具有直接参与发光反应、在化学结构中发光的特有基团，可以直接标记抗原和抗体。 16、1 .吖啶在碱性条件下被H2O2氧化时，发出波长470nm的光，具有高发光效率，其激发态生成物N-甲基吖啶是该发光反应体系的发光体。17、2 .甲基吡啶基吡啶基吡啶基吡啶基钌RU(bpy)32是电化学发光剂，与供电子体三丙胺(TPA )在阳极表面同时失去电子而发生氧化反应。三吡啶钌、18、电化学发光剂的反应原理、19、促进酶反应的发光剂：利用标记酶的催化作用，使发光剂(基质)发光，将这样的酶催化后发光的发光剂称为促进酶反应的发光剂。 1 .鲁米诺及其衍生物2.AMPPD，20，1 .鲁米诺，鲁米诺发光原理，21，鲁米诺增强发光反应原理，22，2.AMPPD3-(2-螺金刚烷)-4-甲氧基-4- (3-膦酰氧基)苯- 1，2 -二氧杂环丁烷1 .碳化二亚胺(EDC )缩合法，2，发光剂的标识技术，24， 2 .高碘酸钠氧化法、25、3 .重氮盐偶联法、26、4.N-羟基琥珀酰亚胺活化法、27、1 .发光剂选择2 .标记蛋白质的性质3 .标记方法的选择4 .原料比5 .标记率6 .温度7 .精制和保存，影响标记的因素28、 用第三节化学发光免疫分析的类型29、吖啶直接标记抗体(抗原)，与被测定样品中的对应抗原(抗体)进行免疫反应后，形成固相包复抗体包复测定抗原吖啶酯标记抗体复合体时，只要加入氧化剂(H2O2)和NaOH形成碱性环境，吖啶酯就不需要催化剂而分解发生聚光器和光电倍增管接收单位时间内产生的光子能量进行记录，该分光的积分与测定的抗原的量成比例，可以计算由标准曲线测定的抗原的含量。 一、直接化学发光免疫分析，30，发光、y、y、y、磁微粒、y、特征抗原与抗体结合与未结合部分的分离、磁微粒技术、32、化学发光酶免疫分析(chemiluminescenceenzymeimmunoassay，CLEIA )是催化某种化学发光反应的酶，例如辣根过氧化物酶(HRP ) 用或碱性磷酸酶(ALP )标记抗原或抗体，与被测样品中的对应抗原(抗体)免疫反应后，形成固相包复抗体被测抗原酶标抗体复合体，洗涤后，加入基质(发光剂)，使酶催化剂和分解基质发光，用光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转换为电信号并放大二、化学发光酶免疫分析，33，该分析系统采用辣根过氧化物酶(HRP )标记抗体(或抗原)，与反应体系中的被测样品和固相载体进行免疫反应后，形成固相包复抗体-被测抗原-酶(HRP )标记抗体复合体，此时加入鲁米诺发光剂、H2O2和化学发光增强剂使化学发光辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析，34，辣根过氧化物酶标记化学发光免疫分析示意图，35 )该分析系统为碱性磷酸酶标记抗体(或抗原)，与反应体系中的被测样品和固相载体进行免疫反应后，形成固相包复抗体被测抗原酶标记抗体复合体，此时am PPP 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析，36，碱性磷酸酶标记化学发光免疫分析图谱，37，38，电化学发光免疫分析(electrochemiluminescenceimmunoassay， ECLIA )以电化学发光剂的三吡啶标记抗体(抗原)为电子供体，包括在电场中通过电子转移发生特异性化学发光反应的电化学和化学发光两个过程。 三、电化学发光免疫分析、39、电化学发光免疫分析系统中，磁性微粒为固相载体包复抗体(抗原)，用三吡啶鎓标记抗体(抗原)，在反应体系内与测定对象标本对应的抗原(抗体)进行免疫反应后，形成磁性微粒包复抗体测定对象抗原三吡啶鎓标记抗体复合体磁性微粒子在电极表面流动时，被安装在电极下面的电磁铁吸引，没有结合的标记抗体和标本流入缓冲液。与此同时，电极被加压，电化学发光反应发挥作用，使三吡啶鎓和TPA在电极表面进行电子转移，产生电化学发光，光的强度与测定抗原的浓度成正比。 40、电化学发光免疫分析示意图、41、电化学发光免疫测定示意图、42、标记磁性粒子在电场发光动作示意图、43、1 .甲状腺激素2 .生殖激素3 .垂体激素和皮质激素4 .贫血因子5 .肿瘤标志物6 .感染性疾病7 .糖尿病胰岛素、血清C-肽、血浆胰蛋白酶8 .心脏标志物9 .病毒标志物10 .过敏性疾病11 .治疗药物监测，四，临床应用，44，1 .什么是发光免疫分析？ 什么是化学发光免疫分析？ 2 .化学发光和荧光有什么区别？ 化学发光反应的条件是什么？ 什么是化学发光剂？化学发光剂必须具备这些条件？ 4 .吖啶化学发光的原理和特点是什么5 .促进酶反应的发光剂是什么其发光原理和特点？ 6 .三联吡啶钌发光的原理和特点是什么？7 .三丙炔在电化学发光中起着什么作用？8 .发光剂的标记有那些方法吗？ 有影响因素吗？ 9 .什么是直接化学发光免疫分析？ 其特点是什么10 .什么是化学发光酶联免疫分析？ 其