乳铁蛋白ppt课件

1、乳铁蛋白、2、乳铁蛋白不仅参与铁的转运，而且具有广谱抗菌、抗氧化、抗癌、调节免疫系统等强有力的生物功能，被认为是新型抗菌、抗癌药物和开发潜力的食品和饲料添加剂。 乳铁蛋白(Lactoferrin，Lf )是由约700个氨基酸残基组成的分子量约80KDa的单体糖蛋白，属于转铁蛋白家族，主要由乳腺上皮细胞表达分泌。 因为那个结晶呈红色，所以也有被称为“红蛋白”的学者。 定义3、乳铁蛋白广泛分布于哺乳动物乳汁及其他多种组织及其分泌液中(含泪液、精液、胆汁、滑膜液等内外分泌液和中性粒细胞，人乳中乳铁蛋白浓度约为1.0-3.2mg/ml，为牛乳中10倍(牛乳中含量为0.02-0.35mg/ml )，为普通母乳总蛋白的分布，4，血液中乳铁蛋白主要来自中性白细胞，骨髓、子宫内膜及胎盘等也分泌少量乳铁蛋白进入血液。5，6，在人泌乳期间，乳铁蛋白的含量随泌乳时间变化，如人初乳中乳铁蛋白达到6-14mg/ml，常乳期下降到1mg/ml。 7、乳铁蛋白由大约700个氨基酸组成。 乳铁蛋白的分子量为82.4KDa，有692个氨基酸残基的牛奶铁蛋白的分子量为83.1KDa，由689个氨基酸组成。 相当于乳铁蛋白n末端(1338 )和c末端(339692 )两个球状结构的位置，37%(125个)的氨基酸完全相同。 结构和性质，人乳铁蛋白和乳铁蛋白的结构相似，氨基酸残基构成单链，两端折叠成球形(n叶和c叶)，中间用螺旋肽链连接，呈“2枚银杏叶型”的结构。 8、晶体结构中Phe17Leu29之间的肽链形成-螺旋结构，Ser33Arg39之间的不规则卷曲结构将一个平行-折叠结构连接到n端。 Phe17Leu29之间的肽片段具有强抗菌活性，将其a螺旋转化为折叠结构后抗菌活性大大提高，可能是因为折叠结构容易与细菌表面接触。 每个分子有两个金属键部位，每个部位可以键合Fe3和HCO3-或CO32-，9，乳铁蛋白对胰蛋白酶类具有较强的抗分解能力，特别是键合铁离子增强抗分解能力，因此在肠道内不易分解，作为完全的分子被吸收。 该抗蛋白酶水解的特性可能与糖基化有关。 铁离子键区域含有3个阴离子配体(2个酪氨酸残基、1个天冬氨酸残基)和1个组氨酸残基，可与铁离子形成稳定的键。 在酸性条件下对热稳定的碱性条件下，超过80时开始凝胶化。 根据、10、Lf键Fe的多少，可分为缺铁型乳铁蛋白(apoLf )、铁半饱和型乳铁蛋白和铁饱和型乳铁蛋白(Holoix种形式。 不同形式的Lf具有不同的抗变性能力，其抗巴氏杀菌热变性能力依次为Holoix铁半饱和型乳铁蛋白apoLf。 牛奶Lf的等电点pH为8.2左右，人Lf的等电点为6左右。11、1、乳铁蛋白具有广谱抗菌作用，Lf抗菌效果取决于微生物对铁的需求程度、外来铁的生物利用率、Lf的铁饱和度、盐类、pH值、抗体和其他免疫物质、介质等。 生物学功能12，首先，Lf对革兰氏阴性菌和阳性菌的抑菌作用是乳铁蛋白结合铁，损失细菌生长所需的基本元素铁，其次，Lf通过氨基末端强阳离子结合区，增加细菌细胞膜的渗透性，使细菌脂多糖从外膜渗出，直接达到杀菌作用，Lf得到的抑菌通过蛋白酶水解Lf得到低分子量肽，大大增强了这些肽的抗菌活性，抑制了含有抗Lf菌株的g和g菌的生长。目前认为Lf的抗菌机制可能有三个方面：、13、2、乳铁蛋白具有抗病毒作用，天然Lf是人免疫缺陷病毒和巨细胞病毒具有抑制MT4细胞和成纤维细胞病变的作用，还具有抑制流感病毒的活性，主要是由于碳水化合物残基中含有酰基酸，病毒对靶细胞的乳铁蛋白通过抑制病毒进入细胞，减轻对人肝细胞的损伤。14、3、乳铁蛋白具有抗氧化作用，研究结果表明乳铁蛋白能抑制铁诱导脂质过氧化过程中硫代巴比妥酸和丙二醛的生成。 牛奶铁蛋白还能分解酵母中的tRNA，具有核糖核酸酶的活性，能抑制超氧离子的形成。 所有这些都可以降低体内自由基对动脉血管壁弹性蛋白的破坏，达到动脉粥样硬化和冠心病防治的目的，15，4，乳铁蛋白具有抗癌作用，乳铁蛋白对消化道肿瘤如大肠癌、胃癌、肝癌、胰腺癌具有化学预防作用，从而导致肿瘤转移乳铁蛋白还启动了宿主防御系统的初始活化反应，在控制不同类型淋巴细胞比例变化对机体免疫反应的影响、提高免疫力等方面发挥了促进作用。 16、5、乳铁蛋白调节机体免疫反应，乳铁蛋白调节巨噬细胞活性，具有刺激淋巴细胞合成的能力，而中性粒细胞是含乳铁蛋白最多的细胞，机体感染时释放乳铁蛋白，释放的乳铁蛋白夺取病原菌铁离子致后者死亡研究表明乳铁蛋白具有产生抗体、t细胞成熟、调节淋巴细胞中自然杀伤细胞比例的作用，17，6，乳铁蛋白调节胃肠铁的吸收，乳铁蛋白通过其氨基和羧基末端两个铁结合区与铁可逆结合，维持铁元素十二18，7，乳铁蛋白与药物的协同作用，研究表明乳铁蛋白与多种抗生素和抗病毒药物具有协同作用，减少药物用量，减少抗生素和抗真菌剂对人肝的用量。 肾功能障碍。 同时，提高体内微生物的药物敏感性。 实验证明，影响、19、20、Lf功能的因素在婴幼儿出生初期，Lf分解度较低，随后急速上升，生理功能也逐渐消失。 Lf的抗菌作用具有很强的铁依赖性，只有在处于不饱和状态时才具有很强的抗菌能力，但在Lf处于铁饱和状态时不存在抗菌作用。 pH值也影响Lf的活性，在pH中性环境中Lf的活力强，在pH6中几乎没有抗菌功能。 盐的种类对Lf的抗菌能力有很大影响，碳酸盐能增强Lf的抗菌作用，而柠檬酸盐能减弱Lf的抗菌作用，肠液中存在HC03，有利于Lf发挥抗菌功能。 抗体和其他免疫物质也影响Lf的抗菌能力，如Lf与初乳中的IgA、IgG具有协同抗菌作用。 Lf在维持其活性不分解的基础上发挥生理功能。21、乳铁蛋白的制备方法，牛奶初乳LF丰富，可通过色谱、超滤法、盐析法、酸沉法等方法从初乳中提取乳铁蛋白。 牛初乳用冷冻离心分离机脱脂，在35下加入适当稀释的葡萄酶液，分离除去酪蛋白.微滤膜是进行超滤研究的材料。 MWCO为100000的超滤膜首次进行超滤，透过液在MWCO为50000的超滤膜进行第2次超滤，然后用MWCO为10000的超滤膜浓缩，冷冻干燥后得到Lf的粗品.超滤法.22 Lf的分离纯化和测定方法，目前， 鉴定乳铁蛋白的方法主要有免疫二扩散法、酶联免疫测定法(ELISA )、反相高效液相色谱法等，23、反相高效液相色谱法测定牛初乳中乳铁蛋白含量的色谱条件柱： KromasilC4柱(250 mm *4) .流动相：乙腈-水-三氟乙酸(80:20:0.1 )流速0.6mL/min； 检测波长：220nm，柱温度： 25； 样品量为10.0L，样品溶液的制备量为采集新鲜牛初乳离心除去脂肪，得到的脱脂奶粉的pH值为4.6，酪蛋白离心除去收集乳清，然后加入pH值为6.8，硫酸铵使饱和度为40%，离心提取乳清液，捕集分子量为300Ku 用30Ku的超滤膜包装进行超滤，用30Ku的膜包装收集过滤后的回收液进行离子交换色谱，收集洗脱峰的是样品溶液。 精密量取24、乳铁蛋白标准品1mg，制备浓度分别为1、0.5、0.25、0.125、0.05、0.025mg/mL的对照品溶液。 当乳铁蛋白样品浓度为25-1000g/mL时，线性关系良好。25、取样进行RP-HPLC检测。 如图3所示，离子交换色谱法后收集各洗脱峰，其中峰1、2为未吸附蛋白流通液，峰3为低盐浓度洗脱液，峰4为高盐浓度洗脱液，即提取的乳铁蛋白洗脱液。 图4为峰4洗脱液的RP-HPLC测定结果。 结果表明，牛初乳经脂肪、酪蛋白、超滤和离子交换色谱后提取乳铁蛋白的平均纯度为92.23%，RSD为1.3%。 26、作为有效的补铁成分，Lf可以作为食品添加剂使用，改变婴幼儿和孕妇一般缺铁的现状，制备含铁饮料和补铁胶囊，提高造血功能，改善贫血。 在食品、乳制品(婴幼儿用奶粉等)和口香糖中添加Lf可以调节免疫功能。 在国外，乳制品中补充了益生菌和Lf，制作了药片和速溶饮料，作为选手的营养品。 将Lf加入碳酸饮料、烘