2017 药物相关基因检测在肾内科的临床应用

,药物相关基因检测在肾内科的临床应用,中山大学附属第五医院药学部2017. 12. 26,“别嘌醇”致Stevens-Johnson综合征 （剥脱性皮炎）,每年220万患者出现药物不良反应每年需花费1770亿美元药物撤离市场的最主要原因之一导致5%住院率每年70万人伤残或死亡排在美国住院病人死因的第6位59%药物不良反应由药物代谢酶的遗传多态导致,National Vital Statistics Reports, Vol. 56, No. 10, March 7, 2008, 2001United States Data,药物不良反应很严重,药物治疗个体反应差异是普遍现象,使用相同剂量后体内药物浓度和总量不同,药物有效性的个体差异,降压药的剂量范围,降糖药的剂量范围,年龄老年，儿童，新生儿,性别,体重/身高,合并症,病程,影响治疗效果的因素,器官功能肝脏, 肾脏, 心脏,环境因素食物 /吸烟 / 合并用药,无效,安全有效,毒性,相同治疗方案,决定性因素！,药物效应和毒性差异,基因组,基因多态性,药物靶点,药物转运体,药物代谢酶,基因,基因相关的剂量效应,与药物作用相关蛋白的基因多态性多有剂量效应,精准医学的演化,精准医学：个体化和人人受益,59%药物不良反应由药物代谢酶的遗传多态导致,CG,TA,SNP,CYP2C9*2,No enzymatic activity,430CT (Arg144Cys),Cys,个体差异的遗传基础-单核苷酸多态性(SNP),90%以上的人类变异是由SNP引起导致人类药物代谢和反应差异的主要原因,GT突变,遗传变异的类型,.C C A T T G A C.,.C C A T T G A C.,G G T A A C T G.,G G T A A C T G.,.C C A T T G A C.,.C C G T T G A C.,G G T A A C T G.,G G C A A C T G.,.C C G T T G A C.,.C C G T T G A C.,G G C A A C T G.,G G C A A C T G.,wt/wt野生型纯合子,SNPs的基因型,X,X,X,wt/mut野生型杂合子,mut/mut突变纯合子,遗传因素引起个体差异的作用环节,通过检测药物相关基因，预先将患者分为：（1）药物的应答组或无应答组（2）药品不良反应的高风险组或低风险组（3）设计个体化给药方案（选择合适的药品，计算给药剂量）,不良反应最小疗效最佳,精准用药,科室相关药物,阿司匹林/GP IIIa PlA2 、PEAR1、PTGS1、GP1BA、LTC4S、GSTP1别嘌醇/HLA-B*58013.他克莫司（FK506）/CYP3A5*34.糖皮质激素冲击（甲强龙等）/PAI-1（4G/5G）,别嘌醇,别嘌醇,别嘌醇,别嘌醇,他克莫司,他克莫司,病例,病例,病例,检验结果,结果解读,启示,糖皮质激素冲击,长期接受糖皮质激素治疗或接受大剂量糖皮质激素冲击治疗的患者中9%-40%可能会发生股骨头坏死，同时伴有糖皮质激素诱导的骨质疏松。研究发现，PAI-1基因的4G等位基因发生股骨头坏死的风险比5G等位基因高23倍。ABCB1基因型的3435C比3435T发生股骨头坏死的风险也高23倍。相关药物基因：1、纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）：内源性纤溶活性的关键调节因子，2、ABCB1 3435：p糖蛋白家族，药物转运蛋白，MDR1基因,每日剂量、激素暴露时间与股骨头坏死有着密切关系,PAI-1 4G5G基因型频率与股骨头坏死(%),糖皮质激素冲击,ABCB1 3435CT基因型频率与股骨头坏死(%),注：CT、TT者，均为PAI-1 4G5G,糖皮质激素冲击,糖皮质激素冲击,基因型风险度与股骨头坏死发生概率,糖皮质激素冲击,技术背景,正在应用的基因检测技术, Southern blot分析 PCR与实时荧光PCR 基因芯片（aCGH/CMA） 荧光原位杂交（FISH） Sanger测序 * 新一代测序 （NGS）,实验室选择试验平台,目前实验室选择的检测平台是属于一代测序的数字荧光杂交测序。,优点：1.检测速度快。2.非扩增，抗污染能力强，试验准确。对实验室要求较低。3.操作方便，无需提取基因组，白细胞膜裂解后即可测序。,缺点：1.无法检测长序列。2.无法定量，只能检测以SNP为主的定性。3.只能检测已知突变，由于无PCR步骤，DNA链无延伸。无法检测未知突变。,我院开展药物基因检测情况,TL998A荧光检测仪 基本原理：用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行特异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。 具有快速、检测信号强、杂交特异性高和可以多重染色等特点。,初期对所有位点进行准确性验证,与Sanger法进行比较，一致性为99%。,各个平台实验室医院每年按期参与卫生部与上海临床检验中心的室间质评，目前为止所有医院参与检测次数达300次，通过率超过98%。,2012年1月起至今，200余家三甲医院采用数字荧光分子杂交测序技术，建立个体化治疗基因检测实验室，同时辅助实验室人员开展药物基因组学服务工作。,国内诸多三甲医院的选择,明确的操作SOP,根据设备及试剂特性，制定相应的操作SOP。保证各个实验室操作，质控统一，可控。定期对所有实验室设备进行维护保证检测结果准确。,样本运送温度和时间的要求。DNA检测样本，可室温下运送， 建议8h内送至实验室。如所需运送时间较长，则应将样本置于冰上，必须保证样本与冰屑充分接触， 且冰屑应达到样本的高度，建议采集后4h内送到。 样本保存温度和时间的要求。用于DNA检测时，样本可在28 保存72h。如果样本中含有红细胞，应尽可能去除红细胞后，再进行冻存。 DNA：如果纯化后的DNA无DNA酶的污染，则可在TE缓冲液中室温保存26周；2-8保存一年；-20保存7年；-70保存7年以上。怀疑可能存在 DNA酶污染的样本，则保存在-20以下。,样本运输及保存要求,目前可检测的