金标类诊断试剂生产及质量控制技术指导原则

金标类诊断试剂的生产和质量控制技术指导原则(征求意见稿)这种金标记试剂是应用金胶体免疫技术将金胶体标记抗体或抗原复盖在玻璃纤维膜、聚酯膜或其他载体上，将相关抗原或抗体固相连接到硝酸纤维膜上，应用色谱原理检测样品中抗原或抗体的快速检测试剂。 本技术指导原则适用于第三类体外诊断试剂中金标试剂的生产和质量控制，考虑到本类诊断试剂适用的原理、方法、分类等复杂性，本指导原则难以逐一复盖，仅从试剂的主要原材料、制造工艺、半成品和成品中提出质量控制要点，其他诊断试剂可供参考。 国家药品监督管理部门应科技发展需要及时组织修订本技术指导原则。一、基本原则(1)开发、生产用的各种原料、辅料应制定相应的质量指标，满足有关法规的要求。(二)诊断试剂生产必须由药品生产和质量管理规范组织生产的企业应具备相应的专业技术人员、相应的仪器设备和生产环境。(3)诊断试剂的研制要按照科学、规范原则组织，各反应条件的选择和确定必须符合基本的科学原理。(四)开发生产过程中使用的材料和技术，必须充分考虑可能涉及的安全性。二、原材料质量控制(一)主要生物原料；与产品质量最密切相关的生物原料包括各种活性抗原、重组抗原、单克隆抗体、多克隆抗体和多肽类生物原科。 这种原料可以用于胶体金标记、包复硝酸纤维的膜以及用于质控线制造的抗原和抗体等。1 .外观肉眼观察，大多数生物原料为透明液体，不含异物，混浊、分散或沉淀，为白色粉末，不含其他颜色杂质，特殊生物原料必须有相应的外观标准。2 .纯度和分子量主要用SDS-PAGE电泳和电泳结果扫描仪进行测定，其他适当的方法，例如高效液相法等也可以进行测定。 根据标本原料的分子量选择合适的丙烯酰胺凝胶浓度进行电泳。 一般来说，每条电泳道的样品量为5mg，同时参考已知的分子量标准，采用适当的电泳电流和电泳时间的电泳后凝胶可以用卡玛蓝染色或银染色法染色。 染色的凝胶用电泳扫描仪分析了原料的纯度和分子量。 作为免疫诊断试剂用的生物原材料，用银染色法染色时，纯度一般超过90%，用商业蓝染色时，纯度一般超过95%。3、蛋白质浓度蛋白浓度可以用Lowry法、208nm光吸收法、缩二脲法等测定。4、效价效价的测定一般根据蛋白含量的测定结果采用倍比稀释法进行，效价应满足规定要求。5 .功能性实验功能性实验是指标生物原料在试剂盒试剂实际生产中的应用情况，一般调查了该原料应用后试剂的灵敏度、特异性和稳定性。 用于制造控制线的抗原或抗体可以以其他适当的方式进行功能实验。(二)生物辅助材料生物辅助材料是生产过程中作为蛋白保护剂使用的生物原料，主要包括牛血清白蛋白材料等。 这些生物原料的质量标准必须符合2000年版中国生物制品主要原辅材料质检标准规定的标准，符合企业生产。牛血清白蛋白外观：淡黄色冻干粉末，无湿气，无结块，无肉眼可见的其他杂质颗粒。溶解性：牛血清白蛋白配合10%溶液，溶解时间不超过15分钟。 1%水溶液pH值：6.57.1； 1%水溶液OD403的值： 0.15。总蛋白含量：采用双缩脉法测定，质量标准为95%。硫酸铵含量：纳米试剂法测定，标准硫酸铵曲线检测硫酸铵含量，其标准为0.1%。尿素含量：用二乙酸单肟法测定，应用标准尿素曲线可检测尿素含量，其标准为0.1%。总蛋白中BSA含量：采用硝酸纤维素膜电泳法。 其标准为95%。BSA净含量：总蛋白含量乘以总蛋白中BSA含量，其标准为90%。功能性试验： 10%作为样品进行酶联免疫测定，不得出现特异性反应。(3)化学原料参照中国生物制品主要原辅材料质控标准分析纯水平检验。 主要检测指标包括一些基本的一般盐类检测、溶液PH值检测。 溶解状况的检测，干燥重量的检测。 灼热残渣等。1、无机类主要包括氯酸、氯化钠、磷酸氢二钠。 磷酸二氯化钠、碳酸钠、碳酸氢钠等。2、有机类主要有柠檬酸、柠檬酸钠、蔗糖、吐温20、乙二胺四乙酸二钠、三羟氨基甲烷、氨基吡啶、溴化钾、氢氧化钠、葡萄糖、硫酸铵、硫酸钾等。(四)其他原料1 .硝酸纤维素膜硝酸纤维素膜具有厚度、孔径等要求，毛细管移动速度、韧性(切断时膜破损引起的不良率)、均匀性(厚度偏差范围、毛细管移动速度偏差范围)应满足规定的要求。2 .玻璃纤维或聚酯纤维薄膜及滤纸玻璃纤维或聚酯纤维的膜或滤纸具有厚度、毛细管移动速度、重量等要求，均匀性(厚度偏差范围、毛细管移动速度偏差范围、重量偏差范围)应满足规定的要求。3 .玻璃纤维膜全血检测所用的金标试剂具有过滤红细胞的玻璃纤维膜和其他材料不吸附蛋白质的特点，具有厚度、孔径等要求。4 .塑料衬里塑料衬里必须具有厚度、硬度(切割时不可一次切割的百分比)、尺寸(符合标记)、粘性(切割时玻璃纤维和塑料衬里分离的百分比)等要求。5、其他粘胶纸、铝箔袋、说明书、包装外箱、瓶和干燥剂等必须建立相应的质量控制标准。三、试剂盒的制备本种试剂的生产包括胶体金和胶体金标记抗原或抗体的制备、胶体金标记包复、检测线和质量控制线的制备、胶体金标记物、包复抗原或抗体等浓度的确定、各种工作溶液的配置等步骤，通过产品的半成品检定和产品检定两个质量控制过程完成。(1)胶体金标识物的制备用柠檬酸三钠还原法或其他方法制备胶体金时，胶体金粒子的大小符合规定，胶体金标记物在510550nm的波长下需要最大吸收值，应在28保存，在规定的保存期内使用。 用适当的方法确定胶体金标记物，确定复盖抗原或抗体的活动浓度，使活动浓度的胶体金标记物吸附在玻璃纤维或聚酯纤维膜上。(2)检测线及质量控制线的制备取已确定使用浓度的相关抗原或抗体，在硝酸纤维素膜上制作检测线，用同样的方法制作质量控制线，按生产工艺在规定的温度、湿度条件下干燥，在规定的湿度(用验证方法确定相对湿度要求)条件下保管。 检测线和质量控制线应有分离距离的要求，对所用的金标记玻璃纤维和硝酸纤维素薄膜等进行质量检测，记录尺寸、外观、包装和吸附性能等，记录批号、数量、标记，不得混合批号不同的玻璃纤维和硝酸纤维素薄膜。(3)贴、剪或装袋；贴膜、切断、装袋必须在湿度(用验证方法确定相对湿度的要求)的要求条件下操作。 要求切断的胶片的宽度。四、质量控制半成品和成品的质量控制所使用的质量控制品包括灵敏度、特异性、均匀性等指标，例如有国家标准品和参考品的产品必须使用国家标准品(参考品)和标准化的质量控制品进行检定。(一)半成品质量控制品；1、半成品样品检查员按批号抽取规定数量的半成品，编号等待检查。2、半