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文档简介

TotalDNAextractionfromeukaryotictissue,动物组织DNA的提取,讲解人：蔡婷芳,实验目的,了解动物DNA的成分掌握DNA提取的原理和操作过程,DNA提取原则,保证DNA结构的完整性纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质排除有机溶剂和金属离子的污染蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度排除其他核酸分子的污染,实验试剂和仪器,0.14mol/LNaCl1mol/LNaCl溶液0.015mol/L柠檬酸钠溶液氯仿-异戊醇95%乙醇仪器：电子天平玻璃棒离心管离心机吸量管试管研钵,实验原理动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖核酸(DNA)大部分与蛋白质结合形成核蛋白。RNA核蛋白和DNA核蛋白在不同浓度氯化钠溶液中的溶解度有显著区别。DNA核蛋白在0.14mol/L氯化钠中溶解度低，但在12mol/L氯化钠中溶解度高；RNA核蛋白在0.14mol/L氯化钠中仍有相当大的溶解度。所以调节氯化钠浓度，可使RNA核蛋白和DNA核蛋白分步提取。,氯仿-异戊醇溶液可以使核蛋白变性沉淀，将核酸物质萃取出来；再向萃取液中加入适量乙醇，可使DNA析出。氯仿异戊醇抽提和乙醇沉淀方法在DNA纯化研究中非常常用，氯仿-异戊醇抽提的原理是，氯仿可使蛋白质变性并加速有机相与液相分层；异戊醇有助于消除抽提过程中产生的气泡。而DNA不溶于乙醇等有机溶剂，因此可以通过乙醇沉淀来纯化和浓缩DNA。,所以动物细胞中DNA提取一般有以下几步:首先是机械法破细胞抽提；然后去除蛋白质，糖类等细胞内杂质污染；最后纯化出。,实验步骤,取新鲜兔子肝组织3g，加入0.14mol/LNaCl，0.015mol/L柠檬酸钠溶液6mL，在研钵中加入少量石英砂仔细研磨成匀浆；将匀浆倒入离心管，4000rpm，15min，弃上清；沉淀中加入15mL1mol/LNaCl，混匀，搅拌数分钟，4000rpm，15min，弃沉淀；上清转移至另一离心管，加入等体积的氯仿-异戊醇，剧烈振摇10min，再4000rpm，10min；取上层，转移至另一离心管，加入等体积95%乙醇，可见白色丝状沉淀，可用玻
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