凝血课件

凝血与凝血异常疾病,血液凝固,血液由液体状态转为凝胶状态的过程,是止血功能的重要组成部分,血液凝固,血管损伤后出血止血过程：1. 血管收缩 血管变窄 目的是减少血液流向受损区域2. 血小板堆积 血小板快速流向创伤处 粘附在血管壁上 凝血因子促进血小板堆积3. 纤维蛋白凝块形成 在血小板堆上形成紧密的纤维蛋白网 通过凝血因子的交互作用形成纤维蛋白, 该作用类似“多米诺骨牌”,Structure of Blood Clot,在损伤处形成凝块: 内皮细胞释放抗凝物质 (肝素,AT 蛋白C).,（一）凝血因子,参与血液凝固的因子至少有14个：经典FIXIII，激肽系统的激肽释放酶原（prekallikrein, PK）和高分子量激肽原（high molecular weight kininogen, HMWK）,一、凝血机制,除FIV（Ca2+）外，其余均为蛋白质 除组织因子（TF）外，其他凝血因子均存在于正常血浆中,1维生素K依赖的凝血因子,包括FII、VII、IX和X共同特点：分子结构中的氨基（N）末端含有-羧基谷氨酸残基（- Gla）- Gla在肝细胞内的生物合成依赖Vit K 的介导具有结合Ca2+的能力，并借助于Ca2+与磷脂膜结合，Ca2+起“搭桥”作用（-羧基谷氨酸Ca2+-磷脂膜）,若缺乏Vit K 或上述4个因子N端无- Gla 则无凝血活性，可导致新生儿出血或获得性成人出血性疾病。,1)因子II-凝血酶原，prothrombin 分子量72000，血浆浓度1500nmol/L生理活化途径：,FII,A和B两条肽链构成的凝血酶（FIIa）,凝血酶原酶,精274-苏275肽键断裂，释放出F1+2,中间产物,凝血酶原酶,精323-异亮324肽键断裂,凝血酶使纤维蛋白原转变为纤维蛋白遗传性凝血酶原缺陷症非常罕见， 为常染色体隐性遗传性疾病。,2)因子VII-稳定因子，stable factor,分子量48000，血浆浓度10nmol/L组织损伤时，TF释放到血液中，FVII与其结合，分子构型改变，暴露活性部位，成为VIIa，凝血活性增强约100倍TF-FVIIa-Ca2 ,可激活FX和IX，使 内源及外源凝血途径相沟通由TF释放到TF-FVIIa-Ca2形成的过程是体内最重要的凝血途径FVII缺陷常合并严重出血。,3) 因子IX-血浆凝血活酶成分 plasma thromboplastin component,PTC 分子量57000，血浆浓度80nmol/L。可被FXIa或TF-FVIIa-Ca2+复合物激活,FIX,FXIa,精146-丙147肽键断裂,无活性双链-FIX,FXIa,使重链上的精181-缬182肽键断裂,有活性-FIXa, FIX缺乏为血友病B，是一种性联隐性遗传性疾病,4) 因子X-stuart-prower因子 分子量55000，血浆浓度160 nmol/L。处于-内源、外源及共同途径的交点， 具有重要的生理和病理意义。可被IXa-VIIIa-Ca2+-磷脂、TF-FVIIa -Ca2+ 激活,有活性的-FXa,FX,重链上的精51-异亮52肽键断裂，从其N端释出一小肽,从其C端释出含17个氨基酸残基的一小肽,有酶活性的-FXa, FX缺陷为常染色体隐性遗传性疾病，两性均可受累。,2接触凝血因子,指参与内源性凝血途径接触相激活的凝血因子，包括FXII、XI、PK、HMWK 共同特点：通过接触反应启动内源凝血途经，并与激肽、纤溶和补体等系统相联系缺乏并不出现出血现象（除FXI缺乏有轻度出血外），反而表现出不同程度的血栓形成倾向或纤溶活性下降,1)因子XII-接触因子， hageman factor,HF为单链糖蛋白，是内源凝血途径的始动因子。FXII的激活不再是体内凝血的一个重要环节，而对纤溶系统的激活作用更大）体外凝血试验仍有沿用各种物质去激活FXII,FXII的激活：,固相激活,与带负电荷的物质接触 - 体内：胶原、微纤维、基底膜 长链脂肪酸等 - 体外：玻璃、白陶土、硅藻土等分子构型发生改变活性部位暴露 FXIIa,FXII的激活：,液相（酶类）激活,单链FXII,激肽释放酶纤溶酶凝血酶胰蛋白酶等,在精353-缬354肽键处断裂,- FXIIa（重链和轻链，酶活性中心位于轻链）,激肽释放酶,在重链精334处裂解,- FXIIa仍有酶活性,血液中FXI是与HMWK结合成 复合物的形式存在。FXIa激活纤溶的作用大于激活FIX， 甚至大于FXIIa对纤溶的作用,FXI,凝血酶 或体外FXIIa,精369-异亮370肽键断裂,FXIa（活性中心位于2条轻链C端的丝氨酸残基）,2)因子XI-血浆凝血活酶前质， plasma thromboplastin antecedent ,PTA,3)激肽释放酶原 prekallilarein ,PK与FXI相似，PK在血液中是与 HMWK结合成复合物的形式存在。 PK缺陷与FXII一样，病人无任何 出血症状，却常合并血栓栓塞性疾病,PK,FXIIa,精371-异亮372肽键断裂,K（酶活性中心位于轻链， 重链区有于HMWK结合 的部位）,4)高分子量激肽原 high molecular wight kininogen ,HMWK 血液中HMWK与PK、FXII结合成复合物的形式存在，起辅因子作用。参与FXII、FXI的激活生成的激肽有扩张血管、增加血管通透性及降低血压的作用HMWK缺陷与其他接触活化因子缺陷病人一样，无出血症状。,3对凝血酶敏感的凝血因子,包括FI、V、VIII、XIII共同特点：对凝血酶甚为敏感，从而 发生酶促反应或被激活,1)因子I-纤维蛋白原， fibrinogen ,Fg(FIB)为血液凝固的基础物质，是凝血酶作用的底物。,纤维蛋白形成过程,Fg,FM,纤维蛋白聚合物,交联纤维蛋白,凝血酶FXIIIa,2)因子V-易变因子， labile factor 在体外，是最不稳定 的凝血因子， 是FXa的辅因子，参与II的激活。 起始凝血酶、FXaFV FVa FV缺陷有副血友病之称， 有轻度出血症状。,3)因子VIII复合物-抗血友病球蛋白， antihemophilic globulin ,AHG 由因子VIII促凝活性与vWF形成复合物形式存在（1：99） 是FIXa的辅因子， 可被IIa激活 FVIIIa FVIII缺乏为血友病A， 是最常见的出血性疾病。,4)因子XIII-纤维蛋白稳定因子， fibrin stabilizing factor ,FSF, 由2个a亚单位和2个b亚单位组成的四聚体（a2b2） 活性部位在a亚单位，b亚单位无催化活性,FXIIIa2链,IIaCa2+,N端的精-甘键断裂,无活性的a2b2,Ca2+,有谷氨酰胺酶活性的FXIIIa(a2),4其他凝血因子 1)因子III-组织因子，组织凝血活酶 tissue factor ,TF 广泛存在于各组织细胞中，特别在脑、胎盘、肺中含量丰富，正常血中不含TF。内皮细胞 内毒素、免疫复合物、单核细胞(含低TF活性) IL-1、TNF等 刺激下 可以合成和表现 TF。 FIII(辅因子)与FVII或FVIIa形成复合物。,2)因子IV-钙离子， calcium , Ca2+与其他二价金属离子（Mg2+和Zn2+ ） 共同参与凝血过程Ca+参与：FXI和XIII的活化。 FIXa与FVIIIa、(内源) FIII与FVIIa、 (外源) FXa与FVa(共同) 等复合物的活化。 在凝血反应中，Ca+主要促使活化的凝血因子与磷脂表面形成复合物。 Ca+ 对血液凝固起关键作用，无Ca+ 血液不能凝固。,凝血因子特性 丝氨酸蛋白酶：II、VII、IX、X、酶活性 XI、XII、PK 辅因子 ：III、V、VIII、HMWK依赖 VitK ：II、VII、IX、X 在吸附血浆中没有：VitK依赖因子 在血清中没有 ： Fg、V、VIII、XIII,储存不稳定 ：V、VIII 内源 ：VIII、IX、XI、XII、 PK、HMWK参与凝血途径 外源 ：III、VII 共同 ：I、II、V、X、XIII IV 3个途径都有参与,（二）凝血机制,1凝血过程的瀑布学说内源凝血途径（intrinsic pathway）是指由FXII被激活至FIXa-VIIIa-Ca2+-PF3复合物形成过程。外源凝血途径（extrinsic pathway）是指从TF释放到TF-VIIa-Ca2+复合物形成的过程。共同凝血途径（common pathway）是指从FX的激活到纤维蛋白形成的过程。它是内、外凝血系统的共同凝血阶段。,两条凝血途径并不是完全独立，而是相互密切联系在机体的整个凝血过程中可能发挥不同的作用,在体内已不再是主要的凝血途径,是体内凝血的主要途径，也是发生止血血栓病理改变的主要原因之一,凝血过程（凝血活酶形成）,内源性凝血途径 外源性凝血途径 （接触胶原纤维） （组织因子） Ca2+ XIIa XII VIIa VII XI XI a IX IXa VIII Ca2+ PF3 X Xa，V，Ca2+，磷脂 VIII Ca PF3 X Xa V Ca 磷脂,TF-FVIIa-Ca2+,凝血过程（凝血酶形成）,Xa Va Ca2+ 磷脂 凝血酶原 凝血酶,凝血过程（纤维蛋白形成）,凝血酶 纤维蛋白原 XIII 纤维蛋白单体 XIIIa 以共价键聚合的纤维蛋白网络,缓激肽,起始阶段,复合物,TF,激活,复合物,凝血酶原酶复合物,扩增阶段,可溶性 Fb,不溶性 交联的Fb,Fg,HMWK,PK/K,2. 凝血修正机制,起始阶段TF释放激活FVII更重要. 而FXII的作用非必需. 复合物 (VIIa-TF, Xa-Va, VIIIa-IXa) 粘附到细胞（血小板）膜上 相继步骤: 起始, 扩增, 凝血酶大量形成, 纤维蛋白形成,起始阶段：,TF释放，形成TF-VIIa复合物TF-VIIa复合物激活FX (和IX)Xa-Va复合物 激活II，形成 少量凝血酶,凝血修正机制,凝血酶激活FVIII ，与IX 形成复合物 VIIIa-IXa复合 物激活 FX (更有效),扩增阶段：,凝血修正机制,Xa-Va复合物增加 催化大量凝血酶 激活，形成纤维 蛋白,凝血酶大量形成：,凝血修正机制,凝血酶将Fg裂解出2个纤维蛋白肽 形成FM (D-E-D),FM形成单体聚合物 (-DED-DED-DED-),在FXIIIa作用下聚合物交联形成不溶性纤维蛋白,纤维蛋白形成：,凝血修正机制,二、凝血检查,（一）筛选试验1内源凝血系统凝血因子筛选试验（1）全血凝固时间（CT）静脉血离体后与异物表面接触，FXII和内源凝血系统被激活，最后生成Fb而血液凝固，此即为凝血时间。,毛细血管采血法 - 以玻片法和毛细管法为代表， 敏感性差，已属淘汰静脉采血法（临床常用）： - 普通试管法 - 硅管法（SCT） - 活化凝血时间（ACT）,- 普通试管法： 仅能检出FVIII:C2%的重型血友病患者，不敏感，趋于淘汰,- 硅管法（SCT）： 涂有硅油的试管加血后，硅油使血液与 玻璃隔离，凝血时间较普管法长。 较敏感，可检出FVIII:C45%的血友病患者,- ACT： 在普通试管中加白陶土-脑磷 脂混悬液，充分激活FXII、XI， 并为凝血反应提供丰富的催化 表面，启动内源凝血途径，引 发血液凝固。 是检出内源凝血因子缺陷敏感的筛选试验之一，也可作为体外监测肝素治疗用量较好的指标之一。,参考值 - 普管法：510min - SCT：1532min - ACT：114s205s,临床意义 1.延长- 除FVII和XIII外，其他所有凝血因子缺乏- 较显著的FVIII、IX减低的血友病- vWD- 严重的FV、X、Fg和II缺乏，如肝病、抗凝剂 （肝素，双香豆素）等- 继发性/原发性纤溶活性增强- 病理性抗凝物质增加（抗FVIII或IX抗体，SLE等）,2.监测肝素抗凝治疗的用量- 体外循环时，由于APTT不能反映体内肝素的安全水平，故用此3.缩短- 血栓前状态、DIC高凝期等- 血栓性疾病（心梗、脑血管病变等）,（2）血浆复钙时间（RT）在去钙血浆中，重新加入适量的钙，内源凝血过程得以重新恢复所需要的时间。参考值 2min48s30s（4min30s） 临床意义 （同CT） 延长：存在抗凝物质或内源凝血因子缺乏。可用于筛选有否异常抗凝物质增加的疾病。,（3）活化部分凝血活酶时间（APTT）原理 37下以白陶土激活FXII、XI， 以脑磷脂（部分凝血活酶）代替血小板提供的凝血催化表面，在Ca2+参与下，观察乏血小板血浆凝固所需时间。 APTT是内源凝血系统较为敏感的、最常用的筛选试验 手工法和仪器法,参考值 - 每个实验室应建立所用方法相应的参考值 - 因试剂不同而异，2035s （国产试剂：3037s；进口试剂：2530s） - 测定值比正常对照值延长10秒以上有临床意义,临床意义- 基本与CT相同，但灵敏度较高，可检出 4.5，若Fg和BPC仍正常，提示 抗凝过度- INR 4.5，伴Fg和（或）BPC减低， 可能为DIC或肝病所致,（2）血浆蝰蛇毒时间（RVVT） 蝰蛇毒是FX的强激活剂，在不需要FVII的参与下，可与FX、V、PF3结合成外源性凝血活酶而促使血浆凝固。 参考值 1314s，超过正常对照3秒为延长。临床意义 延长：见于FII、V、X、I缺乏；血小板减少症或血小板功能缺陷；存在异常抗凝物质或较高FDP等。 可用于鉴别由于FX或FVII缺乏造成的血浆PT延长。,3共同途径凝血因子筛选试验 （1）血浆纤维蛋白原测定（Fg） 凝血酶法（Clauss法） 免疫法比浊法化学法（双缩脲法）,凝血酶法（Clauss法） - 受检血浆中加入凝血酶，使血浆凝固，其时间长短与Fg含量呈负相关。Fg含量可从国际标准品Fg参比血浆测定的标准曲线中获得 - 为WHO推荐测定Fg的参考方法,参考值 成人 24g/L 新生儿 1.253g/L,临床意义1.增高 - 生理情况下见于应激反应、妊娠后期； - 病理情况见于组织坏死和炎症、使用雌 激素、糖尿病、恶性肿瘤等。 - 超过参考值上限是冠心病和脑血管发病 独立的危险因素之一。,2.减低 - 肝功能受损如重症肝炎和肝硬化、DIC； - 药物（雄激素、高浓度肝素等）； - 遗传性异常Fg血症或无症。3.溶栓治疗监测 - UK、t-PA等溶栓治疗 - 蛇毒治疗（抗栓酶、去纤酶）,（2）因子XIII定性试验 参考值 在24h内凝块不溶解 临床意义 凝块在2h内完全溶解，表示FXIII有先天性或获得性严重缺乏，后者见于肝病、DIC、淋巴瘤和转移性肝癌、原发性纤溶等。,（二）凝血因子检验,1简易凝血活酶生成试验（STGT）及其纠正试验 原理 用受检者稀释全血作为本试验所需全部凝血因子的来源，自身红细胞溶解产物（红细胞素即磷脂）代替PF3，再钙化后既有凝血活酶开始生成，按一定时间加入正常基质血浆（提供凝血酶原和Fg），测定基质血浆的凝固时间，以了解内源凝血活酶生成有无障碍。,若STGT延长，则作纠正试验纠正物： - BaSO4吸附血浆：无FII、VII、IX、X - 正常血清：无FV、VIII - 正常血浆,参考值 最短凝固时间15,15,15,15,15,15,15,15,15,15,15,15,15,15,15,15,临床评价 - 用于筛选血友病，但敏感性较差。目前以凝血因子活性测定代替此试验,2.血浆FVIII、IX、XI、XII 促凝活性(:C)检测,原理 一期法：APTT法 受检血浆中分别加入乏FVIII、IX、XI、XII的基质血浆、白陶土-脑磷脂悬液和钙溶液，分别记录出现纤维蛋白丝所需的时间。从各自的标准曲线中，分别计算出受检血浆中各因子:C相当于正常人的百分率（%）。,参考值 FVIII:C 103%25.7% FIX:C 98.1%30.4% FXI:C 100%18.4% FXII:C 92.4%20.7%,临床意义 1.增高 - 血栓前状态和血栓性疾病 2.减低 - FVIII:C见于HA、vWD（I和III型）； - 存在抗FVIII抗体、DIC; - FIX:C见于HB、肝病、VitK缺乏症、 DIC、口服抗凝药；,- FXI:C见于FXI缺乏症、肝病、 DIC等； - FXII:C见于FXII缺乏症、肝病、 DIC等。,3.血浆FII、V、VII、X促凝活性(:C)检测,原理 一期法：PT法 受检血浆分别与乏FII、V、VII、X基质血浆混合，再加兔脑粉浸出液和钙溶液，分别作血浆PT测定。将受检者血浆测定结果与正常人新鲜混合血浆比较，分别计算出各自的因子:C。,参考值 FII:C 97.7%16.7% FV:C 102.4%30.9% FVII:C 103%17.3% FX:C 103%19.0%,临床评价 1.增高：血栓前状态和血栓性疾病 2.减低：肝病、DIC、口服抗凝剂，存在因子抑制物 3.目前II:C、V:C、VII:C、X:C测定主要用于肝脏受损的检查，VII:C下降在肝病早期即可发生；V:C在肝损伤和肝移植中应用较多。,因子VII缺陷症（遗传性、获得性） 因子VIII、IX、XI缺陷症 （遗传性、获得性） 外源途径缺陷 有出血症状 APTT (N) PT (A)因子XIII缺陷症 因子XIII定性 APTT (N) PT (N)（遗传性、获得性） 试验阳性 APTT (A) PT (N) 内源途径缺陷 APTT (A) PT (A) 无出血症状 共同途径缺陷 因子X、V、II、I缺陷症 因子XII、PK、HMWK （遗传性、获得性） 缺陷症 （遗传性、获得性）N：正常；A：异常；PK：激肽释放酶原；HMWK：高分子量激肽原,三、凝血异常疾病,（一）分类 1.血友病和血管性血友病 2.先天性联锁（组合）因子缺陷 FII、V、X组合最常见; FVII、XI、IX其次 3.先天性单一因子缺陷 除TF、Ca2+外其他均可缺陷，最常见为FVII 缺 陷 4.依赖VitK凝血因子缺乏症 缺乏维生素K致FII、VII、IX、X合成减少 5.肝脏疾病的凝血障碍 多种因子合成减少或消耗增多,（二）血友病 （hemophilia）,1、概述1）定义是遗传性因子、基因缺陷、突变、缺失、插入等导致内源凝血途径激活凝血酶原酶的功能发生障碍所引起的出血性疾病。 2）分类血友病甲（A）、乙（B）,3）流行病学WHO和世界血友病联盟（WFH）: 1520/10万人口 我国: 2.73/10万人口 血友病甲：乙为138：20,4）遗传方式 血友病甲、乙为性染色体（X染色体）隐性遗传 女性传递，男性发病,血友病的遗传规律：,第一代 XY XX第二代 XY X X XY XY第三代 X Y XY XX X XY 第四代 X X XY XY 男性血友病女性血友病血友病传递者正常男性正常女性,2、临床表现,血液不凝的后果,可因出血不止而死亡内出血 关节出血- 导致关节炎或关节畸形 肌肉出血- 导致肿胀和疼痛- 影响血管和神经的功能 颅内出血- 血友病的常见死因,Internal Bleeding into Joints (Hemophiliac shown at bottom),主要为出血倾向，特点是延迟、持续而缓慢的渗血，急性大出血少见 迟发的深部软组织出血关节积血 肌肉血肿 中枢神经系统出血 腹膜后出血和累及呼吸道的咽后出血 血尿 术后出血,血友病临床分型和出血症状,临床分型 出血症状亚临床型 大手术或重度外伤可有出血轻型 手术或轻度外伤可致严重大出血，关节 肌肉出血很少，无关节畸形中型 小手术后可严重出血，偶有自发出血， 关节畸形，但较轻重型 肌肉或关节自发性出血，血肿，关节畸形,3、实验室检查,（1）筛选试验 1）SCT和ACT(活化凝血时间)：均延长 2）APTT：延长 3）RT和试管法CT：可用于血友病的筛选，在重型、中型可延长,（2）纠正试验 1）STGT(简易凝血活酶生成试验)（3）确诊试验 1）FVIII:C和FVIII:Ag 2）FIX:C和FIX:Ag 3）FXI:C和FXI:Ag（4）鉴别试验 1） BT、vWF:Ag检测 2）PT,（5）携带者和产前诊断 1）血友病A 直接诊断：变性梯度凝胶电泳（DGGE）、单链构象多态性分析（SSCP）、检测FVIII基因内含子22倒位 间接诊断：限制性内切酶片段长度多态 性分析（RFLP）进行检测等,2）血友病B 直接诊断：FIX基因直接测序 间接诊断：RFLP,产前诊断,绒毛膜绒毛活检 组织样本取自胎盘附着子宫处 组织样本应具有和胎儿一样的遗传学结构 DNA 分析判断胎儿性别及血友病的存在度,胎儿镜从脐带中提取胎儿血液样本,产前诊断适用于 父亲是血友病患者，母亲是携带者时产前诊断的两种方法,4. 诊断和鉴别诊断,（1）诊断,无论是否存在临床出血、是否有明显家族史，一旦确定FVIII:C或IX:C低于正常人活性的50%，而vWF无明显减少，即可诊断血友病。,发病多在初学走路的幼儿和学龄儿童。 轻微外伤或小手术后，出血不止，迁延数日、数月，甚至威胁生命。 出血：皮肤大片瘀血或肌肉深部血肿，鼻、牙龈等粘膜出血等。 关节病变：急性期以肿痛为主。,（2）鉴别诊断血管性血友病（vWD）获得性凝血因子病,5、治疗原则,尽量避免手术或外伤 局部压迫或冷敷止血 有新鲜血肿或关节积血时，应卧床休息，减少活动 急性期可口服强的松每日4060mg，分三次服用 口服避孕药能缓解女性患者月经多 尚无根治方法，出血严重或持续不止时，只有用凝血因子制剂进行替代治疗，一般要求达止血水平，即60%120%,（三）血管性血友病（von Willebrand disease，vWD）,1、概述（1）定义：由于FVIII复合物中的血管性血友病因子（von Willebrand factor, vWF）基因合成与表达缺陷导致vWF的质和量异常所引起的出血性疾病。,Biochemical Features ofvon Willebrand Disease,国际血栓与止血学会因子VIII和vWF专题委员会（1984-1986年）工作报告提出了国际统一的命名法,因子VIII和vWF的命名和简称,命名 简 称 统一名称 曾用名称因子VIII 蛋白 VIII VIII : C 抗原 VIII : Ag VIII : Ag 功能 VIII : C -vWF 蛋白 vWF VIII R : vWF , FVIII/vWF 抗原 vWF : Ag vWF R : Ag 功能 vWF : Rco VIII R : RCOF,vWF在血小板粘附、聚集中的作用,血小板粘附 血小板 血小板聚集 GPIb GPIIb/IIIa FVIII,vWF,内皮细胞,内皮下胶原,vWF 与血小板聚集,（2）发病情况血友病甲：vWD：乙为138：100：20（3）临床表现主要为皮肤粘膜出血 外伤后出血不止 女性月经过多、分娩后大量出血 I型-最常见II型-IIA、IIB、IIN、IIMIII型-最严重,重型与血友病无区别；中型出血以皮下、肌肉出血为主（非自发、与外力有关）；轻型仅为粘膜出血；亚临床型为应激（外科手术或产后）出血,血友病A与vWD的出血症状比较,2、实验室检查,（1）筛选试验 1）BT 为诊断vWD的重要指标之一 筛选I、III型较好，均延长；II型亚临床型则需再加作阿司匹林耐量试验,Bleeding Time Test,Timer is started upon incision,BT = Time to complete cessation of free blood flow,2）APTT和FVIII:C检测 70%患者可出现APTT延长和FVIII:C降低 3）vWF:Ag检测 80%降低，III型肯定降低，I型下降程度较低，II型几乎无降低 4）血小板粘附（PAdT）试验粘附率减低,（2）确诊试验 1）vWF瑞斯托霉素辅因子检测（vWF:Rcof） 利用vWF与GPIb-IX相互作用后，加入瑞斯托霉素使正常人血小板发生聚集，来检测vWF的功能 多数患者vWF:Rcof降低，异常率可达50%以上,2）瑞斯托霉素诱导的血小板聚集试验 （RIPA）vWD患者缺乏vWF:Rcof活性，瑞斯托霉素加入患者PRP中，血小板可无聚集反应 3）电泳 分析vWF多聚体,（3）排除试验 1）血小板计数及形态观察 2