分析方法的验证.ppt

1,分析方法的验证,2,内容：,一、介绍二、分析方法验证三、常见问题,3,一、介绍,方法分析：是为完成检验项目而设定和建立的测试方法，它详细描述每一个分析试验所必须的步骤。一般包括分析方法原理、仪器及仪器参数、试剂、供试品溶液与对照品溶液等的制备、测定、计算公式及限度要求等。,一、介绍分析方法确认或验证相关指南,5,二、分析方法验证,1、方法验证的定义：是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容和验证标准要求，并通过设计合理的实验来验证所采用的分析方法能否符合检测项目的要求。2、分析方法验证的目的：是判断采用的分析方法是科学、合理，是否能控制产品的内在质量，证明分析方法适合相应检测要求。,二、分析方法验证,3、分析方法验证范围1.采用新的检验方法；2.检验方法需变更的；3.采用中华人民共和国药典及其他法定标准未收载的检验方法；4.法规规定的其他需要验证的检验方法,二、分析方法验证,4、需验证的检验项目1）鉴别试验2）杂质的限度检查3）杂质的定量测定4）含量测定，包括原料药或制剂中有效成分的含量，制剂中其他成分（如防腐剂等）的含量，溶出度与释放度等检查中的溶出量，以及含量均匀度。化学药品/中药制剂中其他需控制成分(如残留物、添加剂等）的测定,1）专属性2）线性3）范围4）准确性5）精密度6）检测限7）定量限8）耐用性9）系统适用性,5、分析方法验证的具体内容,根据检测的类型采用的技术检测方法确定具体方法拟订验证的内容,二、分析方法验证,1）专属性,定义：是指在其他成份（如：杂质、降解产物、辅料等）可能存在的情况下，采用的方法能正确测定出被测物的特性；能反映该分析方法在有共存物时对供试物准确而不受干扰的测定能力。通常，鉴别试验、杂质检查、含量测定均应考察其专属性。一种分析方法不太可能对某一特定的被分析物具有专属性(完全辨别)，在此情况下，建议采用两种或两种以上的分析方法以达到所需的辨别水平。,9,1）专属性,含量测定目的是得到样品中被分析物的含量或效价的准确结果。对于色谱法和其他分离方法来说，应当用具有代表性的色谱图来证明专属性，并在图上适当地标出每一种成分。色谱法的分离度应符合要求。,1）专属性,已知杂质：对于主成分含量测定可在供试品中加入杂质或辅料，考察测定结果是否受干扰，并与未加杂质和辅料的试样比较测定结果。未知杂质：可以通过测定含有杂质或降解产物的试样，与另一已验证的方法或药典方法比较结果。或进行破坏性试验证明，在相对激烈的条件下：光热、酸碱、氧化、还原等，比较破坏前后的结果的差异。,11,2）线性,线性系指在设计的范围内，测试结果与供试品中被测物浓度直接呈正比关系的程度。线性是定量测定的基础，涉及定量测定的项目，如杂质定量测定和含量定量测定均需验证线性。,2）线性,试验方法应在规定的测定范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列样品的方法进行测定，至少制备5个浓度的供试样品，每个浓度各一份，每份供试样品检测3次，以测得的响应信号最为被测被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，用最小二乘法进行线性回归。,13,2）线性,一般配制方法：在含量测定浓度的80%-120%均匀选择至少五个不同的浓度点配制溶液各三份。,14,2）线性,数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性图。推荐接受标准：相关系数R0.998其截距不应明显地偏离零点。,15,3）范围,范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。范围通常与分析方法的测试结果相同的单位表达。涉及到定量测定的检测项目均需对范围进行验证。,3）范围,含量测定时，范围通常为测试浓度的80%-120%。,4）准确度,定义：系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。一般用回收率(%)表示。一定的准确度为定量测定的必要条件，因此涉及到定量测定的检测项目均需对准确度进行验证。,4）准确度,测定回收率R一般采用空白回收法和加样回收法。空白回收：已知量为P的对照品。测定值为A。如在六个空白样品中，分别加入已知浓度的样品（浓度范围为含量测定浓度的80%-120%）,19,4）准确度,加样回收:在已准确测定含量为P的样品中+已知量为A的对照品或标准品测定，测定值为M。,4）准确度,方法准确度应在规定范围内建立，至少用9个测定结果进行评价。例如：测定含量的准确度，按标示量的80%，100%和120%配制三个浓度的溶液，每个浓度各配制3份供试品溶液，进行测定。,21,4）准确度,数据要求：需报告已知加入量的回收率（%），或测定结果平均值与真实值之差及其相对标准偏差。一般推荐含量（HPLC、GC、UV）的回收率（平均值）要求在98.0%-102.0%范围内。杂质的定量测定的回收率（平均值）：限度0.5%，在80%-120%范围内；0.5%限度5%，在90%-110%范围内；限度5%，在95%-105%范围内。,22,5）精密度,精密度系指在规定的测试条件下，同一均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。,5）精密度,系统重复性：相同条件下，同一分析人员对同一样品溶液多次测试结果的接近程度。同一均匀标准样品溶液，连续重复测定六次，计算各组分响应值与平均值之间的相对标准偏差。方法重复性：相同条件下，同一分析人员对同一个均匀样品，多次取样测定所得结果的接近程度。同一样品，至少称取六份，再测定每一份样品含量，计算每一次测定的含量与平均含量间的相对标准偏差。,25,5）精密度,6）检测限（LOD或DL),检测限系指供试品中被测物能被检测出的最低量。常用方法如下：1.直观法用已知浓度被测物的样品，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。用于非仪器分析法(目视法)，也可用于仪器分析法。,6）检测限（LOD或DL),2.信噪比法：仅适用于能显示基线噪音的分析方法。-即把已知低浓度试样的测试信号与空白样品的测试信号进行比较，计算出能被可靠地检测出的最小浓度。-通常信噪比为3：1或2：1时，检测限可以被接受。,27,6）检测限（LOD或DL),数据要求应当提供检测限和测定检测限的方法如果方法采用信噪比法，应提供测试图谱，说明测试过程和检测限结果。,7）定量限（LimitofQuantitative,LOQ或QL）,定义：定量限系指供试品中被测成分能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密度。杂质和降解产物用定量测定方法研究时，应确定定量限。推荐测定法：-以信噪比10:1时的浓度(或量)进样测定,重复测定的响应值应满足精密度要求。,8）耐用性,定义：耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。可用于说明正常使用时的可靠性。1.典型的变动因素有：被测溶液的稳定性,样品提取次数，时间等。,8）耐用性-考察因素,2.HPLC法中典型的变动因素：流动相pH值变化的影响；流动相组分变化的影响；不同色谱柱(不同的批号和或供应商)；柱温；流速。,8）耐用性-考察因素,3.GC法中典型的影响因素：不同色谱柱(不同的批号和或供应商)；柱温流速固定相不同类型的载体,8）耐用性-考察因素,4溶液的稳定性研究溶液的稳定性研究用来证明根据相应方法制备的样品溶液和标准品溶液在规定的储存条件下在一定时间内保持稳定。如果方法中没有规定有效期，样品溶液和标准品溶液需进行稳定性研究。测定结果与初始结果进行比较，符合接受标准便可确认样品溶液和标准品溶液在规定的储存条件下在规定储存时间是稳定的。,33,二、分析方法验证6、验证接受标准（含量-HPLC,GC,UV）,需验证项目,注意：“否”表示通常不需要做的项目：“是”表示通常需要做的项目。假如已做了重现性，就不需再做中间精密度；分析方法缺乏专属性，可以由其他分析方法来补充；