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.,胚胎干细胞及其培养建系,*,.,干细胞(stemcells,SC),2,3,是一类具有多向分化潜能和自我复制能力的原始的未分化细胞，是形成哺乳类动物的各组织器官的原始细胞。,.,按分化潜能：全能干细胞多能干细胞单能干细胞,干细胞的分类,按发育状态：胚胎干细胞成体干细胞。,.,胚胎干细胞,当受精卵分裂发育成囊胚时，内层细胞团（InnerCellMass）的细胞即为胚胎干细胞。胚胎干细胞具有全能性，可以自我更新并具有分化为体内所有组织的能力。,.,.,.,.,胚胎干细胞应用前景,1.是生产转基因动物的高效载体,.,胚胎干细胞应用前景,2.用于疾病治疗,.,胚胎干细胞应用前景,胚胎干细胞用来克隆治疗技术路线,.,胚胎干细胞培养建系方法,.,1.胚胎采集分离具有发育全能性的ES细胞,要求选择合适阶段的胚胎。采卵时一般取囊胚。,.,2.ICM的获取从着床前的胚泡中分离内细胞团,是从早期胚胎建立ES细胞系的先决条件直接分离法免疫外科法延迟着床法,机械切割,.,.,3.内胚团的离散分离ICM时可用吸管将其从滋养层细胞上转移到胰蛋白酶微滴中,大约35分钟ICM细胞彼此解离。,.,4.胚胎干细胞的鉴定常用的检测指标有碱性磷酸酶、OCT24、细胞特异性表面抗原(SSEA2l)等。测定胚胎干细胞的体内分化能力是通过制备嵌合体来完成的。,.,5.培养有饲养层培养体系胚胎干细胞是动物个体发生过程中具有全能性的原始细胞,维持ES细胞的不分化状态由细胞内一些结构蛋白和多肽因子进行内源性调控。体外培养的ES细胞,接种在饲养层细胞上培养时可以长时间保持ES细胞的原初特性。用作饲养层的细胞多数是具有贴附能力的细胞(如成纤维细胞、子宫内皮细胞等)无饲养层培养体系饲养层细胞分泌的因子难以支持某些ES细胞的增殖。ES细胞也可在无饲养层细胞的环境中建立和维持,培养液中添加LIF因子或使用能分泌LIF的细胞制备条件培养液均可,.,胚胎干细胞系不仅是研究细胞分化的
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