血凝与血凝抑制实验

凝血(HA )和凝血抑制(HI )试验，一，实验目的二，实验内容三，实验原理四，实验材料五，实验方法和结果判定六，注意事项七，新城疫病背景介绍，一，实验目的，一，掌握凝血和凝血抑制试验的基本原理，操作方法和结果判定方法，了解新城疫病的背景知识，二，实验内容血液凝固试验(HA )检测新城疫抗原2，血液凝固抑制试验(HI )检测新城疫抗体3，实验原理，1，血液凝固试验(HA )原理：有选择地使某些病毒和病毒的血液凝固的动物的红血球凝聚的现象称为血液凝固(HA )，也称为直接血液凝固反应。，病毒粒子，红血球，2，血液凝固抑制试验(HI )的原理：在病毒悬浊液中添加特异性抗体，该抗体的量足以抑制病毒粒子及其血液凝固时，红血球表面的受体不能直接接触病毒粒子和血液凝固。 此时红血球的凝聚现象被抑制，也被称为红血球凝聚抑制(HI )反应，也被称为血液凝固抑制反应。，Iamlate！ 抗体、抗原、4、实验材料、1、凝血板(2人/块) 2、新城疫阳性血清3、被检血清(1份) 4、1%红血球悬浊液5、稀释液6、移液管(50ul，2人/把) 7、枪口、5、实验方法和结果判定、凝血试验(HA)1、凝血板的第1列之一在第一孔中加入50ul病毒抗原，然后按照倍数比稀释为第11孔，最后扔掉50ul3，在第一孔中加入1%鸡红细胞悬浮液50ul4，轻轻摇动使其均匀，在室温或37下静置30分钟5分钟，结果判定为：血液凝固力的测定，结果判定基准，1，1 :红血球像细砂一样均匀地铺在洞底，即100%凝聚. 2，2222222222222222222222222 3，22222222222222222 4，红血球在洞底形成圆块，边缘不平滑即凝集了25%的5，- :红细胞在孔底形成圆块，边缘光滑，没有凝集，血凝价的判定是，用22222222222222222250ul 13360256稀释的病毒抗原，是该抗原的血液凝固单位。 血液凝固抑制试验，1、将病毒抗原稀释为4个血液凝固单位(1/1284=1:32)2，在血液凝固板的1-12孔中分别加入50ul生理盐水3 .在第1孔中加入被检血清50ul，将倍率稀释为第11孔，最后废弃50ul 4 5、每孔加入1%鸡红血球悬浊液50ul，轻微振动均匀，然后在室温或37下静置30分钟6，结果判定：结果判定基准，1， :红血球像细砂一样均匀地铺在孔的底部，即100%凝聚的2，22222222222222222222223，2222222222222222222224，红血球在孔的底部形成圆块，边缘不平滑血液凝固抑制价的判定，将出现完全抑制凝聚(即不凝聚)血清的最高稀释倍率作为该血清的血液凝固抑制价(1:4 )。 六、注意事项，一、使用红细胞前摇动二、用枪取样，尽量不要有气泡。 结果判断有耐心，HA和HI不可混合，七、新城疫病背景下介绍，鸡新城疫病(NewcastleDiseaseND )，一、概况、ND是ND病毒(NewcastlediseaseVirus，NDV )引起的高度接触性和毁灭性的1926年首次发生在印尼，同年在英国新城发现的1928年该病的记录被列为目前世界上最严重的家禽传染病之一的国际兽疫局(OIE )列为a级传染病，别名：新城疫、亚洲鸡温、假鸡疫：禽流感、欧洲鸡病毒粒子表面有凝血蛋白质，可以刺激机体产生凝血抑制抗体，2、病原体，根据临床表现和病程的长短： (1)最急性型：突然发病，病变不明显，见于小鸡和本病流行初期。 急性型：(典型新城疫)亚急性型(非典型ND )慢性型(非典型ND )，3，病情和病理变化，(2)，急性型：以侵犯消化系统为主，也称内脏快发型。 病情特征： a .食欲减退，饮水增加，离群停止，眼睛半开，羽毛下垂，冠和髌骨呈紫黑色。 b .喷囊液积存，体温上升，呼吸困难。 鼻腔内有大量分泌物，重度粪便呈黄绿色或褐色，有时混有血。 c .死亡率高，非免疫鸡感染后死亡80-100%。 d .一部分鸡出现神经症状，脖子弯曲向上，母鸡下蛋。 病变特征：全身粘膜和浆膜出血，突出病变在消化道。 a .腺胃粘膜浮肿、粘膜上的乳头及其周围有出血点、之间有溃疡。 b .腺胃和肌胃、腺胃和食道的边界粘膜可见出血点和出血带。 c .小肠、直肠、排泄腔粘膜充血、出血或坏死，d .盲肠扁桃体出血。 皮下脂肪出血、脑膜充血出血蛋黄性腹膜炎，有些病鸡代表眼结膜炎，(3)，亚急性型(以非典型ND、呼吸道侵害为主)也称为肺脑炎型：其主要特征是症状和病变不典型。 症状：以4-35日龄的鸡居多，25日龄左右最常见。 呼吸困难，精神沉郁，并早期出现神经症状，当时扭伤脖子，弓反张，倒下不能起立。 病变：喉及气管粘膜浮肿、出血、充血，有大量黏液，肺呈紫色黑色(肺出血性炎症)。 硬膜下树枝状充血，有出血点。 心冠、脂肪有出血点。 发病率高，死亡率低。(4)、慢性型(非典型ND )母鸡：年轻人显示产卵率降低(约10-30% )，能产下软壳蛋。 重症者出现精神沉郁、呼吸困难、黄绿色稀粪、喉、气管粘膜充血、出血，个别病例出现消化道病变。 5、诊断、1、凝血抑制试验(HI ) :监测鸡群中的HI抗体，评价疫苗免疫效果和鸡体内抗体水平。 2 .分离病毒：区分弱毒和野毒。 (1)分离病毒：强毒：鸡胚死亡24-72小时，弱毒一般不死。 6、免疫、灭活疫苗(刺激体液免疫、细胞免疫和局部粘膜免疫) I系苗、II系苗、III