谷胱甘肽标签蛋白纯化_第1页
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文档简介

GST标签蛋白纯化流程（1）装柱、平衡 吸取适量GST beads加入层析柱中。加入15-20CV的ddw，清洗亲和柱。注入15-20CV的lysis buffer,平衡亲和柱。（2）挂柱 向平衡后的亲和柱中加入离心后的上清，使其缓慢流过GST beads,使标签蛋白充分与GST beads结合。收集流过的液体并取样。（3）洗涤 用足量的lysis buffer洗涤GST beads。收集流过的液体并取样。（4）洗脱 Elution buffer洗至目的蛋白被洗出。收集流过的液体并取样。（5） SDS-PAGE检测各步骤取样。注：1）充分破菌后需要高速（16000-18000rpm）离心45-60min，上清最好使用0.45um针头式过滤器过滤后再加入平衡后的亲和柱。2）lysis buffer一般使用20Mm Tris-Cl，500Mm NaCl，5% glycerol,pH由具体蛋白确定。或直接使用已选定的lysis buffer。3）洗涤时，加入10-15CV lysis buffer，可以用bradford检测穿出液是否还有杂蛋白洗出以确定洗涤的体积。如果没有杂蛋白再洗出可以停止洗涤。4）洗脱时，Elution buffer一般使用lysis buffer配制。一般如果配制50ml，需要称取0.3g GSH溶解到40ml左右的lysis buffer中，调节pH至lysis buffer的数值后定容至50m
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