生化技术-Biochemical-TechniquePPT课件

生物化学，生物化学，生物化学，生物化学，生物化学，生物化学，生物化学，生物化学，生物化学，生物化学，生物化学，生物化学，生物化学。生化技术是研究生研究对象的化学组成、结构和功能，以及生命活动中化学物质的代谢、调控的实验方法。生物大分子的一般制备分子生物学的基本操作，生物大分子的分离，纯化和检测，电泳，色谱，离心，检测，光谱分析，分离，5，2。生物大分子的一般制备体液：生物样品组织细胞的直接分离：第一步细胞破碎分离和检测，第六步，生物大分子制备的四个阶段，选定材料和预处理组织细胞的破碎和细胞器的分离，生物大分子的分离、纯化、浓缩、干燥和保存。(1)材料选择和预处理：微生物、植物和动物。组织细胞破碎的方法：1。物理方法：玻璃均质机，(9)，研钵(加入干净的沙子或玻璃粉)，(10)，高速组织捣碎器。11，超声波，12、渗透压法重复冻融法，13，2。化学方法有机溶剂(脂双层破坏细胞膜)3。酶自溶法(蛋白酶、酯酶)酶法(溶菌酶破坏细胞壁的-1，4-糖苷键)。14，(3)生物大分子的分离和纯化以蛋白质为例萃取相似相溶解1。水溶液萃取中性盐溶液萃取：缓冲溶液萃取：2。有机溶剂萃取。分离和纯化 1。根据蛋白质溶解度不同的分离方法：(1)盐溶解盐析在离子强度低的盐溶液中，蛋白质、酶及其与其他物质的络合物，溶解度随盐溶液浓度的增加而增加，称为“盐溶解”。当溶液中的盐浓度持续上升到一定程度时，蛋白质等的溶解度逐渐降低，并逐渐从溶液中沉淀出来，这称为“盐析”。盐析是由盐离子与水分子的水合作用引起的，这导致盐离子和蛋白质分子争夺水分子并削弱蛋白质的水合程度。蛋白质表面的电荷被盐溶液中相应的离子中和，其水合膜层被破坏，这降低了蛋白质等的溶解度，蛋白质分子彼此聚集并沉淀出来。中性盐硫酸铵的选择(NH4)2SO4硫酸钠，Na2SO4。19，实施例：1毫升分离的球蛋白和白蛋白血清完全混合。边搅拌边逐渐加入饱和(NH4)2SO4溶液至50%。离心上清液以沉淀(球蛋白)，20，(2)等电点沉淀(最小溶解度)PIWMALB 4.8666000015.0213000025.022000005.1213000006.8 7.31500000，21，(3)低温有机溶剂沉淀甲醇、乙醇、丙酮降低溶解度并沉淀大部分蛋白质。脱水和小介电常数分辨率高于盐析，但蛋白质更易变，应在低温下进行。(4)聚乙二醇沉淀，22，2。根据不同蛋白质分子大小的分离方法。23，(1)透析滤过透析：通过利用溶液组分是否能通过半透膜以及通过使膜两侧溶液的化学势不同来实现溶液中小分子物质的去除。超滤(反渗透)利用压力或离心力迫使水和其他小溶质分子通过半透膜，而蛋白质不能通过半透膜并留在膜上。(2)凝胶色谱(GelColography)一种色谱方法，使用不同分子大小的各种物质和不同程度的固定相阻滞来实现分离。(3)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。25，3。根据蛋白质带电性质的不同，分离方法有：醋酸纤维素薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。电聚焦电泳，离子交换色谱，26，醋酸纤维素膜电泳分离血清蛋白分子量，32，分离的血浆脂蛋白脂质蛋白的直径CM98% 20VLDL 90ULDL 700HDL 50P，33、 、CMLDLVLDLHDL，然后添加样品槽、34、35，聚丙烯酰胺凝胶电泳，(1)丙烯酰胺结构式，36，(2)亚甲基双丙烯酰胺，37岁。38，等电聚焦电泳，载体两性电解质。39岁。40，离子交换色谱，41，42，4。根据配体特异性的分离方法：亲和层析。43，5。核糖核酸260纳米蛋白280纳米的检测-光谱分析。45，(4)浓缩，干燥，保存样品浓度1，真空加热蒸发浓缩2，气流蒸发浓缩3，冷冻法4，吸收法5，超滤，46，干燥真空干燥适用于不耐高温且易氧化的物质的干燥和保存。冷冻干燥在相同的压力下，水蒸气的压力随着温度的下降而降低，所以冰在低温低压下很容易升华成气体。47、保存1、贮存干燥产品2、液体贮存样品不应过稀。低温贮藏应添加防腐剂和稳定剂，48，3，分子生物学技术，重组DNA技术的基本步骤1。获得目标基因2。将目标基因与载体3连接。将重组DNA分子引入受体细胞4。筛选含有重组DNA基因分子5的受体细胞克隆。克隆基因的表达及表达产物的检测和分离。脱氧核糖核酸提取：组织，细胞，质粒核糖核酸提取：组织，细胞聚合酶链反应技术：常规聚合酶链反应，逆转录聚合酶链反应限制性内切酶Westernblot。49，49，4。生化技术特点：1。温和条件2。实验条件尽可能符合内部环境。50，5。生化技术应用：1 .工业，农业研究，生产2。生化研究3。临床应用，诊断。51，6。发展趋势：超微型、高效、自动化、快速、集成色度学计算机，52，摘要：1。掌握生物大分子的制备、分离和纯化方法