溶血标本血钾的测定

溶血度指数法校正溶血标本中血清钾离子的测定丁志祥、金、张琪常州中医医院临床实验室目的通过全自动生化分析仪中血清信息功能溶血度h与血钾的相关性，探索一种简便的血钾浓度检测校准公式，供临床参考。方法分析溶血度H与血钾的相关性，建立回归方程，研究不同人群H=50时血钾浓度是否存在差异，并通过加入溶血标准溶液和制备溶血样品进行验证。结果当h在1200之间(Hb约为95g/L)时，h与K呈正相关(r=0.9996)，回归方程y=0.1068H 0.2789单因素方差分析表明，新生儿、成年男性和成年女性之间没有显著差异。两种方法的验证表明，计算的K值与实际检测值之间没有统计显著性。理论值的平均相对误差为3.0%，最大相对误差为7.0%。结论在全自动生化分析仪上，用血清信息函数的溶血度H和公式K not=K -0.1068H-0.2789可以准确测定溶血样品中的真血钾浓度。该配方不受患者年龄和性别的影响。溶血；溶血度h；血钾由于人类红细胞的高脆性，由于各种原因，样品会发生不同程度的溶血，这直接影响测定结果的准确性1-5。溶血对许多试验结果都有影响，特别是在血钾试验中，因为人体体液中98%的钾分布在细胞内液中，只有2%分布在细胞外液中，组织细胞中钾的平均浓度为150毫摩尔/升，红细胞中钾的浓度为105毫摩尔/升，血清中钾的浓度仅为3.5 5.5毫摩尔/升，红细胞中钾的浓度约为血清中钾浓度的20倍。溶血后，红细胞中的钾会释放到血清中，导致血钾浓度增加。因此，标本溶血是血钾误差的主要原因之一6-8。溶血标本是一种不合格标本。必须找到因收集、运输和储存不当而引起溶血的原因，以避免或减少溶血的发生。然而，对于易发生溶血的标本(如小儿标本)和红细胞结构异常的标本，血钾检测结果难以保证。解决这一问题的关键在于实验室和临床之间的密切沟通。然而，有时在临床上不便于立即复检，其他因素也不适合复检血样。如果能根据样本异常情况的程度，探索出一种校正检测结果的方法，对临床提供更准确的报告将具有重要的意义。溶血后血钾的增加主要是由于红细胞破坏引起的红细胞内血钾的释放。血清中血红蛋白的含量可以直接反映标本的溶血程度。如果可以检测血清中血红蛋白的含量来计算由于溶血引起的血钾增加的部分，则可以通过从检测到的血钾中减去由于溶血引起的血钾增加来消除溶血对血钾的影响。目前，具有血清信息功能的生化分析仪(如日立、罗氏、岛津等系列生化分析仪)可以通过血清信息中溶血度(H)的指数法直接测定血红蛋白，试剂单一稳定，自动化简单9。鉴于上述想法，我们对溶血样品中血钾的测定进行了研究，以期找到一种更方便的检测方法。材料和方法1.1标本采集自2010年6月至2010年12月在江苏省常州市中医院住院的40例新生儿(1-20天)、40例成年男性(20-68岁)和40例成年女性(21-73岁)。1.2试剂和主要仪器：自制三盐酸缓冲液(pH7.4)；6.0mol/LKcl标准溶液；胆红素标准溶液(上海生物制品研究所提供)；日立7600自动生化分析仪；-70冰箱(三洋)1.3溶血的测定1.4溶血度H与血钾抗凝剂的相关性，离心去除血浆，用生理盐水洗涤红细胞3次，根据红细胞比容加入等体积的生理盐水，在-70冷冻1小时，立即放入37的水槽中5分钟，冷冻溶解2次，以3000转/分钟离心5分钟，分离Hb溶液，用生理盐水调至H=200标准溶液，用生理盐水稀释至H=150， 使用总共20个浓度为100、75、50、45、40、35、30、25、20、15、10、8、6、5、4、3、2、1的血红蛋白溶液来检测血钾浓度(当h 20时，用6.0摩尔/升KCL标准溶液代替生理盐水进行稀释，并计算血钾浓度)。1.5不同人群红细胞溶血时血钾的测定H=50选择2010年6月至2010年12月在我院住院的40例新生儿、40例成年男性和40例成年女性样本，血红蛋白制备方法同上，H调至50，检测各样本血钾浓度。1.6验证试验1选择上述120个样品(40个新生儿、40个成年男性和40个成年女性)进行血清钾浓度检测，以制备H=200的血红蛋白标准溶液。向上述血清中加入不同比例的血红蛋白标准溶液，检测样品的溶血度和血钾浓度。1.7验证试验2选择上述120个样本(40个新生儿、40个成年男性和40个成年女性)进行血钾浓度检测。同时，将少量红细胞吸收到血清中，冷冻并溶解两次(方法同上)，进行3000轮离心5分钟，吸收上清液，并检测样品的溶血度H和血钾浓度。1.8统计分析采用SPSS 17.0统计软件包对测试结果进行分析。数据呈正态分布，用平均标准偏差表示。多组间比较采用方差分析，组内二对二比较采用SNK-q检验，配对数据采用配对t检验，差异有统计学意义(P0.05)结果1.溶血度h与血钾的相关性以h为横坐标，k浓度(mmol/L)为纵坐标。经统计处理后，h和K浓度呈正相关(r=0.9996)，回归方程K=0.1068H 0.2789。当h在1200范围内(Hb约为95g/L)时，它是线性的，如图1所示。图1溶血度h与血钾的相关性2.不同人群红细胞溶血率为50时血钾的测定。由于氢和钾的浓度呈线性关系，当氢=50时，检测到钾的浓度，40例新生儿的钾浓度为6.020.42；40名成年男性的钾浓度为5。920.39.40只成年雌性的钾浓度为5。840.34。单因素方差检验显示，三组间无显著性差异(F=2.306，P=0.104)。3验证式1将标准Hb溶液(H=200)按1: N的比例加入到不同的已知钾浓度的血清样品中，理论钾浓度可根据公式K理论=n/(n 1)K 0.1068H 0.2789得到，理论钾与实际检测值相匹配进行T检验。统计结果表明，理论K值与实际检测值基本一致(t=1.263，P=0.209)，无统计学差异。理论值的平均相对误差为3.0%，最大相对误差为7.0%。表1显示了在一个样品(K=4.52毫摩尔/升)中加入不同比例H=200的标准Hb溶液后，理论钾和实际钾之间的比较。其他样品的结果相似。表2显示了用1/9体积的H=200标准Hb溶液加入20个不同样品后理论钾和实际钾之间的比较。其他样品也获得了类似的结果。表1不同稀释度的标准血红蛋白液的理论钾浓度和实际钾浓度的比较nH理论k实际k相对误差%1234567891011121314151617181920986549383228262420191715141312121111101013.0110.238.907.957.467.147.016.866.486.426.246.055.975.895.805.815.725.745.645.6513.3210.259.218.057.167.217.156.96.586.346.155.985.875.555.655.815.645.595.425.352.360.153.341.20-4.230.921.950.581.48-1.22-1.43-1.22-1.72-6.05-2.62-0.08-1.46-2.61-4.08-5.64注：添加标准Hb溶液wi6.456.315.715.805.046.786.216.437.455.765.435.685.526.256.486.285.295.195.655.816.586.125.895.85-4.27-1.532.331.482.52-1.70-4.075.420.894.69-2.076.72-3.08-1.772.05-4.391.95-3.073.140.94注：在已知钾浓度的20份血清样品中，按照1: 9的比例加入标准的Hb溶液，其中，理论钾浓度为0.9K 0.1068H 0.27894验证公式2溶血样品中的原血清钾浓度应为实际测得的钾浓度减去溶血引起的钾浓度增加部分，即钾不=溶解的钾-0.1068H-0.2789，并在计算的校正血清钾浓度和实际检测值之间进行配对T检验。统计结果表明，溶血样品中校正后的钾浓度与未溶血样品中实际测得的钾浓度基本一致，无统计学意义(t=0.165，P=0.869)。修正值的平均相对误差为2.9%，最大相对误差为6.9%。图2校正血清钾浓度与实际血清钾浓度的比较讨论血清信息是对血清浊度(Lipemi-:L)、溶血程度(溶血-:H)和黄疸-:I)的测量，并提供一个功能性指标。无色透明试剂用于分别与胆红素标准溶液、人可溶性血液标准溶液和浊度标准溶液按一定比例混合，扫描不同波长的吸光度。日立7600全自动生化分析仪利用这一原理，在使用血清信息功能后，在(1/2) 480/505、570/600、660/700(nm)处自动测量碘、氢和碘。在570/600纳米时，胆汁发红不会干扰Hb的吸收，但混浊会。该方法使用一个计算公式来校正浊度干扰并计算H指数，计算公式为：H=1/C(EH-BEL)，其中EH和EL是在570/600和660/700 (nm)测量的吸光度(ABS104)，B是在吸收光谱中获得的补偿系数，C是H指数的输出系数，当C=1时，H指数是浊度校正后血浆Hb的吸光度。血清钾的测定对临床疾病的诊断和治疗非常重要，往往涉及到危重患者的治疗。临床要求快速准确地测定钾离子浓度。由于血清中钾的浓度为3.5 5.5 mmol/L，且范围较窄，许多因素会造成血钾的明显误差，误导临床医生的诊断和治疗。标本溶血是血钾误差的主要原因之一。研究表明，红细胞中钾的浓度在血红蛋白的螺旋、折叠构象和功能中起着关键作用10。红细胞中钾和血红蛋白的浓度相对稳定，红细胞中钾的浓度比血浆中钾的浓度高近20倍11。当标本溶血时，血钾增加的误差主要来自红细胞中的钾。因此，溶血程度与钾的误差值有关。首先，我们用H作为溶血度的指标来探讨血红蛋白与钾的相关性。结果表明，氢和钾浓度呈显著相关，并呈线性关系。当H在1200范围内呈线性时(Hb约为95g/L)，遗憾的是仪器(H=1)给出的H的灵敏度稍低。然而，从回归方程K=0.1068H 0.2789可以看出，在约0.1毫摩尔/升(H=1)时，H的灵敏度对K的浓度影响很小，与血清中的钾浓度3.5 5.5毫摩尔/升相比，误差在5%以内，不会造成很大影响。此外，应该注意的是，由于k浓度的测量值在小于2摩尔/升时不准确，当h 20时，我们使用6.0摩尔/升的标准溶液代替生理盐水进行稀释，并计算血钾浓度。氢钾浓度的线性关系是否受年龄和性别的影响，尤其是新生儿是否与成人相同。通过对40例新生儿标本、40例成年男性标本和40例成年女性标本的统计分析，它们之间没有差异。这表明这个线性公式适用于不同的人群。由于贫血的种类繁多，采集的标本数量有限，因此没有关于贫血患者的专门讨论。通过对出血性贫血和缺铁性贫血样品的初步研究，发现H和K的相关性与正常人并无差异，但仍需收集更多的标本和更多类型的贫血进行进一步研究。通过加入溶血标准Hb溶液验证，公式计算的K与实际测量值与制备溶血样品的方法无统计学差异，说明溶血样品中的K可以通过公式计算完全修正。通过对大量生化样本的检测(真空采血管的正常采集)，发现h均为0，因此，公式K中的h不是=K溶液-0.1068H-0.2789无需校正。文森佐布雷西亚等人12最近发表了一份关于检测和校正溶血标本中血钾的方法的报告。然而，报道的