刺参种质资源调查技术规范

ICS65.150B 51DB37山东省地方标准DB 37/T 2020刺参种质资源调查技术规范Specifications for sea cucumber germplasm resource surveyXXXX - XX - XX发布XXXX - XX - XX实施山东省市场监督管理局发布DB37/ 2020前言本标准依据GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由山东省海洋局提出并组织实施。本标准由山东省海洋标准化技术委员会归口。本标准起草单位：威海高晟海洋技术服务有限公司、威海市海洋与渔业监测减灾中心、威海市技术监督信息研究所。本标准主要起草人：刘营、宋吉德、宋喜红、张学超、胡红智、李晓敏、李强、高光、毕延志、林宇春、林乐界、宋颜香、邵海明。3刺参种质资源调查技术规范1 范围本标准规定了刺参种质资源调查技术规范的术语和定义、资源分布调查、生理性状调查、分子遗传学特性调查、环境现状调查、报告编制。本标准适用于沿海范围内刺参种质资源的调查。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 3097海水水质标准GB 5009.3食品安全国家标准食品中水分的测定GB 5009.4食品安全国家标准食品中灰分的测定GB 5009.5食品安全国家标准食品中蛋白质的测定GB 5009.6食品安全国家标准食品中脂肪的测定GB/T 12763.4海洋调查规范第4部分：海水化学要素调查GB/T 12763.6海洋调查规范第6部分：海洋生物调查GB/T 12763.8海洋调查规范第8部分：海洋地质地球物理调查GB 17378（所有部分）海洋监测规范GB 18668海洋沉积物质量GB/T 34748水产种质资源基因组DNA的微卫星分析DB37/T 2292刺参（种质）3 术语和定义GB/T 34748界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1微卫星 microsatellite 真核生物基因组中由两个或多个核苷酸重复排列形成的短串联重复序列。GB/T 347482017，定义3.14 资源分布调查4.1 站位布设站位布设应遵循以下原则：a) 根据刺参的生活习性，调查海域的地形、地质条件、水动力条件、海藻床分布以及人工鱼礁投放情况；b) 根据随机均匀原则，可先进行预调查，了解刺参分布和密度；c) 站位布设均匀布设，在人工鱼礁区、海藻床或礁石区应加密站位；d) 若调查海域边缘站位刺参数量较大，可适当外扩。4.2 调查方法4.2.1 圆周法4.2.1.1 在形状不规则、海底地形较为复杂或有人工鱼礁投放的调查海域，可使用圆周法。4.2.1.2 每个站位采用圆周法确定样方面积。使用一条长约3.0 m的可拉伸绳索（绳索上带有距离标识），一端为底部加重的金属杆，能够较为稳定地垂直固定到海底，另一端为质量较轻的金属杆，方便潜水员移动，金属杆高度应高于海底凸出物。采样时，潜水员携带质量较轻的金属杆将绳索拉直垂直于海底做圆周运动，一个圆周为一个样方。根据刺参分布密度，潜水员在水下可进行半径1.0 m、2.0 m、3.0 m圆形样方内的样品采集。4.2.2 条带法4.2.2.1 条带法适用于形状规则、海底地形较为简单的调查海域。4.2.2.2 使用两条长约10 m的绳索，绳索中间和两端均有金属杆，可固定到海底，两条绳索的金属杆之间系有长度约2 m的绳索。采样时，潜水员在水下将每条绳索拉直，将金属杆固定于海底，确保各绳索夹角为90，采集样方内样品。4.3 调查时间根据刺参生活习性，在每年4月5月和10月11月进行。4.4 样品采集每个点位或条带内的刺参需全部采集，并进行编号。4.5 分布密度计算对样品的数量进行测定，按公式（1）计算刺参资源分布密度。(1)式中：d刺参资源分布密度（只/m2）；N刺参个数（只）；M调查海域面积（m2）。5 生理性状调查5.1 调查项目调查项目包括：体长、体重、含水率、体成分（蛋白质、脂肪、灰分）、重金属（铜、镉、铬、铅、汞、砷）。5.2 分析方法5.2.1 体长、体重按DB37/T 2292规定的方法执行。 5.2.2 含水率按GB 5009.3规定的方法执行。5.2.3 蛋白质按GB 5009.5规定的方法执行。5.2.4 脂肪按GB 5009.6规定的方法执行。5.2.5 灰分按GB 5009.4规定的方法执行。5.2.6 重金属（铜、镉、铬、铅、汞、砷） 按GB 17378.6规定的方法执行。6 分子遗传学特性调查6.1 样品采集刺参分子遗传学特性样品可从生理性状测定后的样本中随机取样，每个样品的抽样量不少于30只。若样品数量较少，可将邻近多个站位的样品合为1个样品。样品采集后，立即储存于液氮中，上岸后立即转移至-70 冰箱中保存。6.2 调查项目微卫星、16SrRNA。6.3 分析方法按DB37/T 2292规定的方法执行。7 环境现状调查7.1 站位布设原则站位布设应遵循以下原则：a) 布设的站位应具有代表性； b) 调查站位按网格均匀分布，并能覆盖调查区域；c) 若调查区域存在污水排放、工程建设、海水养殖等区域，适当增加区域站位密度。7.2 采样层次按GB/T 12763.4规定的方法执行。7.3 调查项目7.3.1 海水环境水温、水色、透明度、盐度、pH、悬浮物、溶解氧、化学需氧量、活性磷酸盐、亚硝酸盐-氮、硝酸盐-氮、氨-氮、石油类、铜、锌、铬、汞、镉、铅、砷、叶绿素-a。7.3.2 沉积环境锌、铬、汞、铜、镉、铅、砷、石油类、硫化物、有机碳、粒度。7.3.3 生物生态细菌总数、浮游植物、浮游动物、大型底栖生物。7.4 调查时间与频率与刺参资源存量分布调查同步进行。7.5 样品采集与处理按GB 17378.3规定的方法执行。7.6 质量保证措施按GB 17378.1、GB 17378.2规定的方法执行。7.7 分析方法按GB/T 12763.4、GB/T 12763.6、GB/T 12763.8和GB 17378.4、GB 17378.5、GB 17378.7规定的方法执行。7.8 分析评价采用单因子评价，评