艾滋病的实验室检查及其临床意义.ppt

/AIDS实验室检查和临床意义广州第八人民医院传染病研究所，诊断洋葱、HIV感染/艾滋病患者1。临床健康检查和病史资料分析可以提供重要线索，筛选可疑患者。2.HIV感染的病原学检查，以确定是否感染了HIV。这是明确诊断的必要条件。3.身体的免疫功能检查，特别是CD4细胞的测量，是诊断艾滋病的必要条件。HIV感染/AIDS患者诊断4。确认艾滋病指针疾病的机会感染的病原学及病理学检查。如果有难以解释或治疗的复杂症状，应考虑机会感染，通过活检、内镜、支气管肺泡灌洗(BAL)、穿刺等对标本进行病理检查，然后通过特殊染色或免疫组织化学、免疫荧光法、PCR、原位杂交等检查病原体。5.肿瘤(主要是卡波西肉瘤和淋巴瘤)的病理检查也需要确保艾滋病。6.通过影像检查确认患者的病变部位和范围，进行追踪观察。HIV的实验室检查1，HIV感染诊断(1) HIV抗体成分检测(1) HIV核酸成分检测HIV血浆病毒负荷(HIVRNAload)(3) HIV抗原成分检测(4)病毒分离培养2，免疫功能检测病毒表面是一个20面体，由72个掺杂物组成，每个掺杂物由3-4个病毒表面gp聚合物组成。gp 120外膜蛋白，gp41跨膜膜蛋白，病毒内膜P17病毒核心是由两个完整同种RNA链组成的病毒RNA，病毒核心结构蛋白(p24Gag蛋白)，以及病毒繁殖所需的酶蛋白(逆转录酶蛋白PPS，HIV-1复制周期，HIV主要抗原gap基因(核心基因):聚合蛋白p55主要核心蛋白P17，p24核酸结合蛋白p15 pol基因(逆转录酶基因):p64，p53，p31早期：gap蛋白质(P24，P25)的抗体同时出现，或稍后出现。在针对env蛋白(gp41，gp120，gp160)的抗体pol蛋白(p66，p51，p31)的抗体中，P24抗原和抗体随着疾病的进行，gp41抗体可以维持更稳定、更长的时间，这是HIV的主要检测抗体。HIV感染诊断程序：HIV筛选测试语音发出语音报告阴性发出语音报告发出阳性HIV确认检查确认HIV感染诊断检查，血清HIV抗体检查1。HIV首次筛选检验(1) ELISA(酶联免疫法)方法：间接法、双抗体夹心法、竞争法特征：灵敏度99.5%、特异性99.8%，容易(2)斑点免疫胶体金快速测试(金标准方法)特征：快速简便，但敏感性，特异性低于ELISA。结果不能作为诊断标准，仅供参考。血清HIV抗体检测2。HIV鉴定实验(1)蛋白质印迹(WB)检测方法：以已知HIV-Ag(主要是gp160/gp120，p41，p13，p24)检测受试标本中的HIV抗体。HIV-Ag:精制的病毒蛋白或基因工程抗原产品或合成病毒多肽。特征：特异性高，不需要抗原存活的病毒，但操作复杂。(2)其他：免疫荧光检测法(IFA)放射免疫沉淀检测法(RIPA)条带免疫检测法(lia)，3 .HIV抗体检测思路HIV抗体检测阳性率受个体差异、经过过程、试剂的敏感性、检测方法等多种因素的影响。(1)重复检查，或以更敏感的方法进行测试。(2)定期审查：由于需要几周到几个月的昌期，1.5月、3月、6月要检查三次。(3) HIV-2抗原或抗体检测。(4)病情严重的患者或免疫缺陷病毒患者可能无法检测抗体，可能需要亲自检查HIV抗原、病毒基因或病毒粒子。检测i. HIV的核酸成分1。RT-PCR技术：高效、高灵敏度、高特异性RT-PCR定量技术：HIVRNAload2.bDNA技术：利用分支DNA信号扩增实验对HIVRNAload进行定量分析。特征：特异性强，能排除污染干扰，灵敏度比PCR技术弱，3 .分子杂交技术：同位素标记HIVRNA探针，(3) HIV抗原检测1，检测方法：双抗体夹心ELISA方法p24抗原捕获实验的优点：简单、快速、定量的缺点：病毒培养或比PCR2低的敏感度，临床意义，(1)窗诊断：感染HIV后感染后13月出现抗体，抗原浓度下降。(2)后期判断预后：如果HIV抗原与p24抗体一起再次出现或消失，则病毒复制活跃后，状态会恶化的迹象。(3)判断新生儿是否感染了HIV:新生儿包含母体传递的HIV抗体(通常在6个月内)，因此需要检查HIV抗原，确定是否存在垂直感染。(4)可用于评价抗病毒治疗的效果。(4) HIV病毒的分离和培养方法：从患者血液中分离淋巴细胞，检测上清液中逆转录酶或抗原，其酶达到峰值。形成包含上清液和HIV抗体的血清培养免疫复合物，分离出病毒的HIV，通过脐血淋巴细胞培养传代特性。原因诊断很重要，但操作繁杂，技术条件高，阳性率高，难以用于筛选，目前主要用于病因、流行病学和疫苗研究。ii。免疫功能测试(a)血液细胞学检查艾滋病血液测试(1)75-85%包括轻-中度贫血，Hb100g/L(2)白细胞400/mm3(0.4x109/L)，以及(3)外周血淋巴细胞明显减少，经常低于1500/mm3(1.5x109/L)或15%。(4)血小板低，经常低于10万/mm3。艾滋病血液检测的临床意义：(1)WBC的分类、计数和形态观察，特别是淋巴微状态，对评价免疫功能尤为重要。(2)抗病毒治疗过程中监测药物毒副作用的细胞表面标记、细胞和介质之间相互认识的物质基础是细胞膜分子，包括细胞表面的多个抗原、受体和其他分子。细胞膜分子通常也称为细胞表面标记(cellsurfacemarker)。细胞膜分子差异很大，主要有白细胞分化抗原、t细胞受体(TCR)、b细胞识别抗原的膜免疫球蛋白、主要组织相容性复合抗原、黏附分子、细胞因子受体、免疫球蛋白Fc段受体及其他受体和分子。白细胞分化抗原(CD)、白细胞分化抗原(CD)是细胞表面的标记，白细胞包括血小板、血管内皮细胞等，在不同的血系(lineage)和分化阶段及激活过程中出现或消失。造血干细胞-b祖细胞-早期b细胞-成熟b细胞造血干细胞-t祖细胞-早期t细胞-成熟t细胞-成熟t细胞，白细胞分化抗原细胞免疫功能监测破坏 HIV 破坏感染CD4 T淋巴细胞调节细胞因子(辅助T淋巴细胞)正常：410-1590 cell/mm3临床意义：(1)了解HIV感染/AIDS患者的细胞免疫功能。(2)选择抗病毒治疗的时间(推荐的CD4细胞为300cell/mm3时开始抗病毒治疗)。(3)监测抗病毒治疗的效果。(4)判断疾病的预后尤为重要。Cd8t淋巴细胞数：HIV感染早期细胞数增加，后期减少。正常：190至190至1140 cell/mm3 CD4/CD8比率：降低。正常值：0.84.2，2，免疫重建评价李泰生教授等可以分为艾滋病患者CD4 T淋巴细胞数的重建两个阶段：(1)新属性器官：抗病毒治疗的前三个月，血浆HIV-RNA水平的迅速下降，CD4，CD8 T淋巴细胞数的快速下降(2)缓慢生长期：抗病毒治疗3个月后，CD4 T淋巴细胞的数量缓慢增加，进一步分析细胞表型尖端，CD4 CD45RO细胞(CD4记忆细胞)的生长缓慢，CD4 CD45RA (CD4纯细胞)开始生长。这一阶段意味着真正的免疫重建。3，免疫激活HIV感染的持续导致免疫系统各种效果细胞的慢性激活。这种持续的免疫活性在某些情况下会抑制HIV的繁殖，阻止HIV的传播，产生有益的效果。但是也有可能过度激活免疫系统，破坏正常的免疫调节，引发免疫功能衰竭的情况。现在很多学者认为，HIV感染最终导致艾滋病的根本原因应该归结为免疫活性。T淋巴细胞免疫活性表现为CD4，CD8 T淋巴细胞表达的CD25，CD26，CD29，CD69，CD38，h lahr细胞的增加。我们的研究表明，HIV感染/AIDS患者的免疫活性程度与血浆HIV-RNA水平、患者的状态程度有很大关系，与细胞免疫功能及免疫重建有负面关系。通过免疫激活标记的检查，不仅可以估计病情的程度，而且有助于了解患者对治疗的反应。免疫细胞表面的免疫活性标记：CD4，CD8 T淋巴细胞表达的CD25，CD26，CD29，CD69，CD38，h lahr细胞增加。血清中t细胞免疫活性标记，主要包括2-优秀球蛋白(2-m)、肉桂酸(neopterin)、可溶性IL-2受体(SIL-2R)和可溶性CD8表型标记(SCD8)血液的b细胞免疫活性标记主要包括lgG、lgM、lgA和循环免疫复合物(CICS)。，4，细胞因子及其生物活性测定：HIV感染引起的细胞因子的变化，血清和PBMC中的TNF A血清、PBMC、淋巴组织中IFN-r经常增加。TNF，IL-6也可以在脑脊液中找到。IL2经常显着减少。HIV感染初期，细胞免疫反应占主导地位。因此t辅助细胞I型主要分泌的INF-r，IL-2经常上升。随着病情的发展，IL-2、IFN-r的水平逐渐下降，以体液免疫反应为主逐渐变化。因此，HIV感染后期主要分泌t辅助细胞II型的IL-4、IL-5、IL-10的数值越来越高。(c)体液免疫功能检查：辅助项目HIV感染/艾滋病患者非特异性体液免