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文档简介
分析方法开发三步骤,HPLC分析方法开发,选择合适的色谱柱(固定相)和流动相，得到合理的保留时间,调整选择性以及各个色谱峰的分离度,调整流速、填料粒径、色谱柱规格(长度及内径)以获得最佳的分离,开发分析方法的规则,合适的保留因子k(k值1-20)是获得满意分离的基础保留因子k=(tR-tM)/tM,用以下“秘诀”可以使您的开发过程更加简便、快速,揭秘-选择合适的起始条件,不同的样品不同的思路中性化合物无需调整流动相的pH值；而对于含有带电基团的化合物，则需要用缓冲溶液调整流动相的pH值；有时需要采用离子对反相色谱,选用通用的色谱柱一般直接选用C18(或C8)5um12.5,15,25cm长的色谱柱,选择流动相甲醇/水或乙腈/水(依据个人习惯而定),流动相的调整“秘诀”,秘诀1由强到弱一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。,流动相的调整“秘诀”,秘诀2三倍规则每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。,秘诀3粗调转微调当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。,流动相的调整“秘诀”,流动相的调整“秘诀”,秘诀4更换流动相的组成在第三步，我们已经基本上得到了一个合适的保留因子，如果还有一些组分的分离情况不好，则应考虑更换流动相的组成(如有机溶剂类型的改变、pH值的改变或是加入离子对试剂，等等)，或者，索性改变固定相的类型。,色谱柱的调整,根据操作压力、出峰时
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