中兽药散剂中添加磺胺类药物的测定　超高效液相色谱-串联质谱法

ICS 11.220B 41DB37山东省区域标准DB37/T XXXXXXXXX兽药粉末中添加磺胺类药物的测定超高速液相色谱-串联质谱determination of sulfon amides added to Chinese vetineriy drug powderultra-high performance liquid chromatograph y tandem mass pectrarometryXXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施山东省市场监督管理局公告DB37/T XXXXXXXXX脖子序言II1范围12规范参考文件13原则14试剂或材料15设备设备26尝试步骤26.1语音样本26.2萃取26.3设备参考条件26.4测量37测试数据处理38精确度4附录a(数据附录)sulfonamides特性离子参考质量色谱图5全言该标准是根据GB/t 1.1-2009中介绍的规则创建的。本标准由山东省畜牧兽医管理局提出并实施。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会返回。本标准起草单位：山东省兽医药品质量检验所，威海市畜牧业发展中心。本标准主要包括青海、徐恩民、张前进、张志敏、尹令玲、刘少飞、金陵、王燕、陈志强、祖国厅。5兽药粉末中添加磺胺类药物的测定超高速液相色谱串联质谱范围1本标准规定了中兽药粉末中磺胺类药物的超性能液相色谱-串联质谱。此标准包括sulfadiazine、sulfmethylisoxazole、sulfamethoxamine、sulfamethazine、sulfamethazine、sulfamethazine和sulfamethazine此方法的检测限制为0.2 mg/g，定量限制为0.5 mg/g。2规范参考文件应用此文件需要以下文件：所有周日期的参考文件仅适用于周日期的版本。没有日期的所有参考文件的最新版本(包括所有修改单)将应用于此文件。GB/T 6682分析实验室水规格和测试方法3原理兽医药粉中添加的磺胺类药物在提取后由超性能液相色谱-串联质谱测定，并根据保存时间和离子丰度比的定性、外部标准方法定量。4试剂或材料除非另有说明，使用的试剂是色谱纯。4.1水符合GB/T 6682一级水法规。4.2乙腈(CH3CN):色谱纯。4.3甲酸(HCOOH):色谱纯。4.4甲醇(CH3OH):色谱纯。4.5流动相：流动相A(0.1%甲酸水溶液):吸收甲酸(4.3)1.0毫升，将水稀释为1，000毫升，0.22米微孔滤膜初步；流动相B (0.1%甲酸乙腈):吸收甲酸(4.3)1.0毫升，将乙腈(4.2)稀释为1，000毫升，0.22 m微孔滤膜初步；初期流动相：0.1%甲酸乙腈50毫升和0.1%甲酸水溶液450毫升的测定，混合，初步。4.6 5种sulfadiazine、sulfamethoxazole、sulfamethoxamine、sulfamethazine、sulfamethazine、sulfaquinoxaline、纯度4.7混合标准储备溶液：将5种磺胺类药物基准产品(4.6) 10毫克(0.01毫克)分别放入10毫升容量的瓶子中，添加甲醇(4.4)进行溶解和稀释，以刻度、摇动，形成5种磺胺类药物基准溶液。将5种磺胺类药物对照组溶液准确地放入1.0毫升，10毫升容量的瓶子中，将甲醇(4.4)稀释到刻度，搅拌标准储备，保存4冰箱，有效3个月。准备4.8标准曲线：摄取混合标准备用液体适量，并将其稀释为初始流动相，作为标准曲线的10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL标准工作液。作为超性能液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)的对照溶液，100 ng/mL工质。4.9有机微孔膜：0.22 m5仪器设备5.1超高性能液相色谱系列质谱计：配电喷雾离子源(ESI)。5.2分析平衡：敏感度0.01 g、0.00001 g5.3离心机：5，000r/min。5.4超声波清洗机。6测试阶段6.1语音样本未添加5个sulfonamides示例。6.2提取样品1 g(精确到0.01 g)，在离心管中加入10毫升甲醇，取5分钟，5，000 r/min离心10分钟，取上等液，稀释10，000倍，用滤膜(4.9)过滤，在试验溶液中用UPLC-MS/6.3设备参考条件6.3.1高效液相色谱基准条件栏：c18，50公厘2.1公厘、粒子大小1.7 m或相等。流动相a: 0.1%甲酸水溶液。移动相B:乙腈的B:0.1%甲酸。流速：0.25 mL/min。注入量：10 L柱温度：35。液相色谱梯度洗脱条件见表1。表1液相色谱梯度洗脱条件时间分钟ab090104.055454.290105.090106.3.2质量分析标准条件扫描模式：electrospray阳离子(ESI)。毛细管电压：3 kv。离子源温度：105。脱溶剂温度：350。脱溶剂氮流速：500 L/h收集方法：多重反应监测(MRM)。磺胺类药物的定性和定量离子见表2。表2 5磺胺类药物的定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量料号摘要定量离子对定性离子对锥孔电压v碰撞能量v保留时间分钟磺胺吡啶251 155.5251 155.5251 107.52715231.45Sulfamethazine279 185.6279 185.6279 123.63218282.03磺胺氧嘧啶281 155.5281 155.5281 107.52817242.40Sulfonamide isooxazole254 155.5254 155.5254 107.52515232.77磺胺喹恶啉301.1 155.8301.1 155.8301.1 107.83020203.366.4测量6.4.1定性测量通过样品溶液色谱的保留时间相对于相应标准溶液保留时间、每个色谱峰的特性离子和相应标准溶液各色谱峰的特性离子。样品溶液和标准溶液保留时间的相对偏差不超过2.5%。样品溶液特性离子的相对离子丰度与标准溶液的相对离子丰度一致，相对离子丰度偏差不超过表3的规定，就可以判断样品中存在磺胺类药物。表3定性分析中相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度(%) 50 20-50 10-2010允许的相对偏差(%)202530506.4.2定量分析将样品溶液和对照组溶液分别注入液相色谱-串联质谱联用仪，在上述色谱-质谱条件下进行测量、质量色谱、外标准方法的定量分析。有关典型磺胺标准溶液中特性离子的质量色谱分析，请参阅附录a。7测试数据处理样品中磺胺类药物的含量计算如下：(1)正在样式中：X 样品中sulfonamides的含量(以mg/g为单位)。C 样品溶液sulfonamides浓度(每毫升nexta(ng/ml)；V1 样品溶液总体积(6.2说明为100 000，3稀释为10100100=100 000)，单位毫升(ml)；M 样品取样(g)单位；1000，用于单位转换。测量结果显示为并行测量的算术平均值，结果保持3位有效数字。8