常用抗凝剂的原理及其实际运用.ppt

常用抗凝剂的原理及运用,主要内容.抗凝剂的概念.临床上常用的抗凝剂.问题,概念：抗凝：应用物理或化学的方法除去或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，称为抗凝。抗凝剂：阻止血液凝固的化学试剂就称为抗凝剂。对抗凝剂的一般要求是用量少、溶解度大、不影响测定。生化检验常用的抗凝剂有以下几种：,临床上常用的抗凝剂：,肝素草酸盐乙二胺四乙酸盐枸橼酸盐氟化钠物理抗凝法,肝素抗凝原理：,是一种含有硫酸基团的粘多糖，其抗凝机理主要是加强抗凝血酶（AT）灭火丝氨酸蛋白酶的作用，从而阻止凝血酶的形成，并有阻止血小板聚集等多种抗凝作用。,配制和用量,纯的肝素10mg能抗凝65125ml血液(按lmg等于125U，1020U能抗1ml血液计)。但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。一般可配成1肝素生理盐溶液，用时取01毫升于试管内，100烘干，每管能抗凝510ml血液。也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于100mg。,临床运用,1.常用肝素抗凝剂是肝素的钠、钾、锂、铵盐，其中以肝素锂最好，但其价格较贵2.肝素抗凝剂不引起溶血，血液成分干扰较少，可以保持红细胞的自然形态，是红细胞渗透脆性试验、血浆渗透量的理想抗凝剂3.低分子肝素可应用于溶栓和防栓治疗，如外科手术后的溶栓和DIC。4.常用于电解质、血气分析、血氨等测定。抗凝剂比例为5061u肝素/5ml血。,缺点,肝素具有抗凝血酶作用，不适合做血凝试验。另外，肝素过量可引起白细胞聚集和血小板减少，所以不适合做白细胞分类和血小板计数，更不能用于止血检验。此外，肝素抗凝血不能用于制作血涂片，因为瑞士染色后出现深蓝色背景，影响显微镜减产。肝素抗凝血应于短时间内使用，否则放置过久血液又可凝固。,草酸盐的抗凝原理,草酸盐溶解后解离的草酸根离子与血液中的钙离子形成草酸钙沉淀，使钙离子失去凝血功能，阻止凝血过程。常用的草酸盐抗凝剂有草酸钠，草酸钾和草酸铵。,配制方法及用量,草酸盐合剂：草酸铵12g、草酸钾08g、福尔马林10ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂01ml(即相当草酸铵12mg，草酸钾08mg)。根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。如取05ml于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。草酸钾：取草酸钾10g，加蒸馏水少许使溶解，再加蒸馏水至100ml。配制成10水溶液，如每管加0.1ml则可使510ml血不凝。,草酸盐的临床运用,1.草酸盐常用有草酸钠、草酸钾、草酸铵草酸钠或草酸钾可以使细胞缩水邹缩，而草酸铵则可以使血细胞膨胀，故临床上测定血细胞比容和网织红细胞计数时常使用草酸铵和草酸钾两者按适当比例混合形成的“双草酸盐”抗凝剂，恰好不影响红细胞的自然体积。2.草酸盐作为抗凝剂的优点是溶解度好，草酸钠的常用浓度为0.1mol/L与血液按1：9的比例使用，常用于血液生化测定，可用于凝血的检查。但因为草酸盐对于凝血因子V的保护力差，目前已不使用该抗凝剂作为凝血的检查，取而代之的是枸橼酸盐。,3.常用于尿素、肌酐、纤维蛋白原等测定缺点：草酸盐浓度过高会导致溶血、改变血液pH，干扰血浆钾、钠、氯和某些酶活性的测定。草酸盐对LDH、丙酮酸激酶、AKP和淀粉酶有抑制作用。由于生成草酸钙沉淀，红细胞会出现锯齿状，白细胞出现空泡，淋巴细胞及单核细胞会变形，不宜做血片检查。草酸盐可使血小板聚集，并影响白细胞形态，不能用于白细胞和血小板分类计数。,乙二胺四乙酸盐（EDTA盐）抗凝原理,EDTA盐能与血液中的钙形成螯合物，使钙失去凝血作用，从而阻止血液凝固。常用的EDTA盐有二钠盐，二钾盐和三钾盐。抗凝能力：每0.8mgEDTA盐可抗凝1ml血液。,EDTA盐的临床运用,因为EDTA对于血细胞的形态和血小板计数影响很小，适用于多项血液学检验。也适用于糖化血红蛋白检测项目1.EDTAK2抗凝血液在室温下6h其红细胞体积不变，故特别适合做血液分析仪所需全血。血细胞比容测定和血小板计数用血的抗凝剂。抗凝剂比例为1.02.0mg/1ml血。2.国际血液学标准化委员会（ICSH）建议，血细胞计数用EDTAK2作抗凝剂时用量为EDTAK2.2H2O1.52.0mg/ml.,EDTA盐作为抗凝剂的缺点,1.EDTA盐抗凝剂能影响血小板的聚集和白细胞的吞噬功能，不适合用于凝血的检查和血小板功能试验。2.EDTA钠盐的溶解度明显低于钾盐，有时会影响抗凝效果。,3.EDTA盐不能用于钙、钠、及含氮物质的测定，对淀粉酶、肌酸激酶、AKP、ALP、5-核苷酸酶等可抑制，对丙酮酸激酶有明显升高的作用。4.EDTA能影响某些酶的活性和抑制红斑狼疮因子，故不适于制作组化染色和检查红斑狼疮细胞的血涂片。,5.用EDTA抗凝血制备的涂片对粒细胞形态有影响，其影响程度与抗凝血放置时间和抗凝剂浓度有关。EDTA的使用浓度为1.41.6g/L血液，迅速制备涂片，粒细胞形态特征有微小的改变，有时细胞核分叶不见，细胞肿胀。如果用放置时间较长的血液制备的涂片可出现细胞浆内颗粒消失，胞浆和细胞核有空泡，染色质模糊不清。用大于1.5g/L血液浓度制备的血涂片，粒细胞可完全变性，对淋巴细胞和单核细胞也有影响，尤其是血小板，可出现肿胀、破裂而产生碎片，影响其计数，造成结果偏高。,枸橼酸盐的抗凝原理,枸橼酸盐能与血液中的钙离子结合形成螯合物，使钙离子失去凝血功能，从而阻止血液凝固，常用的枸橼酸盐的抗凝剂时枸橼酸三钠，又称柠檬酸三钠。常配成35%水溶液。也可直接加粉剂，每毫升血加35mg，即可达到抗凝目的。,枸橼酸盐的临床运用,1.枸橼酸盐抗凝剂常用于红细胞沉降率和凝血功能测定。测定血沉用3.8%枸橼酸钠抗凝，抗凝剂与血液比例为1：4，凝血试验需用3.2%枸橼酸钠抗凝，比例为1：9。2.另外，因为枸橼酸盐作为抗凝剂的细胞毒性小，常作为血液保养液的成分之一。,缺点,枸橼酸钠6mg才能抗凝1ml血液，碱性强，不适用于血液化验和生化测验。,氟化钠的抗凝原理,氟化钠中的氟离子可与钙结合形成螯合物而发挥抗凝作用，但其抗凝能力较其他抗凝剂弱，氟离子可抑制糖酵解中的烯醇化酶，防止糖酵解，若未加氟化钠，血标本中的葡萄糖含量将以每小时6%的速度下降，而在有氟化钠存在的条件下，血糖浓度在25摄氏度的条件下可以稳定24h，4摄氏度可以稳定48h。,氟化钠的临床运用,临床上常用氟化钠草酸钠混合抗凝剂作血糖测定的抗凝剂，氟化钠可以抑止烯醇化酶，它可避免血细胞葡萄糖酵解酶的作用，延长标本的保存时间。,物理抗凝法,原理：将血液注入含有适量玻璃珠的三角瓶中徐徐摇动,使纤微蛋白全部粘附在玻璃珠上.亦可使血液不再