2016级基因表达载体的构建2.ppt

，上课前复习1。基因工程基本操作的4个阶段2。目的基因是？3.获得目的的基因方法：3至4。构建基因组文库所需的酶是？5.PCR技术的名称、原理、过程、基因工程的基本操作程序、目的基因获取、基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞、操作过程、目的基因的检测和鉴定、学习目标1。知道，识别基因表达载体构成2。基因表达载体的制作过程概述，学习方法独立引导思维，展示优秀的评论，提问，上课前预览确认，第一，1。基因表达载体的构建2。下一代稳定，激活目的基因表达3。标记基因启动子目的基因终结者克隆原点第一端RNA聚合酶蛋白DNA片段端转录脱氧核苷酸包含基因的受体细胞抗生素耐药基因4。启动子末端标记基因2，(a)维持稳定表达(2) 1。双子叶植物子叶植物T-DNA染色体的DNATi质粒的T-DNA上染色体DNA(2)金属颗粒(3)抗虫棉2。受精卵雌性输卵管子宫的显微注射3。快速单钙离子敏感状态，过程，基因表达载体的构建，1。基因工程的关键阶段2。目的使基因在受体细胞中稳定存在，并遗传给下一代，同时使目的基因表达和发光。3.基因表达载体的构成启动子插入目的基因终止符标记基因克隆远，标记基因，各部分的功能是什么？想法：在基因表达载体内，启动子和终结者的位置能互换吗？分析原因。不行。启动子是RNA聚合酶识别并结合以启动战士的部位；终结者位于基因的末端以结束战士。顺序正确，目标基因才能正常转录。1，1 .启动子位于基因的第一端，终结者位于基因的末端，分别决定战士的开始和结束。它们是由脱氧核苷酸构成的。开始和结束密码子位于mRNA上，分别决定翻译的开始和结束。他们是由核苷组成的。基因表达载体的构建核， (1)质粒带有特定的_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 使目标基因使用_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _中断。(3)剪切的目的基因片段为质粒的_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _课程：GAATTC，GAATTC，目的基因1，ctaag，矢量1，酶1，酶1，酶1，1自身环化(包括目的基因环化，质粒再循环)2。两个DNA片段是向量-向量结合体；目的基因-载体连接；目标基因-目标基因结合体3。反向连接，基因表达载体的构建限制酶切，如何防止自身循环化和反向连接？GAATTC，AAGCTTT，目的基因3，ttcgaaa，粘性末端-tcga-，基因表达载体的构建，1 .基因工程的关键阶段2。目的在受体细胞中稳定存在目的基因，能遗传给下一代，同时使目的基因表达和发光。3.基因表达载体的组成启动子插入目的基因终止符标记基因克隆远场检测，1.C2.C3.(1)携带Ti质粒T-DNA外源基因的DNA表达载体(包含目的基因的重组Ti质粒)含有重组质粒的土壤农杆菌(2)表达载体植物组织培养(3)，练习3答案，1.C2.A1.(1)目的基因-矢量连接体目的基因-目的基因连接体分离纯化(2)矢量连接体目的基因-矢量连接体，矢量-矢量连接体(3)启动子mRNA(4)(1)。NGO miv (2)。Abd (3)。ABC (4)。b，1，(多选)基因表达载体的构建中，a .目的基因b .启动子c .终结器d .标记基因，ABCD，2，基因表达载体的以下叙述不正确，a .启动子是RNA聚合酶识别和结合部位，起始密码b .启动子和终结器是特殊结构的DNA片段片段，MRNAa，3，目前转基因项目可以打破a .地理隔离，但不能打破生殖隔离。b .不能打破生殖隔离，但不能打破地理隔离。c .彻底突破地理隔离和生殖隔离。d .部分突破地理隔离和生殖隔离，C，核，DNA的一链，4个核糖核苷酸，RNA聚合酶，ATP，A-UC-GT-AG-C，核，DNA的两链，4农杆菌特征：容易感染双子叶植物和裸子植物。T-DNA在T-DNA中可以转移到受体细胞的染色体上，2。如果转基因、杂交带出现，则被测试的样本中含有目标基因或目标基因。基因组文库的建立方法，提取任何生物的所有DNA，用适当的限制性酶切割，连接到特定大小的DNA片段和运输载体，储存在受体细菌(基因组文库)，目的基因，分离，一些基因库的建立方法，mRNA，逆转录酶，单链DNA，第二阶段：核酸酶h在RNA-DNA杂交分子中分解RNA链，使其成为单链DNA。第三步：以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下，合成另一个互补的DNA链，形成双链DNA分子。，2020/6/10，25，1。下表是关于基因工程的基因操作的术语及其内容。2、以下方法采用( mRNA逆转录形成基因组文库中提取的PCR技术 DNA转录a .b .b .c .c .d .，细菌的质粒分子具有抗生素耐药基因b .有利于检测是否引入目的基因。c .增加质粒分子的分子量。容易与外源基因连接。4.基因工程的叙述是a .限制酶获得目的基因的情况下，b .重组质粒的形成，在细胞内完成的c .质粒可以作为载体d .蛋白的结构，作为合成目的基因提供数据，5 .哪一个不是基因表达载体的一部分()a .启动子b .终止密码c .标记基因d .目的基因6。以下不是将目标基因导入植物细胞的方法()a .基因枪法b .微注射方法c .农杆菌转录途径d .花粉管途径方法，7 .构建基因组DNA文库时，首先是细胞的a，染色体DNAB，线粒体DNAB以下对基因库的描述是a，某一生物的全部基因包含一个基因库b，某一生物的多个DNA片段，并带到某一生物体内。如果这种生物包含基因库C、基因组库d、一个生物的一部分基因库cDNA库、A、C、9、控制遗传工程有利性状的DNA分子片段是at GTG/tacac，那么要增加数量，就要用PCR技术人工复制。 复制时要给出的条件是：双链DNA分子以模板为模板的ATGTG或TACAC模型链 4种脱氧核苷酸4种核苷酸DNA聚合酶DNA聚合酶热稳定性DNA聚合酶引物温度变化恒温a .c .d，10，10 其数量为A.540个B.8100个C.17280个D.7560个，B，11，在碱基序列信息已知的情况下获取目的基因的最方便方法是a，化学合成法B，基因组法c，cDNA文库d，聚合酶链反应，12， 获得以下目的基因的方法中需要模型链的是：从基因库中获得目的基因的方法利用PCR技术扩增目的基因的方法反转录方法通过DNA合成器进行化学合成的a .b .c . c .d .d .d .a、d、13，目的基因主要是_ _ _ _ 获得目标基因的一般方法包括：(1)从基因库中获取目标基因，基因的_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _位置，基因的位置(2)利用PCR技术扩增意图基因，这是一种核酸合成技术，完成于_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。但是，目标基因是众所周知的_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _(3)如果基因小，核苷酸序列已知，则可以通过_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _方法知道。编码蛋白，核苷酸，染色体，转录，表达，in vitro，核苷酸，引物，人工合成，14，(多选择)一个基因表达载体的构建a .目的基因b .启动子c .终结符d .标记基因，a，16，目前转基因项目可以打破a .地理隔离，但不能打破生殖隔离，b .不能打破生殖隔离，但不能打破地理隔离，c .彻底突破地理隔离和生殖隔离d .部分突破地理隔离和生殖隔离。c，17，基因工程科学家一般将细菌，酵母等微生物用作受体细胞。原因是a .结构简单，操作方便。b .繁殖速度快。c .遗传物质含量少，简单d .性状稳定。变异少的18、基因工程常用的受体细胞大肠杆菌动物细胞a . b .b .C .d .b . d . 19、基因工程在DNA分子水平设计和施工，在基因工程的基本阶段碱基互补利用基因工程培养抗虫棉，以下介绍目的基因：将毒素蛋白注入棉受精卵；将编码毒素蛋白的DNA序列注入棉受精卵；编码毒素蛋白的DNA序列和细菌质粒进行重组，注射到棉卵巢，进入受精卵；编码毒素蛋白的DNA序列和质粒进行重组，将细菌注入感染棉的体细胞，并进行组织培养a .c .d . d。以下遗传工程引入目的基因方法：农杆菌转化基因枪法基因枪法花粉管法显微扫描胚胎移植DNA分子杂交法a .b .c .d .d .c，23 .准确地叙述了基因工程质粒可以提供载体D，蛋白质的结构关于合成目的基因的信息，D，22基因工程的叙述，错误的A，DNA连接酶结合粘附终点的碱基对，b，利用限制性内切酶获取目的基因的c，目的基因通过载体获得受体细胞D，人工合成基因没有限制性内切酶。 在基因操作的基本阶段，不构成碱基互补配对的阶段为：a，合成目的基因b，目的基因的检测和表达C，目的基因导入受体细胞d，目的基因和转运载体的结合，C，25，(多选择)人们利用基因工程生产人类胰岛素作为大肠杆菌，在此过程中，()a .将胰岛素基因和载体切成适当的酶b .将重组后的DNA分子吸引到受体细菌，使其扩增。c .重组DNA分子进入受体细菌表达特性。d .筛选出能产生胰岛素的“工程菌”，ABCD，26，以下哪一个阶段不属于基因工程技术()a .基因转移b .基因扩增c .基因扩增c .基因检测d .基因表达，b .胰岛素是治疗糖尿病的特效药，长期依赖于猪、牛等动物胰腺的提取，100公里在基因工程上，怎样设计大肠杆菌来生产胰岛素呢？设计尝试，思考：作为基因工程表达载体，只包含目标基因就能完成任务吗？怎么了？不，不。因为目标基因在表达向量中表达和工作，所以还需要其他调节因素，如启动子、终止者、标记基因等。必须构建这些成分的主要原因是：(1)生物之间的基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子对基因表达更有利；(2)通过cDNA库获得的目标基因没有启动子，只有将编码序列导入受体生物，是不能转录的；(3)需要对是否将目标基因引入受体生物的筛选标记。(4)为了提高目标基因的表达水平，经常还增加其他调控因素，如扩增者。(5)有时确定目标基因表达的产物存在于细胞的哪些部位，添加能够识别存在部位的基因(或绿色荧光蛋白基因等识别目标基因和基因的融合基因)。思考和探索：2。根据艾格尼丝能把目的基因导入双子叶植物的机制，你能分析不能带来子叶植物的原因吗？如果把抗病基因注入小麦，理论上你该怎么办？所有农杆菌菌株都可能感染子叶植物，因此要选择合适的农杆菌菌株；添加化学主要物质和诱导物质，一般是乙酰丁香酮等的目的是将农杆菌