药用菊花中总黄酮的提取、分离、检识与鉴定

药用菊花中总黄酮的提取、分离、检识与鉴定,一、来源二、主要化学成分三、提取与分离四、检识和鉴定五、含量测定,目录,Inserttitletexthere,一、中药菊花来源,菊花为菊科植物菊(ChrysanthemummorifkliumRamat.)的干燥头状花序,具有疏风、清热、明目、解毒功效。药典中规定药用菊花主要有滁菊、毫菊、贡菊和杭菊4个品种，安徽是其较主要的道地产区。,二、主要化学成分,（一）挥发油成分（二）黄酮类化合物（三）绿原酸（四）其他：如氨基酸、微量元素等。,总黄酮类成分,香叶木素,木犀草素,芹菜素,金合欢素,槲皮素,芦丁,1.抗癌抗肿瘤作用2.抗氧化作用3.抑菌抗病毒作用4.抗心脑血管疾病5.抗氧化抗衰老作用6.中枢神经作用,黄酮类主要药理作用,总黄酮的提取与分离,提取,分离,热水提取法,醇提取法,超声波提取法,微波提取,溶剂萃取法,柱色谱法,超临界流体色谱法,超临界流体萃取,三、总黄酮的提取与分离,pH梯度萃取法,高效液相色谱法,不同处理方法总黄酮提取率和浸膏得率,表1不同处理方法总黄酮提取率和浸膏得率比较（n=3）,乙醇回流法是经典的提取方法，查阅文献得到此法的总黄酮的提取率较高，且操作简单，对仪器要求不高，综合提取率及实验室条件等因素，我组决定采用70%乙醇回流法提取菊花中的总黄酮。,拟提取方法-乙醇回流法,拟提取方法-乙醇回流法,菊花粉末50g,减压回收乙醇，浓缩至50ml，得浸膏。,加8倍量70%乙醇400ml,浸泡1h,回流提取2次,每次1h（加适量硼酸）合并滤液,浸膏中加入适量水使混悬,依次用适量石油醚、氯仿萃取,氯仿层黄酮类成分,浓缩液（即提取的浸膏）,石油醚层脂溶性成分如叶绿素、胡萝卜素,水层水溶性杂质如pro、多糖,用旋转蒸发仪减压蒸馏回收溶剂,膏液置烘箱内低温烘干,并称重。,(一)理化检识1.盐酸-镁粉反应样品+1ml乙醇溶解+少许镁粉，振摇+几滴浓盐酸1-2min后，观察现象,2.四氢硼钠还原反应样品12mg+适量甲醇溶解+NaBH410mg+几滴1%HCl,黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇：显红紫红色,二氢黄酮或二氢黄酮醇：红紫红色,四、检识与鉴定,3.三氯化铝反应样品的乙醇溶液+1%AlCl3乙醇溶液反应络合物（黄色）,凡具3-OH、4-C=O；5-OH、4-C=O；或邻二酚羟基结构的黄酮类均可显色,4.碱性试剂反应（NaOH）,黄酮类显红色,取4支试管,编号1、2、3、4分别加入样品试剂,检识与鉴定,4,2,3,1,4,2,3,1,1%三氧化铝1mL,1ml浓HClO,1g镁粉,1mlNaOH,1ml四氢硼钠,几滴浓HCl,（二）色谱检识（TLC）材料:硅胶G-CMC-Na板展开剂:苯-吡啶-甲酸(3695)对照品:1%芦丁甲醇液显色剂:1%三氯化铝乙醇液方法：（1）点样（2）展开（3）显色：待展开剂挥散尽后,喷洒1%Alcl3乙醇液,lmin后,出现大量黄色斑点,紫外光下显黄绿色、测Rf值,检识与鉴定,检识与鉴定,五、总黄酮类成分定量分析,510nm,1.样品溶液制备,样品干浸膏加50ml乙醇全部溶解得样品母液,精密移取Iml,5%亚硝酸溶液1ml,放置6min10%硝酸铝1ml,放置6min10%氢氧化钠试液10ml,+,甲醇定容,摇匀,放置15min,摇匀，得芦丁对照液母液,于50mL容量瓶内,加乙醇适量溶解并定容,精密称取干燥至恒重的无水芦丁10mg,0.0ml1.0ml2.0ml3.0ml4.0ml5.0ml6.0ml,5%亚硝酸钠溶液1ml,放置6min10%硝酸铝1ml,放置6min10%氢氧化钠试液10ml,2.对照品的制备,分置于25ml容量瓶中,甲醇定容,摇匀,放置15min,3.最大吸收波长的选择,对照品,样品,确定含量测定的最佳波长为510nm,于400600nm范围内进行波长扫描,对照品溶液,0ml1ml2ml3ml4ml5ml6ml,置25ml容量瓶中,5%亚硝酸钠溶液1ml，振荡摇匀,放置6min10%硝酸铝1ml,振荡摇匀,放置6min10%NaOH试液10ml,加甲醇定容至刻度,摇匀,放置15min,在510nm处测定吸光度,以对照品量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。,+,3.最大吸收波长的选择,4.标准曲线的绘制,取1ml供试液,5%亚硝酸溶液1ml,振荡摇匀,放置6min;10%硝酸铝1ml,振荡摇匀,放