DB21∕T 2707-2016 桃叶卫矛组培快繁技术规程

宁 省 地 方 标 准 桃叶卫矛组培快繁技术规程 2016 - 10 - 13发布 2016 - 12 - 13实施 辽宁省质量技术监督局 发 布 05 27072016 27072016 前 言 本标准按照 出的规则起草。 本标准的附录A、附录B、附录本标准由辽宁省林业厅提出并归口。 本规程起草单位：沈阳农业大学、辽宁省实验林场、辽宁省生态实验林场、辽宁省林业种苗管理总站、辽宁省林业厅外资项目办公室、辽宁省固沙造林研究所、国有昌图付家机械林场、辽宁省卫生计生委卫生计生监督局、辽宁省林业调查规划院、抚顺市清原县林业局 本规程主要起草人：张丽杰、陆秀君、王玉涛、周强、倪鹏跃、金星、丛健、王斯彤、曹颖、扈延武、腾贵波、刘景强、凌帅、周宏、王明先、陈敏、张克 27072016 次 前言 1 范围.规范性引用文件.术语和定义. 外植体采集与处理.培养基配制.接种.组织培养. 27072016 .殖培养.苗培养.根培养.炼苗.驯化.化时间.0移栽.1苗期管理.2定植.录A.录B.录C.考文献. 27072016 1 桃叶卫矛组培快繁技术规程 1 范围 本标准规定了桃叶卫矛（组织培养快繁技术的术语和定义、外植体采集与处理、培养基的配制、接种、培养条件、驯化、移栽、定植。 本标准适用于辽宁省范围内桃叶卫矛的组培快繁育苗。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 000 主要造林树种苗木质量分级 6001 育苗技术规程 1000 容器育苗技术 752物种苗组培快繁技术规程 2306卉种苗组培快繁技术规程 3术语和定义 桃叶卫矛（为卫矛科卫矛属的落叶小乔木。该树种对风和烟尘有很强的抵抗力，病虫害少，且枝叶娟秀细致，树冠饱满形美，是园林绿化观赏树种，同时具有较高的经济价值。生物学特性参见附录A。 下列术语和定义适用于本文件。 物组织培养所利用植物体离体的器官（如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）组织（如形成层、表皮、皮层、髓布细胞、胚乳等）或细胞以及原生质体，称为外植体。 养基或培养材料生长有真菌或细菌等微生物的现象。 称量准确和方便，按照培养基配方将培养基的成分配制成一定浓度和比例的溶液或混 27072016 2 合溶液。 灭过菌的外植体接种于琼脂培养基上，诱导出愈伤组织或芽的培养过程。 培养材料周期性的分株，分割后转接入新鲜培养基中继续培养的过程。 个培养周期内试管苗增殖的倍数，即单芽培养一个周期后的平均增殖芽数。 诱导无根离体芽苗产生根的培养过程。 菌苗及培养容器一起移至室外近自然环境中培养，提高苗木的木质化程度，增强苗木对自然光照和温差变化适应能力的过程。 苗后的组培苗，移栽到驯化基质中，适应自然光照、温湿度变化而使之成活的过程，驯化保持湿度，提高成活率。 化后的组培苗种植到温室或扦插棚移栽基质中，并使苗木逐渐适应自然条件下健壮生长的过程。 4 外植体采集与处理 在生长旺盛的季节，选择连续3天以上的晴天，采集优良母树的当年生枝条作为外植体。 植体当天取材，当天处理，若需长途运输，需将外植体保存至装有冰块的保鲜盒内。 27072016 3 把取回的外植体枝条剪去叶片，剪成长约2入烧杯中用洗衣粉或洗洁精浸泡 5后流水冲洗 2h3h，最后用蒸馏水冲洗，转至超净工作台。 超净工作台上，用已配制好的75%乙醇浸泡30s，然后用无菌水冲洗2次3次。 取 1g 氯化汞，加蒸馏水溶解后定容至 1L，配制成 升汞消毒液。用其浸泡材料（带顶芽的茎段1腋芽的茎段2，用无菌水冲洗5次7次，并用无菌滤纸吸干水分后，剪成15培养基配制 制作培养基前需先配制培养基母液，液配制应用蒸馏水。 制大量元素母液时，每个组分单独溶解，避免沉淀发生。 制后的母液应置于4冰箱中冷藏保存，微量元素母液用棕色瓶盛装保存，母液配制后应及时使用，贮存时间不宜超过3个月。 液容器上应贴好标签，注明名称、配制日期，发现母液中有沉淀或絮状物出现应停止使用。 配制方法参见附录C。 液配制好后贴好标签并置于4冰箱中冷藏，保存期不超过3个月。 准备好培养容器（1蒸馏水、琼脂粉、蔗糖和各类母液等。 用烧杯盛有少量蒸馏水，参考用量参见附表B。 ，计算用量，称量后用蒸馏水溶解，然后用容量瓶定容。 g/L7g/L）加入烧杯中加热搅拌至完全溶解。 据要求加入计算好的激素，玻璃棒搅拌均匀。 分搅拌后，用据不同需要若进行定量分装时，要尽快将培养基分装到培养瓶内，以免培养基凝固或变稠而难以分装。 装培养基时，勿将培养基粘在培养瓶瓶口，粘上后应立即擦拭干净，否则容易引起污染。分装后立即用封口膜盖上，并用绳子扎紧。 27072016 4 将分装好的盛有培养基的三角瓶放入高压蒸汽灭菌锅内。当气压达 ，打开冷凝阀，排尽灭菌锅内的冷空气。当气压达到 度升至 121时开始计时，保持温度并进行压力灭菌20掉电源，以慢排方式排放热气。待灭菌锅内的气压表指针降至0时再打开高压灭菌锅盖，取出培养基。将培养基平放置于接种室或培养室内进行冷却。 菌后的培养基应注明培养编号及配制日期，同时按培养基种类、配制先后顺序分别储存于接种室或培养室。储存时间不宜超过2周。 导培养基为：+；+；+ ； + ；增殖培养基：+；生根培养基：；1/2 ；1/2 6接种 种人员和接种室内保持清洁。每次接种前接种室内要进行紫外线消毒2530避免紫外线损伤皮肤和眼睛，操作人员应在关闭紫外灯15种结束后，应及时清理超净工作台及杂物。 接种时，超净工作台的风机要始终保持开启状态，确保通风顺畅。 酒精灯或电热消毒器将接种工具消毒，消毒后应使其冷却后方可使用，避免烫伤外植体。每转接完一个培养瓶中的培养材料，均应将接种工具放在酒精灯外燃火焰上或电热消毒器内灼烧10s，同时更换接种器皿中的滤纸，以避免交叉感染。 无菌的接种器皿中，将带腋芽或顶芽的茎段切分成 1单芽茎段，接种于诱导培养基上，培养数日后再将萌发的丛生芽或单个壮芽进行切割，再接种到新鲜的培养基上进行继代培养，并可将单个壮芽接种到生根培养基上诱导生根培养。每个培养瓶内接种小芽或单芽的数量为 3 株4 株，并分布均匀。转接完成后，用记号笔在培养瓶上标注接种日期、编号或名称。 次接种完毕后，应用 75%的乙醇将超净工作台的台面及两边挡板等擦拭干净， 27072016 5 7组织培养 养室内温度为 252，培养瓶上部的光照强度为 2000000照时间为每天12h16h。 已消毒的接种材料接种在诱导培养基上，10d150段腋芽萌发新芽，30殖培养 将初代培养诱导形成的幼芽或丛生芽，接种到增殖培养基上进行培养。 增殖培养周期为30d40d。 苗培养 将增殖培养的单个芽或丛生芽切分后接种到壮苗培养基中，培养20d30苗株高可达3 根培养 选取壮苗后的幼苗，接种于生根培养基中进行生根培养。 8炼苗 生根培养2周3周后，选取叶片绿色、株高大于3根柔软且不少于3条的无菌苗，将组培苗放置温室自然散射光下，打开封口炼苗2d3d，控制温度在1828。 9驯化 河沙、珍珠岩与草炭土比例为1:1:1，的多菌灵搅拌均匀，然后装入穴盘中压紧待用。 无菌苗从培养容器中小心取出，注意保护根系，将根部粘附的琼脂用清水（锰酸钾）清洗干净，移到营养钵中，扶正小苗，使根系尽量舒展，用基质将根埋好。用镊 27072016 6 子等工具在容器钵中扎能容纳根系的小孔，将组培苗的根系放入孔内压实，浇透水，覆膜。并用镊子在膜上扎几个透气小孔。每天用细雾喷壶喷水，使环境湿度保持在90%左右。外面用遮阳网罩着，避免阳光直射。当发现小苗基部或基质上出现白色絮状菌丝时，用多菌灵700倍液喷洒基质，尽量避免药液滴在苗木上。 化时间 2周3周 10移栽 经过2周3周驯化后，当苗木表现为叶色深绿，叶片增大，有新叶长出时，可将苗木移栽至直径122 11苗期管理 栽后，在遮荫且通风条件下培养4d5d，每天向叶面喷水1次，1周后，撤掉遮荫，但要注意通风。 栽后经常检查新叶生长情况。桃叶卫矛在生长过程中易发生红蜘蛛侵害，可喷施500倍1000倍的乐果稀释液。 批移栽驯化的苗木都要配有标签，建立管理技术档案。 12定植 翌年春季移栽至圃地。 27072016 7 附录A （资料性附录） 桃叶卫矛生物学特征 桃叶卫矛（别名: 丝绵木、明开夜合、华北卫矛，卫矛科、卫矛属小乔木，高达6m。叶卵状椭圆形、卵圆形或窄椭圆形，长42端长渐尖，基部阔楔形或近圆形，边缘具细锯齿，有时极深而锐利；叶柄通常细长，但有时较短。淡白绿色或黄绿色，直径约8蕊花药紫红色，花丝细长，葫果倒圆心状，成熟后果皮粉红色；种子长椭圆状，种皮棕黄色，假种皮橙红色，全包种子，成熟后顶端常有小口。花期5月6月，果期9月。 桃叶卫矛属于喜光，稍耐荫；耐寒植物，对土壤要求不严，耐干旱，也耐水湿，而以肥沃、湿润而排水良好之土壤生长最好。根系深而发达，能抗风；根蘖萌发力强，生长速度中等偏慢。对主要分布地区：产地区域广阔，北起黑龙江包括华北、内蒙古各省区，南到长江南岸各省区，西至甘肃，除陕西、西南和两广未见野生外，其他各省区均有，但长江以南常以栽培为主。分布达乌苏里地区、西伯利亚南部和朝鲜半岛。 主要价值：（1）使用价值：木材可供器具及细工雕刻用；树皮含硬橡胶，种字含油率达40%以上，可做工业用油。（2）食用价值：叶可代茶。（3）药用价值：花果充当合欢与根均入药。 27072016 8 附录B （资料性附录） 母液 化合物 原配方量 (扩大倍数 称取量 （母液体积 （配制1650 33000 900 38000 40 8800 70 7400 大量元素 70 20 3400 1000 50 66 240 460 720 0 微量元素 00 5 1000 5 560 铁盐 00 7460 1000 5 肌醇 100 20000 烟酸 00 盐酸吡哆醇 00 盐酸硫胺素 0 维生素和 氨基酸 甘氨酸 2 200 400 1000 5 27072016 9 附录C （资料性附录） 常用植物生长调节物质配制方法 类别 种类 配制