成人白血病中ptpro基因表达的研究

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/8成人白血病中PTPRO基因表达的研究作者宋晓宁杨琳刘小军温树鹏罗建民作者单位050051石家庄市，河北医科大学第三医院血液内科宋晓宁河北医科大学第二医院血液内科【摘要】目的通过检测成人白血病中受体型蛋白酪氨酸磷酸酶OPTPRO基因的表达水平，研究其在白血病发病中的作用及临床意义。方法将入选患者分为急性白血病AL初治组、完全缓解组CR组、慢性粒细胞白血病组CML组和正常对照组NC组，SYBERGREEN荧光定量PCR方法检测白血病和NC组骨髓单个核细胞MNC中PTPRO基因的表达。结果AL初治组PTPRO表达水平低于CR组P，更低于NC组P【关键词】蛋白酪氨酸磷酶O白血病定时定量PCR【ABSTRACT】OBJECTIVETOINVESTIGATETHEEXPRESSIONOFPTPROGENEINADULTPATIENTSWITHLEUKEMIA，ANDTOEVALUATEITSEFFECTANDCLINICALSIGNIFICANCEINTHEPATHOGENESISOFTHEADULTPATIENTSWITHLEUKEMIAWEREDIVIDEDINTOACUTELEUKEMIAGROUPALGROUP，COMPLETERECOVERYGROUPCRGROUP，CHRONICMYELOGENOUSLEUKEMIAGROUPCML精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/8GROUPANDNORMALCONTROLGROUPNCGROUP，ANDQUANTITATIVESYBERGREENPOLYMERASECHAINREACTIONPCRWASUSEDTODETECTTHEEXPRESSIONOFPTPROMRNAINMARROWMONONUCLEARCELLMNCINALLTHEPATIENTSANDHEALTHYTHEEXPRESSIONLEVELSOFPTPROINALGROUPWERESIGNIFICANTLYLOWERTHANTHOSEINCRGROUPPCONCLUSIONTHEEXPRESSIONLEVELSOFPTPROINADULTPATIENTSWITHLEUKEMIAARESIGNIFICANTLYDECREASED，WHICHSUGGESTSTHATPTPROGENEMAYPLAYACERTAINROLEINTHEPATHOGENESISANDDEVELOPMENTOFLEUKEMIA【KEYWORDS】PTPROLEUKAEMIAREALTIMEPCR受体型蛋白酪氨酸磷酸酶OPTPRO是PTP家族的成员之一。PTPRO在鼠、人类等脊椎动物中是高度保守的。PTPRO作为一个重要的酪氨酸磷酸酶，是一个候选的肿瘤抑制基因，具有重要的生理功能，并具有肿瘤抑制因子的大部分特征，在多种肿瘤组织中被高度甲基化，但是对PTPRO的研究还处在起步阶段。本研究将应用实时定量PCRREALTIMEPCR的方法检测PTPRO基因在急性、慢性白血病发病时、缓解后、复发时及正常人的表达情况，初步探讨其在白血病发病中的作用，为分子靶向治疗及评价预后提供依据。精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/81资料与方法一般资料选择河北医科大学第二医院和河北医科大学第三医院血液科2008年8月至2009年10月成人急性白血病AL患者80例，慢性粒细胞白血病CML患者15例，同期选择10例健康志愿者作为正常对照。均根据临床特征、血常规、骨髓细胞形态学、组织化学、免疫表型、融合基因、染色体等检查确诊，符合国内白血病诊断、分型标准。其中AL患者，男46例，女34例年龄272岁，中位年龄岁。CML患者，男9例，女6例年龄2065岁，中位年龄岁。健康志愿者，男6例，女4例年龄1265岁，中位年龄岁。将研究对象分为初治组52例急性髓细胞白血病AML36例，急性淋巴细胞白血病ALL16例，完全缓解组CR组28例，CML组15例，正常对照组NC组10例。按PTPRO基因表达水平中位值分为高表达组和低表达组。方法治疗方案对于初治AML患者采用标准DA化疗方案阿糖胞苷、柔红霉素诱导缓解。AML患者采用全反式维甲酸ATRA或ATRA与三氧化二砷AS2O3合用或以ATRA为主，联合应用小剂量DA阿糖胞苷、柔红霉素、HA阿糖胞苷、高三尖杉酯碱方案诱导分化治疗。对于ALL患者选用化疗方案VDLP长春新碱、柔红霉素、强的松、左旋门冬酰氨酶。精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/8对于CML患者应用羟基脲和小剂量化疗加干扰素治疗。疗效判定参照血液病诊断及疗效标准1。骨髓单个核细胞MNC的分离所有AL患者于治疗前均采集新鲜骨髓液4ML以100U/ML的肝素抗凝肝素骨髓液14。用淋巴细胞分离液分离出MNC备用。CDNA合成取MNC1106细胞用TRIZOL试剂盒INVITROGEN公司提取细胞总RNA，用1琼脂糖凝胶电泳检测完整性，并用分光光度仪测定RNA浓度。MMLV逆转录酶、核糖核酸酶抑制剂RNASIN、DNTP、RANDOMPRIMER均购自美国PROMEGA公司。逆转录反应体系如下55L，DNTPL，RNASIN2L，MMLV6L，RANDOMPRIMER1L，RNA5G，用DEPC水补至25L反应条件为4250MIN,955MIN。目的基因引物的合成以GAPDH为内参照基因，引物由上海生物工程公司合成。见表1。表1RTPCR引物序列基因,引物序列SYBERGREENI荧光定量PCRPCR反应液组成PRIMER各1L，1L,2MASTERMIX10L，双蒸水补足至反应终体积20L。反应条件如下964MIN，然后3步反应9430S,5830S,7230S，进行40个循环，于每个循环的第3步7230S收集荧光信号。扩增完毕后，进入结果分析界面，以GAPDH为内参照基因，精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创5/8与对照组相比，得到目的基因表达的相对定量值RQ值，将RQ值用于统计分析。统计学分析应用SPSS统计软件，计量资料以XS表示，常规进行方差齐性检验、正态性检验，多组间比较采用单因素方差分析，两组间的比较采用独立样本T检验，计数资料采用2检验，P2结果4组中PTPROMRNA的表达水平的比较初治组低于CR组P，CR组低于NC组P。见表2。表2白血病患者及正常对照PTPRO基因表达水平基因表达水平高低与AL患者临床疗效的关系52例初治AL中无早期死亡病例，按照标准化疗方案治疗后达CR的患者有36例。PTPRO基因表达水平中位值为。根据中位值分为高表达组和低表达组，2组CR率差异无统计学意义P。见表3。表3PTPRO基因高表达组与低表达组缓解率比较3讨论PTPRO是PTP家族的成员之一，第一次发现于1994年，119THOMAS等2以家兔为模型寻找肾小球特异的蛋白时发现PTPRO，当时命名为肾小球上皮蛋白1，即GLEPP1。PTPRO是一类组织特异性表达的基因，主要表达于肾和脑3，高敏感的RTPCR发现该基因几乎存在与所有精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创6/8组织。PTPRO可能对人类肿瘤具有潜在的生长抑制能力，但要肯定它是一个真正的肿瘤抑制因子还需要更多的实验资料来论证。人们发现PTPRO具有肿瘤抑制因子的大部分特征，在多种肿瘤组织中被高度甲基化。已经证明PTPRO在肝癌、肺癌、结肠癌、慢性淋巴白血病中发现被甲基化而沉默47。PTPRO的表达水平变化还可能与乳腺癌的早期发生有相关性8。但是，目前对PTPRO基因在白血病中的研究处于起步阶段。本实验中PTPRO在AL患者初治组表达水平低于正常对照组，而缓解组患者表达水平升高。CML组PTPRO表达水平也明显低于NC组。提示AL及CML的发生可能与PTPRO的表达下降有关。化疗缓解后PTPRO基因水平升高仍未达到正常对照水平，提示AL的发病为多种因素、多个基因共同作用的结果。研究同时还进行了PTPRO基因表达水平高低与临床疗效的关系的比较。对52例初治AL患者根据中位值分为PTPRO高表达组与PTPRO低表达组，比较2组的首疗程缓解率，差别均无统计学意义，但这有待扩大样本例数进一步研究证实。总之，在AL的发病中存在PTPRO基因表达异常，为寻找AL发生、发展的特异性分子标志物、治疗靶点、预后评估提供依据。【参考文献】1张之南主编血液病诊断及疗效标准第3版北京科学出版社2008精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创7/82THOMASPE，WHARRAMBL，GOYALM，ET，ARENALGLOMERULAREPITHELIALCELLPODOCYTEMEMBRANEPROTEINTYROSINE，MOLECULARCLONING，ANDCHARACTERIZATIONINBIOLCHEM,1994,26919953199623KOTANIT，MURATAY，OHNISHIH，ETOFPTPROINTHEINTERNEURONSOFADULTMOUSEOLFACTORYCOMPNEUROL,2001,5181191364MOTIWALAT，GHOSHALK，DASA，ETOFTHEPROTEINTYROSINEPHOSPHATASERECEPTORTYPEOGENEPTPROBYMETHYLATIONINHEPATOCELLULAR,2003,22631963315MOTIWALAT，KUTAYH，GHOSHALK，ETTYROSINEPHOSPHATASERECEPTORTYPEOPTPROEXHIBITSCHARACTERISTICSOFACANDIDATETUMORSUPPRESSORINHUMANLUNGNATLACADSCI,2004ORIY，YINJ，SATOF，ETOFGENESUNIQUELY精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创8/8INVOLVEDINFREQUENTMICROSATELLITEINSTABILITYCOLONCARCINOGENESISBYEXPRESSIONPROFILINGCOMBINEDWITHEPIGENETICRES,2004,64243424387MOTIWALAT，MAJUMDERS，KUTAYH，ETANDSILENCINGOFPROTEINTYROSI