南海海绵化学成分的研究

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/9南海海绵化学成分的研究作者李小丽摘要本论文样品采集地于湛江近海海域，利用有机溶剂石油醚，三氯甲烷，正丁醇和乙酸乙酯提取海绵中的化学成分，用凝胶色谱GPC，气相质谱联用仪GC/MS，高效液相和液质联用仪等光谱技术进行鉴定，分析海绵含有的化学成分。实验结果表明，此次采摘的海绵中含有多种化合物，并确实了其中HEXANEDIOICACIDBIS2ETHYLHEXYLESTER、NHEXADECANOICACID、1,3CYCLOPENTANEDIONE、2,4DIMETHYL，1,2DITHIOLANE3PENTANOICACIDTETRADECANOICACID五种化合物，26种化合物的分子量，但还有多种物质还有待进一步分析。关键词海绵分离提纯化学成分0引言海绵中含有丰富的生物活性物质。海绵MARINESPONGE是属于动物界、海绵动物门SPONGIA的一类低等多细胞海洋生物。从海水、海底沉积土到海洋动植物,以及一些热泉涌、水热狭缝等,包罗万象的生态圈,造就了海绵共附生微生物一个复杂多样的群体,同时,产生了独特的有别于陆地微生物的多种具有生物活性的次级代谢产物。本研究利用海南丰富的海绵资源，从中筛选出化合物，通过精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/9色谱、光谱分析技术鉴定其结构特征，并分析其生物活性。有望筛选出结构与活性不同于其他海洋来源的化合物，为进一步开发新的海洋药物提供生物资源，具有非常重要的意义。1材料方法材料样品采集地湛江近海海域。样品处理从海水中采摘健康的海绵样品后，分别置于无菌塑料袋中，一般在2H内送回实验室处理，不能及时送回实验室的则放于冰盒内低温短时间保存。试剂与仪器三氯甲烷分析醇广州化学试剂厂产品正丁醇分析醇广州化学试剂厂产品乙酸乙酯分析醇广州化学试剂厂产品石油醚分析醇天津市福晨化学试剂厂产品10ML移液枪HP6890/5973MSD气相色谱质谱联用仪HPLC高效液相仪/氨基酸分析仪WATER2487DUALABSORBANCEDETECTORAGILENT1100ESQUIREHCT液质联用仪GPC凝胶渗透色谱仪分子量测试范围150270，000真空干燥箱DZX3型6020B宁波海曙赛福实验仪精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/9器厂实验方法化合物的提取分离海绵用无菌海水浸洗3遍，然后挤干，以去除表面附着物及夹带的海水微生物。用无菌剪刀进行解剖，用2ML甘油保存。实验时，用5ML95工业酒精浸取3次，每次24小时。提取物冷冻干燥成白色粉末后，将浓缩物分散于5ML水中，再用各2ML，石油醚分别提取三次，得可溶物5ML，再用极性逐渐增大的三氯甲烷，正丁醇，乙酸已脂以同样的方法提取三次，各得可溶物5ML，提取余相水溶物5ML。气相质谱联用仪测定有机相分别取200L用于气相质谱连用仪GC/MS进行测定分析。色谱条件为色谱柱HPFFAP30M,M,60C，4C/MIN150C，6C/MIN，250C，进样温度250C，载气HE，分流比801，柱流量M/MIN质谱条件为EI源，电离电压70EV，离子源温度230C，扫描范围40500AUM，进气量1L。高效液相色谱测定有机相冷冻干燥后用于高效液相及液质联用仪进行测定分析。高效液相分析仪条件为分离系统WATERS2695SEPARATIONSMODULE，色谱柱WATERSC18315MM，柱温255，流动相甲醇，水梯度洗脱，洗脱条件如表1。精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/9检测器WATERS2487DUALABSORBANCEDETECTOR，检测波长254NM，进样量6L，控制系统WATERSEMPOWER软件。供试品溶液配制正丁醇萃取液中加入800L甲醇，三氯甲烷提取物、石油醚提取物以及乙酸乙酯提取物中加入甲醇，混匀后以12000转的转速离心15MIN。取上层溶液待分析用。液质联用仪测定液质联用仪分析条件为仪器型号为AGILENT1100ESQUIREHCT，色谱柱C18，内径300MM，流动相甲醇水梯度洗涤，洗脱条件如表2。对水溶物做凝胶色谱分析，GPC的条件为示差检测器WATERS15152414，两根柱子串联型号分别是ULTRAHYDROGELTM120和ULTRAHYDROGELTM500，柱温55，检测器温度50，流动相水流速/MIN。凝胶色谱测定柱子型号ULTRAHYDROGELTM500、ULTRAHYDROGELTM120分子量范围10040万，双柱串联。填料葡聚糖。柱温55。流动相纯水。流动相速度/MIN。WATERS泵1515，示差检测器2414检测器50。2结果分析气相质谱联用仪GC/MS结果及分析正丁醇提取液分析图1。结果显示正丁醇提取液中含有4种化合物A出峰时间在处有一个化合物结构为HEXANEDIOIC精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创5/9ACID,BIS2ETHYLHEXYLESTER，分子量，分子式C22H42O4。B出峰时间在处有一个化合物结构为NHEXADECANOICACID，分子量，分子式C16H32O2。C出峰时间在处有一个化合物结构为1，3CYCLOPENTANEDIONE，2，4DIMETHYL，分子量，分子式C7H10O2。D出峰时间在处有一个化合物结构为1，2DITHIOLANE3PENTANOICACID，分子量，分子式C8H14O2S2。石油醚提取液分析图2。结果显示石油醚提取液中含有1种化合物TETRADECANOICACID。分子量，分子式C14H28O2。高效液相结果及分析图均已积分正丁醇提取液分析图3。石油醚提取液分析图4。三氯甲烷提取液分析图5。乙酸乙酯提取液分析图6。液质联用仪结果分析正丁醇提取液分析图7、8。分析结果有八个化合物存在，并占有一定含量。其中以6号化合物感应强度最大，且在一级质谱图中可以明显确定其分子量为MSM/SMMNA，见图9和图10。和背景化合物比较,可以确定为新的化合物。其他化合物由于现有条件无法做出更深一步的判断，待以后深入研究。同时，实验中曾改变紫外波长为210进行比较分析，但是最后由于波长210下的色谱和质谱比较重合性较差，所以选择波长外280的实验结果。但波长210下的分析数据可供参考，精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创6/9为以后进一步研究做参考。见图11。乙酸乙酯提取液分析图12、13。分析结果有四个比较明显的化合物存在，并占有一定含量。但化合物由于现有条件无法做出更深一步的判断，待以后深入研究。它们的质谱图如图1417。凝胶色谱结果及分析图1820分析结果表明水相中化合物有两大类，分子量大概在10，000左右和小于100的化合物存在，并占有相当大含量。但由于现有条件无法做出更深一步的判断，待以后深入研究。以下为凝胶色谱的标准图如图21分子量分别为277000、12900、1460、106。3讨论与小结本论文的研究工作主要取得以下结果以海绵为分离样品，采用多种分离技术分离得到多种化合物。结果表明，石油醚，三氯甲烷，正丁醇，乙酸乙酯分别能提取到有机化合物，而水相中也能得到化合物。以气相质谱联用仪分析技术分离得到HEXANEDIOICACID、BIS2ETHYLHEXYLESTER、NHEXADECANOICACID、1,3CYCLOPENTANEDIONE、2,4DIMETHYL，1,2DITHIOLANE3PENTANOICACID5种化合物。石油醚，三氯甲烷，正丁醇，乙酸乙酯提取液经高效液相技术分离共得到26种化合物。其中有些物质是重复的，说明很多化合物可能是同时溶于有机相或同时溶于其中某几项。同时也说明有些化合物的精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创7/9性能或结构是非常相似，在一定程度上比较难以分离，需改进技术或改变方法来进行深一步的研究试验。以液质联用仪分离技术分离得到12个不同分子量的化合物。其中以分子量为5656MSM/SMMNA的化合物可以确定为新化合物，因为在色谱库和相关文献中都没提及过该分子量的化合物。以后的研究工作将以此化合物为重点进行研究，相信通过更深入的分析鉴定，能确定该化合物的结果和特征。以凝胶色谱分析技术得到溶于水相中的化合物有两大类，分子量大约在10，000DA左右和小于100DA，两者都有相当高含量。根据现有条件，估计分子量小于100的化合物中可能有海绵中的一些小分子的酸和碱等化合物，当然也可能是实验的误差，使一些甘油未除尽，所以还有点甘油存在而分子量在10，000左右的化合物很可能是一些不易溶于以上4种有机溶剂的高分子聚合物，当然也有可能是提纯过程中留下的极小部分的细胞碎片。本研究利用该领域还未有人用气质联用仪，液质联用仪技术来互补分析海绵中的有机物成分，通过对有机相和无机相的分析，对海绵中的化合物分离提取是比较全面的。但是由于客观条件的限制，目前的研究结果中仍存在有未确定的化合物，例如水相中分子量在10，000左右的化合物和质谱中有显示而色谱中未能查到的化合物，及质谱中一些含量不高的小峰所代表的化合物作更深入的研究奠定精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创8/9了一定的基础。参考文献1WEISSMANBIOSYNTHESISUNDERSTANDINGANDEXPLOITINGMODULARITYPHILOSTRANSACTAMATHPHYSENGSCI,2004,3621825267126902PIELJ,HUID,WENPOLYKETIDEBIOSYNTHESISBYANUNCULTIVATEDBACTERIALSYMBIONTOFTHEMARINESPONGETHEONELLASWINHOEIPROCNATLACADSCIUSA,2004,1014616222162273HUJINFENG,ETALPLAKORTIDESIL,FOURNEWCYCLICPEROXIDESIDESFROMANUNDESCRIBEDJAMAICANSPONGEPLAKORTISSPHOMOSCLEROPHORIDA,PLAKINIDAETETRAHEDRON,2001,5746937993834ABRELLLM,BORGESONB,CREWSPCHLOROPOLYKETIDESFROMTHECULTUREDFUNGUSASPERGILLUSSEPARATEDFROMAMARINESPONGETETRAHEDRONLETT,1996,37142331223345MOFFITTMC,NEILANAFFILIATIONSWITHINTHESUPERFAMILYOFKETOSYNTHASESREFLECTCOMPLEXPATHWAYMOLEVOL,2003,564446576SCHIRMERA,GADKARIR,ETALMETAGENOMIC精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创9/9AN