两种方法检测hbsag假阳性和假阴性影响因素的探讨

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/6两种方法检测HBSAG假阳性和假阴性影响因素的探讨目前HBSAG的检测方法很多，但是在临床实验室检测HBSAG的方法最常用的主要是金标法和酶联免疫吸附试验（ELISA）。含HBSAG在内的乙肝两对半检测结果对升学、就业等都有着重大的影响，常常会有患者及其他工作人员反映HBSAG检验结果与其他医疗单位不一致，为此常会发生医疗纠纷。因此，提高HBSAG检测的准确性，避免假阳性和假阴性所造成的不良社会影响，是我们临床检验工作者应该重视的问题。为了减少HBSAG检测出现假阳性和假阴性，我们有必要对这种现象的原因进行分析，在实际的检测工作中，造成HBSAG检测出现假阳性和假阴性主要受以下因素影响，分述如下金标法假阴性原因检测时间短,金标法最适判读时间为1530分钟,若时间太短就会发生一些弱阳性HBSAG标本出现假阴性。灵敏度较低，金标法1NG/ML,而ELISA法1NG/ML也能检出。层析过快，HBSAGAB1AU还没来得及与B2结合就越过了检测线，这就可能造成假阴性结果。后带现象，即HBSAG的钩状效应。不管是ELISA法还精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/6是金标法，因反应原理均为“一步法”，所以当标本中HBSAG强阳性时两者均可出现后带现象，检验结果反而出现假阴性。个别标本可能存在HBSAG亚型差异而不易检出。金标法假阳性原因溶血或红细胞的标本，有时会在检测区出现一条颜色很浅的非特异型层析线，由于金标法主要是通过目视法判定结果，所以常会误认为假阳性，应该引起重视。为预防乙肝，部分HBSAG阴性人群在接种乙肝疫苗的12周内，血清中有时可检出HBSAG弱阳性，形成一过性HBSAG阳性，这可能是乙肝疫苗主要成分是HBSAG。建议接种乙肝疫苗后个月内不应做HBSAG检测。笔者曾多次发现此类因为注射乙肝疫苗出现的假阳性问题，但用ELISA一步法检测仍为阴性即可消除上述干扰，其机理尚未十分清楚。汉坦病毒会造成HBSAG金标法检测假阳性，可能是汉坦病毒与HBSAG存在交叉性，易造成假阳性结果。3ELISA法假阴性原因1标本用肝素或EDTA等抗凝处理易造成HBSAG检测结果假阴性，肝素抗凝血浆会增加D值,可能与高浓度肝素具有强大的负电荷,能吸附酶标记物不易洗脱有关；EDTA、酶抑制剂（如NAN3）可抑制LISA系统中的辣根过精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/6氧化物酶活性，造成假阴性。2标本保存不当,在冰箱内保存过久的标本,血清中IGG可聚合成多聚体、AFP可形成二聚体。标本放置时间延长（如一天以上），有时抗原或抗体免疫活性减弱，便出现假阴性。因此若采血后不能及时检测，5天内检测标本分离血清置于4。C冰箱内；超过5天不能检测的，应放在20。C低温冰箱中。低浓度HBSAG标本（弱阳性HBSAG）易受加样时间（特别是大批量标本）、试剂平衡时间、溶血程度的影响，出现假阴性。如加样时间在30分钟内的差异是最大的。高浓度HBSAG在ELISA一步法检测中易出现假阴性，即HBSAG的钩状效应。从原理来讲，一步法中HBSAG与包被板上的HBSAB及酶结合的BSAB结合是双向的，当HBSAG浓度过高时，HBSAG与包被板上的抗体及酶结合物中的抗体均是单向结合，不能形成抗体抗原抗体酶复合物，使酶标记抗体在随后的洗板中洗掉，从而显出阴性结果。但是在ELISA两步法中，高浓度的HBSAG只能与包被的HBSAB“饱和”地结合，多余部分被洗掉，随后加入的酶结合的HBSAB正好通过HBSAG的“桥梁”作用而结合在酶标板上，显示阳性结果。因此当HBSAG强浓度时用ELISA一步法检测存在假阴性现象。解决此问题的最好办法有精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/6对标本进行稀释；不单检测HBSAG；采用LISA两步法检测可消除漏检现象。由于慢性病毒携带者低水平HBSAG携带者或BV感染的潜伏期,HBSAG浓度低于检测水平的下限，由此造成假阴性。S基因突变导致HBSAG的氨基酸结构改变，由于多数商用试剂盒检测系统采用的为多克隆抗体检测HBSAG的A决定簇，这一区域的点突变即可导致临界观测值或阴性结果，造成假阴性。药物的影响高效价的乙肝免疫球蛋白会与HBSAG形成复合物，影响HBSAG的检出，所以一些HBSAG阳性的患者注射高效价乙肝免疫球蛋白后，HBSAG检测呈假阴性反应。用5M的盐酸处理标本1小时可提高HBSAG的检出率。ELISA法假阳性原因溶血或红细胞有国内报道酶免HBSAG试剂检测溶血标本时可造成假阳性，因红细胞破坏溶解时释放出大量血红蛋白，血红蛋白的亚铁血红素具有弱过氧化物酶活性，其作用效应与辣根过氧化物酶（HRP）类似，能与预包被抗体（AB）结合，一步法洗脱步骤往往难以完全洗脱，残留的过氧化物酶催化底物四甲基联苯胺（）产生假阳性。因此在采集血标本时，量不能太少，操作过程中如果血清混浊，一定要离心后再吸样，避免红细胞加入造成假精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创5/6阳性。对于溶血的标本最好重新采集血液，进行重新检测。标本凝集不全或标本离心处理时采用不同的离心转速和离心时间,也可造成假阳性结果。若在血液还未开始凝固时即强行分离血清，此时的血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；离心转速过低或离心时间过短，由于血液离心不充分均可导致假阳性。解决的办法最好是血液标本采集后放水浴箱，使其充分凝固再用3000RPM,离心5分钟再分离血清。干扰物质的影响如类风湿因子（RF）、补体、AFP等可以造成HBSAG检测结果假阳性。RF因子可与标记二抗的FC段结合造成假阳性；补体从C1Q活化，使一抗和酶标二抗的抗体分子发生变构，C的Q分子结合点暴露出来，则补体Q可将二者连接起来造成假阳性，采用6。C30分钟灭活补体可降低假阳性率；高浓度的AFP（如孕妇），在储存过程中可能形成二聚体会导致本底过深造成假阳性结果。某些细菌污染标本如表皮球菌等,菌体中可能含有内源性HRP，造成检测结果假阳性。综上所述，在进行HBSAG实验室检测时，为了最大限度地精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创6/6减少假阳性和假阴性结果的出现，在正确处理血液标本的基础上，原则上应该采取ELISA法进行初检,若为阳性,则用金标法进行复检,仍为阳性,则报告结果阳性；若为阴性，则用ELISA法进行