研究颜面赝复体粘接剂的体外细胞毒性

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/8研究颜面赝复体粘接剂的体外细胞毒性【摘要】目的利用体外细胞培养技术,对有机硅改性聚丙烯酸酯类颜面赝复体粘接剂1（FPSA1）的细胞毒性进行评价方法采用MTT法评价FPSA1的细胞毒性利用体外培养的小鼠肺成纤维细胞L929,在培养液中分别添加500，750ML/LFPSA1浸提液,于加样后2，4，7D用MTT法显色,用多道扫描酶标仪测A490NM值,计算相对增殖率,对FPSA1的细胞毒性进行评价结果随着时间推移,不同浓度的FPSA1浸提液对L929细胞增殖均无明显作用P,各浓度FPSA1浸提液加样后2，4，7D之间差异无统计学意义P,提示L929细胞增殖与浸提液浓度无明显相关性,FPSA1的细胞毒性分级为1级结论FPSA1无明显细胞毒性,具有良好细胞相容性,是一种有发展前景的颜面赝复体粘接材料【关键词】颜面部缺损；赝复体粘接剂；细胞毒性；MTT法0引言颜面赝复体的固位中组织倒凹和机械固位多用作辅助方式,种植体固位虽然是颜面赝复体首选的固位方式1,但由于多种原因使患者不能接受种植手术时,就需依赖粘接固位传统的赝复体粘接剂中,聚丙烯酸酯类粘接剂价廉,粘接强度尚可,但皮肤上的粘接剂残留较难去除2；有机硅精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/8类粘接剂粘接强度高,皮肤残留少,但含有机溶剂具有潜在刺激性3我们通过乳液聚合的方法合成有机硅改性聚丙烯酸酯类的颜面赝复体粘接剂1（FACIALPROSTHESISSKINADHESIVE1,FPSA1）,并参照国际标准化组织发布的医疗器械生物学评价标准,进行体外细胞毒性试验4,将小鼠肺成纤维细胞L929在离体状态下进行培养,以探讨FPSA1浸提液对L929细胞生物学活性的影响,评价其生物的相容性1材料和方法材料FPSA1第四军医大学口腔医学院与西北工业大学联合研制；无菌滤纸,高压蒸汽灭菌后备用L929细胞株（第四军医大学基础部免疫学教研室）；DMEM培养液美国GIBCO公司；含100ML/L的标准胎牛血清FBS,杭州四季青公司；100KU/L氨苄青霉素、100KU/L硫酸链霉素,PH；胰蛋白酶,四甲基偶氮唑盐MTT美国SIGMA公司；四甲基偶氮唑盐溶液,实验前用磷酸盐缓冲液PBS新鲜配制,浓度为5G/L,过滤除菌后4避光保存,1WK内使用二甲基亚砜DMSO,北京索莱宝公司；倒置相差显微镜日本OLYMPUSTH4200；超净工作台AIRTECH,苏净集团安泰公司；CO2培养箱HERACELL150,GERMANY；25CM2细胞培养瓶,96孔细胞培养板NUNC,丹麦方法精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/8浸提液制备将无菌滤纸裁成1CM1CM试样备用,按每面涂50L的粘接剂使滤纸浸渍均匀,清洁空气轻吹23MIN,待粘接剂由白色乳液变至无色透明胶膜,依照ISO1099312样品制备要求5,试样按表面积与浸提介质比6CM2/ML加入含100ML/LFBS的DMEM培养液中,另将未涂粘接剂的无菌滤纸作为阴性对照按同样比例浸于相同培养液,放置在37，50ML/LCO2培养箱内浸提72H,分别得到1000ML/LFPSA1浸提液和阴性对照组浸提液,过滤除菌再将1000ML/L浸提液经DMEM培养液稀释成500，750ML/L浓度浸提液备用细胞培养将对数生长期的L929细胞经ML/L胰酶消化、吹打分散后计数,用含100ML/LFBS的DMEM培养液配成浓度为1107/L的细胞悬液,按每孔100L的细胞悬液接种于96孔培养板上,放入37，50ML/LCO2培养箱中四周边缘孔不接种细胞,每孔加入100L的DMEM培养液,起边缘封闭作用测试细胞培养24H后弃去原培养液,用PBS洗涤2次,进行培养液交换,按每孔200L分别加入500，750ML/L的FPSA1浸提液,另设阴性和阳性对照组,分别加入等量无菌滤纸浸提液和含ML/L苯酚的培养液,每组重复6孔,常规培养,每日在倒置显微镜下观察细胞形态及增殖情况分精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/8别于加样后2，4，7D取出96孔板,在受试孔中每孔加入20L的MTT溶液,37，50ML/LCO2培养箱中保温4H后弃去旧液,每孔加入150L的DMSO,振荡10MIN,在多道扫描酶标仪上测A490NM值,计算细胞的相对增殖率RGRRGR实验组A490NM/阴性对照组A490NM100,细胞毒性分级按如下标准6评价RGR100为0级8099为1级5079为2级3049为3级029为4级统计学处理用统计分析软件,对数据采用方差分析和TUKEY多重比较检验2结果测定加样后2，4，7D,阳性对照组与其余各组的A值之间均有显著性差异P，表1；在各时相500ML/L和750ML/LFPSA1浸提液组的RGR均大于80,参照标准评分FPSA1的细胞毒性为1级,各组细胞RGR及毒性评级结果见表2表1FPSA1与对照组的A490NM值（略）BP提液检测其细胞毒性,对受试材料溶出物的毒性检测敏感性较高,也比较符合动物体内的毒性实验结果,是一种较好的体外评价生物材料细胞毒性的研究方法8L929细胞具有传代稳定、繁殖迅速、体外培养条件低、能为许多材料细胞毒性所共用等优点,成为细胞毒性试验中应用最早且精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创5/8使用最广泛的细胞A阴性对照组；B50ML/LFPSA1浸提液组；C750ML/LFPSA1浸提液组D阳性对照组图1倒置显微镜观察加样后7D各组L929细胞形态学变化100（略）我们采用500ML/L和750ML/LFPSA1浸提液进行MTT实验,以检测细胞毒性是否与材料溶出物有关,以及溶出物浓度与细胞毒性的剂量依赖关系,可以比较全面地评价FPSA1的细胞毒性经500ML/L和750ML/LFPSA1浸提液培养的L929细胞,在加样2，4和7D后,细胞RGR均在80以上,细胞毒性为1级,各浓度浸提液组之间RGR无显著差异,提示L929细胞增殖与FPSA1浸提液的浓度无明显相关，符合生物材料的医用标准与阴性对照组相比,750ML/LFPSA1浸提液组局部出现少量细胞溶解或坏死，这可能是由于在细胞毒性试验中,通常随着浸提液浓度的增加,细胞毒性也会相应增加的缘故9FPSA1为有机硅改性的聚丙烯酸酯类粘接剂,是用含双键的有机硅单体与丙烯酸酯单体,通过自由基引发的乳液聚合反应合成的在聚合反应过程中加入了离子型和非离子型的乳化剂,其中离子型乳化剂在制备粘接剂浸提液时可促进胶膜吸水溶解,使得粘接剂胶膜中残留的丙烯酸酯单体或其它助剂析出,从而表现出轻微的细胞毒性我们的结果精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创6/8提示在粘接剂合成过程中应尽量提高共聚单体功能团的交联程度即提高单体转化率,或采取相应措施以减少粘接剂中的单体残留，同时还应提高颜面赝复体粘接剂的耐水性能这一方面可通过提高聚合物中有机硅的含量来实现,另一方面可以在乳液聚合反应中使用反应型乳化剂以减少离子型乳化剂的使用量反应型乳化剂在乳化剂分子中含有能发生自由基聚合反应的双键,在反应时参与单体共聚,不以游离聚合物粒子形式存在,从而改善粘接剂的性能5,8综上所述，本研究采用MTT法评价细胞毒性,其结果显示FPSA1无明显的细胞毒性,具有良好的细胞相容性,是一种具有发展前景的颜面赝复体粘接材料【参考文献】1CHANGTL,GARRETTN,ROUMANASE,ETALTREATMENTSATISFACTIONWITHFACIALPROSTHESESJJPROSTHETDENT,2005,9432752802KIATAMNUAYS,GETTLEMANL,GOLDSMITHLJEFFECTOFMULTIADHESIVELAYERINGONRETENTIONOFEXTRAORALMAXILLOFACIALSILICONEPROSTHESESINVIVOJJPROSTHETDENT,2004,9232942983DAHLJE,POLYZOISGLIRRITATIONTESTOFTISSUEADHESIVESFORFACIALPROSTHESESJJ精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创7/8PROSTHETDENT,2000,8444534574ISO109935BIOLOGICALEVALUATIONOFMEDICALDEVICESPART5TESTSFORINVITROCYTOTOXICITYS20035ISO1099312BIOLOGICALEVALUATIONOFMEDICALDEVICESPART12SAMPLEPREPARATIONANDREFERENCEMATERIALSS20036TESTS/BIOLOGICALREACTIVITYTESTS,INVITROS20047郝和平医疗器械生物学评价标准实施指南M北京中国标准出版社,20001001018RICHARDSONRRJR,MILLERJA,REICHERTMWPOLYIMIDESASBIOMATERIALSPRELIMINARYBIOCOMPATIBILITYTESTINGJ