金银花中绿原酸提取工艺的优化 论文正文

毕业论文（设计）题目金银花中绿原酸提取工艺的优化指导老师专业班级生物技术及应用0701姓名学号2010年5月30日摘要采用正交实验设计方法，筛选一种金银花中的绿原酸提取工艺。研究主要利用微波与超声波技术，考察提取时间、温度、料液比及提取溶剂浓度对绿原酸提取效率的影响，然后运用极差分析方法优化提取工艺参数；研究结果表明，微波提取中PH值为4，提取时间3MIN，料液比120，乙醇浓度55为最佳提取条件；超声波提取中PH值为4，提取时间60MIN，料液比125，乙醇浓度55为最佳提取条件；两种提取方法提取率依次为986和862。从经济，效率等综合因素比较得出，微波提取法是一种比较好的提取方法。关键词金银花绿原酸正交试验设计微波提取法超声波提取法目录引言11材料与方法111实验材料112试剂113主要仪器114实验方法2141试验流程2142绿原酸标准曲线的建立2143微波提取法正交实验3144超声提取法正交实验42结果与分析521绿原酸标准曲线的绘制322微波提取法正交实验结果322超声波提取法正交实验结果53结论6参考文献7引言金银花为中医常用药，具有清热解毒、凉散风热的功能。全世界忍冬科植物约200种，我国有98种，广布于全国各地，而以西南部种类最多，其中可供药用的品种达47种。其主要活性成分为绿原酸，另外还有黄酮类、挥发油等活性成分。绿原酸具有抗菌、抗炎、抗病毒、保肝利胆等方面的药理作用，千年传统经验及近代药理实验和临床应用都证明金银花对于多种病菌有较强的抗菌作用和较好的治疗效果，因此对绿原酸的深入研究具有重要意义1,2。目前金银花中提取绿原酸的方法主要有五类水提法，醇提法，酶解法，超声波法，微波法3。本实验以金银花为材料，选用了微波提取法和超声波提取法，通过改变金银花的提取因素（时间，PH值，料液比，乙醇浓度），建立正交实验表，来确定最佳提取条件，并且比较了微波提取法和超声波提取法之间的优劣，为开发利用金银花中绿原酸资源提供科学依据4。1材料与方法11实验材料金银花（山东平邑）绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所）12试剂95乙醇，去离子水13主要仪器分光光度计（752N上海精密科学仪器有限公司）分析天平（SPS202F梅特勒托利多称重设备系统有限公司）冷冻干燥仪（12LD德国ALPHA）超声波清洗器（KQ500DA昆山市超声仪器有限公司）旋转蒸发仪（RE52AA上海亚荣生化仪器厂）真空泵（SHBIII郑州长城科工贸有限公司）粉碎机（XA1江苏金塘市江南仪器厂）14实验方法141试验流程根据试验设计方案，其实验流程如下金银花105烘干2H粉碎机粉碎超声波（微波）提取过滤定容稀释紫外检测计算提取率142绿原酸标准曲线的建立用分析天平精确称取绿原酸对照品00203G，以浓度为95的乙醇溶液定容于100ML棕色容量瓶中，作为母液。利用该母液配置一系列浓度的标准溶液，以浓度为95的乙醇溶液为参比，在324NM下测定其吸光度。以吸光度Y为纵坐标，标准溶液浓度X为横坐标，绘制标准曲线。143微波提取法正交实验在微波功率600，提取次数为两次的条件下，以PH值，提取时间，料液比，乙醇浓度为考察因素，每个因素选取3个水平，建立L934正交表5,6,7。表11试验因素水平表水平APH值B提取时间MINC料液比D乙醇浓度121115402421205536312570144超声波提取法正交实验在超声功频率40KHZ，电功率500W，40，提取次数为两次条件下，以PH值，提取时间，料液比，乙醇浓度为考察因素，每个因素选取3个水平进行设计，建立L934正交表8,9。表12试验因素水平表水平APH值B提取时间MINC料液比D乙醇浓度1230115402445125553660135702结果与分析21绿原酸标准曲线的绘制表21绿原酸标准曲线绘制绿原酸标准曲线Y00338X00087R2099920000100200300400500600700510152025绿原酸浓度UG/ML吸光数值A图21绿原酸标准曲线由图21得出，回归方程Y00338X00087，线性范围为3216G/ML，相关系数R09992。22微波提取法正交实验结果绿原酸浓度UG/ML32649612816吸光度值A01130231033304330556表22微波提取法正交实验设计表因素APH值B提取时间MINC料液比D乙醇浓度提取率实验11111855实验2122296实验31333972实验42123990实验52231984实验62312944实验731321006实验83213947实验93321956K12785280427462810K22917289728992910K32909287029662900优水平A2B3C3D2RJ0440011707300363见表22，用极差分析法对试验结果进行分析，从表中的RJ值可知，试验因素影响的大小料液比PH值乙醇浓度提取时间。比较各K值，得到优化水平为A2、B3、C3、D2，最佳组合为A2B3C3D2，即PH值为4，提取时间3MIN，料液比125，乙醇浓度55为最佳提取条件。表23微波提取法方差分析表因素偏差平方和自由度FCF005F001PH值03652097244608650提取时间00472012544608650料液比08482225844608650乙醇浓度02422064444608650误差8见表23，从方差分析可知，料液比的影响大于其它因素，但FC均小于F005和F001，可见提取因素对绿原酸的提取影响小，因此从经济高效等原因考虑，为节约时间，降低能耗，因此选用PH值为4，提取时间3MIN，料液比125，乙醇浓度55为最佳提取条件，提取率为986。23超声波提取法正交实验结果表24超声波提取法正交实验设计表见表24，用极差分析法对试验结果进行分析，从表中的RJ值可知，实验因素影响的大小乙醇浓度料液比提取时间PH值。比较各K值，得到优化水平为A2、B2、C3、D3，最佳组合为A2B2C3D3，即PH值为4，提取时间60MIN，料液比125，乙醇浓度55为最佳提取条件。因素APH值B提取时间MINC料液比D乙醇度提取率实验11111598实验21222884实验3133391实验42123894实验52231818实验62312805实验73132838实验83213839实验93321753K12392233022962169K22817259525312527K32484246825662697优水平A2B2C3D3RJ0417088309001760表25超声波提取法素方差分析表因素偏差平方和自由度FCF005F001PH值02802014544608650提取时间11712060644608650料液比14372074444608650乙醇浓度48432250644608650误差7738见表25，从方差分析中可知，乙醇浓度的影响大于其它因素，FC均小于F005和F001，可见提取因素对提取率影响小，因此从经济高效等原因考虑，为节约时间，降低能耗，因此选用PH值为4，提取时间60MIN，料液比120，乙醇浓度55为最佳提取条件，提取率为862。3结论微波提取法最优条件进行提取PH值为4，提取时间3MIN，料液比120，乙醇浓度55，提取率为986。超声波波提取法最优条件进行提取PH值为4，提取时间3MIN，料液比120，乙醇浓度55，提取率为862。通过综合因素比较，对于金银花中绿原酸的提取,微波提取法提取率高，省时，经济，是一种比较好的提取方法10。金银花为中医常用药，具有清热解毒、凉散风热的功能，其主要活性成分为绿原酸，具有抗菌、抗炎、抗病毒、保肝利胆等方面的药理作用。本实验对金银花中绿原酸提取方法进行了摸索，确定了一种比较好的提取方法，为开发利用金银花中绿原酸资源奠定了基础。参考文献1孙健,吴国娟绿原酸的研究进展J北京农学院学报,2009,2754562邢俊波,李萍,刘云绿原酸的研究进展J时珍国医国药,2002,1343463聂凌鸿,岳淼金银花中绿原酸提取工艺的优化J食品研究与开发,2008,2951544梁玉敏,王进美,李怀斌金银花中绿原酸提取工艺比较与优化探讨J辽宁中医杂志,2008,352622645史克莉,孔一凡正交法优选金银花微波提取工艺的研究J湖北中医学院杂志,2007,2954556刘志平,韩伟,李想金银花中绿原酸的微波辅助提取J华东理工大学学报自然科学版,2008,345435467余建平,林