北五味子质量优劣与总木脂素含量相关性的研究 论文

毕业论文题目北五味子质量优劣与总木脂素含量相关性的研究指导老师专业班级生物技术及应用071姓名学号2010年5月30日摘要本论文通过研究五味子中总木脂素的含量与人为质量优劣的相关性，提出根据五味子中的总木脂素含量对五味子的质量进行等级分级。采用用超声波法提取北五味子样品中总木脂素，以五味子乙素作为对照品选用分光光度法对不同批次的北五味子样品中总木脂素含量进行检测。结果发现，人为判定优等品五味子中的总木脂素含量均高于12，而劣等品五味子的总木脂素含量多数高于6。因此，在进行五味子等级分类时，应规定优等品五味子总木脂素含量不得低于12，而总木脂素含量低于6的五味子应该划入劣等品等级中。总木脂素含量介于两者之间的样品需结合水浸率、醇浸率以及其他指标进行分级。关键词北五味子；总木脂素；质量优劣等级；分光光度法目录引言11实验材料与仪器111实验材料112实验试剂213实验仪器22实验方法321北五味子中总木脂素分析方法的建立3211样品溶液的检测方法3212标准曲线的制备3213精密度试验3214重现性试验3215稳定性实验3216加样回收率实验322样品溶液制备及检测43结果与分析431总木脂素分析方法建立结果分析4311标准曲线制备结果分析4312精密度实验结果分析4313重现性实验结果分析5314稳定性实验结果分析5315加样回收率实验结果分析6316分析方法总结632五味子样品测定结果分析64结论8参考文献9引言木脂素LIGNANS是一类由两分子苯丙素衍生物C6C3聚合而成的化合物，大多呈游离态，也有与糖结合成苷存在于植物的树脂状物质中。可与变色酸反应成有色物质，遇浓硫酸能显色。五味子中的木脂素含量约占五味子的2813。目前常用方法有薄层色谱法4、分光光度法5,6、高效液相色谱法7、气质联用法及毛细管电泳法等。薄层扫描法多用于测定五味子乙素、五味子甲素和五味子醇甲等的定性检测。多数木脂素挥发性差，一般不采用气质联用法。毛细管电泳色谱分析方法的设备要求较高。而分光光度法和反相高效液相色谱法是目前最常用的方法。分光光度法采用变色酸显色后在570NM测吸光度，对照品有五味子乙素、五味子醇甲等。本实验以五味子乙素作为对照品选用分光光度法ECGRINE反应对不同批次的北五味子中总木脂素含量进行检测。1实验材料与仪器11实验材料五味子样品为采购时间、采购地点以及经人工判定质量等级不同的北五味子。共选取五味子30批，产地主要为黑龙江、吉林、辽宁等东北三省。经浙江省药检所有经验的药物鉴别人员鉴别分为三个等级。被分析的五味子对象具体编号情况如表1。表11五味子编号情况编号采购地采购时间等级1黑龙江2009年11月二等2黑龙江2009年11月三等3辽宁2009年11月三等4吉林2009年11月三等5吉林2009年11月二等6北潮2009年11月三等7磐安2009年11月一等8磐安2009年11月二等9磐安2009年11月三等10磐安2009年11月二等11磐安2009年11月一等12磐安2009年11月三等13磐安2009年11月二等14磐安2009年11月二等15吉林2009年11月一等16吉林2010年3月三等17吉林2010年3月一等18吉林2010年3月一等19黑龙江2010年3月一等20黑龙江2010年3月三等21辽宁2010年3月二等22黑龙江2010年3月三等23辽宁2010年3月二等24辽宁2010年3月一等25苍南2010年3月一等26苍南2010年3月二等27长白山2010年3月三等28长白山2010年3月二等29长白山2010年3月一等30长白山2010年3月一等12实验试剂硫酸分析纯，上海三鹰化学试剂有限公司甲醇分析纯，衢州巨化试剂有限公司去离子水娃哈哈有限公司变色酸化学纯，20051013，上海三爱思试剂有限公司五味子乙素117065200407，中国药品生物制品检定所制品13试验仪器电子分析天平梅特勒托利多AL204分析天平，称量范围0LMG200G752N紫外可见分光光度计石英比色皿超声波清洗器KQ100型超声波清洗器，昆山市超声仪器厂加热套（TC15套式恒温器，控温范围50200，浙江新医疗器械厂）150ML磨口具塞锥形瓶10ML的容量瓶20ML的具塞试管2实验方法21北五味子中总木脂素分析方法的建立211样品溶液的检测方法精确称取05G各批次北五味子粗粉过10目筛精密加入25ML甲醇后称重，超声处理30分钟，放冷加甲醇至原重，4000R/MIN离心取上清2ML用甲醇稀释至10ML的容量瓶中，摇匀后取02ML于具塞试管中，60的水浴挥干后依次加入05ML变色酸，35ML浓硫酸，摇匀后精确加入蒸馏水2ML，沸水浴30分钟，冷却后在570NM测吸光度。212标准曲线的制备五味子乙素储备液制备精密称取减压干燥至恒重的五味子乙素对照品82MG，加到10ML容量瓶中，用甲醇定容至刻度，超声溶解后作储备液于4下保存。取LML储备液用甲醇稀至10ML，然后分别取稀释液200L、400L、600L、800L、1000L、1200L于60的水浴挥干后依次加入05ML变色酸，35ML浓硫酸，摇匀后精密加入蒸馏水2ML，沸水浴30MIN，冷却后在570NM下测定吸光度。213精密度试验取212中的对照品溶液，按以上试验方法，重复取样测定6次，计算6次所得的相对吸光度的相对偏差。214重现性试验按211方法制备供试品六份，分别测定每份吸光度值计算总木脂素含量。215稳定性试验将标准溶液和供试液分别在20MIN，40MIN，60MIN，80MIN，100MIN，120MIN，150MIN进行测定，观察标准溶液和供试液在150MIN测定时间内吸光度的相对标准偏差。216加样回收率试验采用加样回收法，精取已知总木脂素浓度的五味子提取液样品，分别添加50MG/ML的五味子乙素对照品溶液1ML，按21所述方法进行测定，计算回收率。22样品溶液制备及检测按211方法对30批样品进行检测吸光度，计算总木脂素含量。3结果与分析31总木脂素分析方法建立结果分析311标准曲线制备结果分析根据212方法测定，以五味子乙素含量为横坐标、吸光度为纵坐标作图，得含量与吸光度关系标准曲线，见图31。Y00613X03985R2099520010203040506070809012345678MG图31五味子乙素作为木脂素对照品的标准曲线312精密度实验结果分析根据213方法测定，计算得RSD为013N6，见表31。表31标准溶液的精密度数据吸光度平均值RSD0625062706260626013062506250625313重现性实验结果分析根据214方法测定，结果其平均含量为4558MG/G，RSD344（N6），见表32表32样品制备中的重现性数据样品总木脂素含量（MG/G）平均值RSD样品14470样品24751样品34583样品44340样品54716样品644874558344314稳定性结果分析根据215方法测定，结果显示五味子乙素标准溶液和供试品溶液的总木脂素在测定时间的范围内0150MIN有较好稳定性。标准溶液和供试液150MIN内测定值RSD分别为091和348标准溶液和供试品的稳定性数据见表33和表34表33标准溶液的稳定性数据时间（H）吸光度平均值RSD20644406876068780686100649120652240653067302表34样品溶液的稳定性数据时间（H）吸光度平均值RSD207194072060774807761007731207222407230744384315加样回收率实验结果根据216方法测定，结果表明,回收率平均值为964，RSD为341，本法具有良好的回收率。见表35表35五味子乙素作为测定木脂素对照品加样回收率的数据样品检测量（G）加入量（G）加样回收率（）平均值（）RSD120382051006221142059703205620599742216205925521822059462171205944964341316分析方法结果总结采用五味子乙素作为对照品，变色酸法测定五味子中的总木脂素可以达到05年版中国药典的要求。样品中的总木脂素测定精密度的RSD为037，稳定性RSD为384，重现性RSD为344，平均加样回收率为964，加样回收率的RSD为341，总木脂素含量在164G到164G范围内与吸光度有良好的线性关系。该实验的测定方法可用于后面各样品中总木脂素含量的检测。32五味子样品测定结果分析根据22方法，对30种北五味子样品进行了总木脂素含量的检测，结果见表7。根据人工经验判别的30个样品中，其中一致认为编号为2、3、4、6、9、12、16、20、22、27号的样品为质量较差的一批，为三等样品。编号为7、11、15、17、18、19、24、25、29、30号的样品为质量较好的一批，为一等样品。但对编号为1、5、8、10、13、14、21、23、26、28号的样品质量辨识相对较难判断，归结为于二等品。归结为一等的10个样品的总木脂素含量除7号样品为625外，其余样品总木脂素含量均在10以上；而归结为三等的10个样品除3号样品的总木脂素含量为1189外，其余样品的总木脂素含量均低于10。而二等为较难判断等级的样品的总木脂素含量差别较大，高的28样品的总木脂素含量为4729，低的1号样品总木脂素含量为168。从结果来看，其中排位前11位药材中，含量大于12占8个。人工判别质量排位最靠后的11批药材中总木脂素含量小于6的占10个。表36经验鉴别样品的等级与样品中总木脂素含量的关系表等级编号总木脂素含量（）一等7625一等111612一等151218一等171613一等181966一等191713一等244524一等252728一等292362一等301046二等1168二等51834二等81708二等101230二等131128二等141121二等212261二等232452二等263070二等284729三等2220三等31189三等4553三等6511三等9480三等12382三等16218三等20321三等22157三等272124结论由于总木脂素具有一定生理活性，其含量在一定程度上可以反应五味子药材的质量优劣。且其判断结果与人工鉴别结果相差不大，根据已测定的三十批五味子样品，建议总木脂素含量作为评价五味子质量优劣的参考指标。建议优等品五味子样品的总木脂素含量不得低于12，而总木脂素含量低于6的五味子应该划入劣等品等级中。总木脂素含量介于两者之间的样品需结合其他指标进行分级。参考文献1李晓光,高勤等，五味子有效部位及其药理作用研究进展J中药材2005,2821561592宋万志,五味子科植物的木脂素类成分及生物活性与国内资源J天