GB 29687-2013 食品安全国家标准 水产品中阿苯达唑及其代谢物多残留的测定 高效液相色谱法

S G 中华人民共和国国家标准 9687 2013 食品安全国家标准 水产品中 阿苯达唑及 其 代谢物 多 残留 的测定 高效液相色谱法 in 电子版本仅供参考，以标准正式出版物为准） 2013布 2014施 中华人民共和国农业部 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 发布 I 目 次 目 次 . I 前 言 . 产品中阿苯达唑及其代谢物 多 残留 的测定 高效液相色谱法 . 1 范围 . 2 规范性引用文件 . 3 原理 . 4 试剂和材料 . 5 仪器与设备 . 6 样品的制备与保存 . 品的 制备 . 品的保存 . 7 测定步骤 . 、蟹类样品 . 鱼类样品 . 定 . 白试验 . 8 结果计算和表述 . 9 方法灵敏度、准确度和精密度 . 灵敏度 . 准确度 . 精密度 . 附录 A . 言 本标准的附录 A 为资料性附录。 本标准系国内首次发布的国家标准。 水产品中 阿苯达唑及 其 代谢物 多 残留 的测定 高效液相 色谱法 1 范围 本标准规定了水产品中阿苯达唑及代谢物（ 2苯达唑亚砜、阿苯达唑砜） 残留量检测 的 制样和 高效液相色谱测定方法。 本标准适用于水产品中阿苯达唑 及 代谢物 （ 2阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜 ）残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件， 其 随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本 标准。 准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写规则 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3016 水产品抽样方法 3 原理 试料中残留的阿苯达唑及代谢物，用 乙酸乙酯 提取，正己烷 除 脂 ， 乙酸乙酯反萃取 ， 高效液相色谱 外标法定量。 4 试剂和材料 以下所用试剂，除特别注明外均为 分析纯试剂，水为符合 6682规定的 一 级水。 盐酸 2苯达唑亚砜、阿苯达唑砜 和 阿苯达唑对照品 ： 含量 99%。 正己烷 ：色谱 纯。 乙腈 ：色谱纯。 甲醇 ：色谱纯。 乙酸乙酯 ：色谱纯。 二氯甲烷 ：色谱纯。 磷酸 十二水磷酸氢二钠 烷磺酸钠 ：色谱纯。 乙酸铵 20%甲醇溶液 ：取甲醇 80 水溶解并稀释至 100 乙酸铵溶液 ： 取乙酸铵 g， 用 水溶解并稀释至 1 000 庚烷磺酸钠 取磷酸 2.7 水混匀，加 庚烷磺酸钠 g， 用 水溶解并 稀释至 1 000 3%磷酸溶液 ： 取磷酸 水 溶解并 稀释至 100 磷酸氢二钠溶液 ： 取磷酸氢二钠 g， 用 水溶解并稀释至 100 3% 磷酸溶液调节 现配现用 。 100 g/苯达唑、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜和 2 备 液 ： 精密 称取阿苯达唑、阿苯达唑砜 和 阿苯达唑亚砜 各 10 及 盐酸 21.5 分别 于 100 瓶中， 用甲醇溶解 并 稀释至刻度 ，配制 成 浓度 为 100 g/标准贮备液 。 以下避光保存，有效期 3 个月。 合标准工作液： 分别 精密 量取 100 g/苯达唑亚砜、阿苯达唑砜 和 阿苯达唑标准储备液 适 量 ， 于同一量瓶中， 用 80%甲醇溶液 溶解并 稀释至刻度 ， 配 制成 浓度分别为 2g/阿苯达唑亚砜 g/阿苯达唑砜 g/及 阿苯达唑 g/混合 标准工作液 。 2 8 避光保存，有效期 1 个月。 5 仪器与设备 效液相色谱仪 ： 配荧光检测器。 析 天平： 感量 1 g。 平： 感量 g。 质机 心机 转蒸发器 吹仪 形瓶 ： 100 膜 ： 有机相 ， m。 6 试料 的制备与保存 料 的制备 取适量新鲜或冷冻的 鱼，去鳞、去皮，沿脊背取肌肉；虾，去头、去壳，取肌肉部分 。 绞碎， 并使 均质。 取均质后的供试样品，作为供试试料 。 取均质后的空白样品，作为空白试料 。 取 均质后的空白样品 ， 添加适宜浓度 的 标准 工作 液 ， 作为空白添加试料。 料 的保存 以下 保存 。 7 测定步骤 、蟹类 取 称取 试料 （ 2g， 于 50 乙酸乙酯 15 均质 30 s， 振 荡 5 4 000 r/心 10 取 上清液 于 100 形瓶中，残渣备用。另取一 50 加 乙酸乙酯 15 洗均质机 30 s， 洗涤液于 残渣中 ，振 荡 5 4 000 r/心 10 清液合并至 100 形瓶中，于 35 旋转蒸发至干， 用 20%甲醇溶液 1.0 脂 将上述溶液移入 10 向梨形瓶中加入正己烷 1 涤，正己烷转入离心管中，振 荡 1 4 000 r/心 5 弃 正己烷层 液 ，再加入正己烷 1 复操作两次 ，取下层液备用。 化 备用液 中加 磷酸 1 匀，加 二氯甲烷 1.5 合 1 4 000 r/心 5 二氯甲烷 液 于 10 心管中 ，再加 二氯甲烷 1.5 重复 提 取两次，合并 三次 二氯甲烷 液 于 10 心管中， 于 35 氮气吹干；用 磷酸氢二钠 溶液 1.0 余物 ，加 乙酸乙酯 2 合 1 4 000 r/心 5 乙酸乙酯 液 移入另一 10向 磷酸氢二钠 溶液中加 乙 酸乙酯 2 重复提取 两次，合并 三次 乙酸乙酯 液 ，于 40 氮气吹干，用 20%甲醇 .0 滤膜 过滤 ，供液相色谱 测定 。 基质 匹配 标准溶液的制备 称取 5份空白 试料 （ 2 g，于 50 分别加入 混合标准工作液 0、 10、 25、 100和200 L，混匀 ，按 提取、除脂、净化步骤 操作 ，基质标准溶液浓度分别为： 2、 g/苯达唑亚砜 0、 g/苯达唑砜 0、 g/苯达唑 0、 g/供高效液相色谱测定 。 以 测 得 峰面积为纵坐标，对应的标准溶液 浓度为横坐标，绘制标准曲线。 求回归方程和相关系数。 鱼类 提取 称取 试料 （ 2g， 于 50 乙酸乙酯 15 均 质 30s， 震荡 提取 5 4 000 r/心 10 取 上清液 于 100 形瓶中，残渣备用。另取一 50 心管加 乙酸乙酯 15 洗均质机 30 s，将此液倒入上述残渣中震荡提取 5 4 000 r/心 10 清液合并至 100 形瓶中，于 35 减压旋转蒸发至干，加入 20%甲醇溶液 1.0 除 脂 将上述溶液移入 10 向梨形瓶中加入正己烷 1 涤，正己烷转入离心管，震荡 1 4 000 r/心 5 除正己烷层，再加入正己烷 1 法重复操作两次。下层溶液过 m 有机相滤膜 ，供液相色谱 测定 。 混合基质标准溶液的制备 称取 5份空白 试料 （ 2g，于 50 分 别加 混合标准工作液 10、 25、 100和 200 L，混 匀 ， 按 提取、除脂步骤 操作， 基质标准溶液浓度分别为： 2、 g/苯达唑亚砜 0、 g/苯达唑砜 0、 g/苯达唑 0、 g/供高效液相色谱测定 。 以 测 得 峰面积为纵坐标，对应的标准溶液 浓度为横坐标，绘制标准曲线。 求回归方程和相关系数。 定 谱条件 色谱柱 ： 150 .6 粒径 5 m ） ， 或 相当者 。 检测波长：激发波长： 290 发射波长： 320 柱温： 30 。 流速 ： 1.0 mL/ 进样量： 30 L。 流动相：梯度程序（表 1）。 表 1 流动相 梯度洗脱程序 时 间 腈 % 甲醇 % 乙酸铵 % 0 8 82 0 17 43 0 20 30 0 20 30 0 8 82 0 8 82 测定 法 取试样溶液和相应的标准溶液，作单点或多点校准，按外标法，以峰面积计算 。 标准溶液及试样溶液中 阿苯达唑、阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜和 2应值应在仪器检测的线性范围之内。 在上述色谱条件下， 标准 溶液 和空白组织添加 试样 溶液 的高效液相色谱图分别见附录 A。 白试验 除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作 。 8 结果计算和表述 试料中阿苯达唑 及代谢物 残留量 （ g/ 按 下 计算。 1000 式中： X 供试 试料 中 相应的阿苯达唑及代谢物 残留量， g/ 基质标准溶液中 相应的阿苯达唑及代谢物 标准溶液浓度， g/ A 试样 溶液中 相应的阿苯达唑及代谢物 峰面积； 基质标准溶液中 相应的阿苯 达唑及代谢物 标准溶液的峰面积； V 样品定容体积， m 供试 试料 质量， g。 注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。 9 方法灵敏度、准确度和精密度 灵敏度 本方法 检测 限：阿苯达唑为 10 g/2g/苯达唑亚砜为 5 g/苯达唑砜为 g/ 本方法 定量 限：阿苯达唑为 25 g/2 g/苯达唑亚砜为 10 g/苯达唑砜为 1 g/ 准确度 本方法阿苯达唑在 25 500 g/2 在 5 100 g/阿苯达唑亚砜 在 10 200 g/苯达唑砜 在 1 20 g/平上的 回收率 为 70%110%。 精密度 本方法批内 相对标准偏差 15%， 批间相对标准偏差 15%。 附 录