茶叶多糖的抗氧化性初步研究 论文正文

毕毕毕毕业业业业论论论论文文文文（设计设计设计设计）题题题题目目目目茶叶多糖的抗氧化性初步研究指导老师指导老师指导老师指导老师专业班级专业班级专业班级专业班级生物技术及应用0701姓姓姓姓名名名名学学学学号号号号2010年年年年5月月月月30日日日日毕业论文（设计）第I页摘摘摘摘要要要要主要研究龙井陈茶中茶叶多糖抗氧化活性效果。方法从绿茶叶中提取纯化了茶叶多糖，研究了不同浓度的茶叶多糖对O2自由基、有机自由基DPPH的清除作用。结果浓度为11557MG/L的茶叶多糖的清除率为50。而茶叶多糖对DPPH自由基的清除能力要略低于10相同浓度的抗氧化剂BHT溶液。结论实验仅对茶叶多糖的抗氧化能力进行简单分析，为茶叶多糖的利用提供一点参考意义。关键词关键词关键词关键词茶叶多糖；超氧自由基；DPPH自由基；抗氧化活性毕业论文（设计）第II页目目目目录录录录引言11材料与方法211材料2111实验原材料及试剂2112实验仪器与设备212方法2121实验试剂的配制2122茶叶多糖的制备313抗氧化活性研究3131清除O2自由基能力的测定3132清除DPPH自由基能力的测定32结果与分析421茶叶多糖对O2自由基的清除能力522茶叶多糖对DPPH自由基的清除能力53总结与讨论6参考文献8毕业论文（设计）第1页引言O2自由基的化学性质很活跃，能够攻击细胞膜上的脂肪酸，这种物质是毒性很强的一种物质，它会侵害体内的核酸、蛋白质等等而引起一系列的细胞破坏作用，人体内氧自由基积累越多，衰老的进程就越快。DPPH自由基是一种很稳定的氮中心的自由基，该品具有刺激性，吸入、口服或皮肤接触都有害，能够使人体衰老。O2自由基和DPPH自由基常用于抗氧化成分的体外抗氧化性评价。抗氧化剂是阻止氧气不良影响的物质。它是一类能帮助捕获并中和自由基，从而祛除自由基对人体损害的一类物质。饮食中抗氧化剂长期以来倍受国内外学者关注，这是因为食物中抗氧化剂能够保护食物免受氧化损伤而变质；在人体消化道内具有抗氧化作用，防止消化道发生氧化损伤；吸收后可在机体其他组织器官内发挥作用；来源于食物的某些具有抗氧化作用的提取物可以作为治疗药品。抗氧化剂的作用机理包括鳌合金属离子、清除自由基、淬灭单线态氧、清除氧、抑制氧化酶活性等。多糖作为来自高等植物、动物细胞膜、微生物细胞壁中的天然大分子物质，是构成生命的四大基本物质之一，具有多种生物活性，与维持生物机能密切相关。近20年来，由于生物学、化学等学科的飞速发展，人们对多糖及其复合物的活性作用有了越来越深入的认识，多糖在抗肿瘤、抗炎、抗病毒、降血糖、抗衰老、抗凝血等方面发挥着重要的生物活性作用1。茶叶多糖是从茶叶中提取出来的具有多种生物活性且结构复杂的杂多糖或其复合物。茶叶起源于中国，是一种深受人们喜爱的健康饮品。饮茶有许多益处，这是众所周知的。但饮茶为什么会有许多好处呢这对一般人来说，是知其然而不知其所以然。茶叶自古就享有养生之誉并且是在中国古代文献中被提及的最早的天然药物之一。茶叶可以作为一些有毒草药的解毒剂,在药物知识中，其中就有这样的记载“神农尝百草，日遇七十二毒，得荼而解之”。随着科学的发展，到了19世纪初，茶业的成分才逐渐明确起来。其中的有机化学成分和无机矿物元素含有许多营养成分和药效成分。茶多酚、茶色素、咖啡碱等生理活性成分已研究较多，而茶叶多糖的研究则相对较少。随着对多糖研究的日毕业论文（设计）第2页益深入，特别是发现茶叶中降血糖的有效成分是水溶性组分中的多糖复合物以来，茶叶多糖的研究就引起了人们的极大关注，国内外学者对其进行了较为广泛的研究2。本文研究了已纯化并鉴定其单糖组成的茶叶糖蛋白对O2自由基、DPPH自由基的清除作用的研究，以此来评价该糖蛋白的抗氧化能力，其结果可为该天然抗氧化产品的开发研究提供相关依据。1材料与方法11材料111实验原材料与试剂龙井陈茶购于杭州茶叶市场三羟甲基氨基甲烷（TRIS），盐酸，甲醇，甲苯，邻苯三酚，1，1二苯基苦基苯肼DPPH，95乙醇，蒽酮，浓硫酸，氯化钠均为分析纯；BHT抗氧化剂，抗坏血酸为生物制剂。112实验仪器与设备仪器及设备仪器及设备仪器及设备仪器及设备型号型号型号型号制造商制造商制造商制造商真空泵SHZD上海豫华仪器有限公司；层析柱2670CM上海亚荣生化仪器厂；水浴锅HHS2浙江海宁新华医疗器械厂电子天平JT余姚市金诺天平仪器有限公司旋转蒸发仪SHZD上海豫华仪器有限公司冷冻干燥仪12LD德国ALPHA紫外分光光度计UV2000尤尼柯仪器有限公司蠕动泵BT1100E上海琪特分析仪器有限公司核酸蛋白自动测定仪SHQT6A上海琪特分析仪器有限公司；12方法121实验试剂的配制毕业论文（设计）第3页TRISHCL缓冲溶液（PH为82）50ML01MOL/L三羟甲基氨基甲烷（TRIS）溶液与229ML01MOL/L盐酸混合并稀释至100ML；浓度为2G/L的蒽酮硫酸溶液将02G蒽酮溶于100ML浓硫酸中；浓度为01MOL/L的NACL溶液将0585GNACL溶于585L蒸馏水中；DPPH溶液称取少量DPPH溶于少量的甲苯溶液，用50乙醇配成01G/L溶液。122茶叶多糖制备茶叶多糖提取准确称取300G茶叶以16的蒸馏水，70，40MIN浸提2次过滤，合并滤液得3L滤液浓缩至1L加入3倍量的95乙醇沉淀粗多糖沉淀物。茶叶多糖的纯化溶解茶叶粗多糖的沉淀物上凝胶色谱柱，以01MOL/L的NACL为洗脱液洗脱，洗出液通过自动收集仪以15ML/MIN的流速每6MIN逐管收集并逐管检测620NM（多糖的蒽酮硫酸显色）和280NM（蛋白）处的吸收，收集相应组分。样品干燥洗出液浓缩（90转/分，浓缩至溶液1/3）冷冻干燥（56）茶叶多糖。13抗氧化活性研究3,4131清除O2自由基能力测定5,6茶叶多糖抗氧化溶液配制在10ML容量瓶中加5MLTRISHC1缓冲液，然后分别加入10MG/L、25MG/L、50MG/L、75MG/L、100MG/L、125MG/L的质量浓度的茶叶多糖溶液。抗坏血酸溶液的配制在10ML容量瓶中加5MLTRISHC1缓冲液，然后分别加入10MG/L、25MG/L、50MG/L、75MG/L、100MG/L、125MG/L的抗坏血酸溶液。在25恒温水浴中放置20MIN后，加入01ML的25预热过的邻苯三酚溶液，迅速混匀，在5MIN内，每隔30S在420NM处测定溶液的吸光度。计算吸光度随时间的变化率，并与空白液比较，便可得出被测物抑制O2积累作用的能力。清除率计算式清除率F0FX/F0100式中F0和FX分别表示空白溶液和被测液的吸光度随时间的变化率。132清除DPPH自由基能力测定7,8毕业论文（设计）第4页茶叶多糖的DPPH溶液配制将01ML5000MG/L的茶叶多糖溶液加入5MLDPPH溶液中，迅速混匀。BHT的DPPH溶液配制01ML5000MG/L的BHT溶液加入5MLDPPH溶液中，迅速混匀。在10MIN内，每隔1MIN在525NM处测定溶液的吸光度，计算吸光度随时间的变化率。抗氧化能力AAA1/A100式中，A1为样品吸光度随时间的变化率，A为对照组50MG/LBHT甲醇溶液吸光度随时间的变化率。A1或A的计算方法在10MIN内，以时间为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，得到线性曲线。2结果与分析9,1021茶叶多糖对O2自由基的清除能力按131所述方法，分别做了不同质量浓度的茶叶多糖和抗坏血酸对O2自由基的清除作用，超氧自由基清除率对比差异见表21、图21。表21茶叶多糖与抗坏血酸对超氧自由基清除率对比质量浓度MG/L茶叶多糖清除率（）抗坏血酸清除率（）1043315612510813901502163782575324411719100446715625125541319531毕业论文（设计）第5页图21茶叶多糖及抗坏血酸对O2自由基清除效率曲线图试验中以对O2自由基有较强清除作用的抗坏血酸作对照，从图1中可以看出，对O2自由基产生50清除效应所需的抗坏血酸的质量浓度为3204MG/L，而在同样清除率的情况下，茶叶多糖所需的质量浓度是11557MG/L，这说明了该多糖在体外可以清除O2自由基，具有直接清除超氧自由基的抗氧化活性，但其抗氧化能力要比抗坏血酸低得多。22茶叶多糖对DPPH自由基的清除能力众所周知，BHT是食品工业中常用的抗氧化剂，本试验采用BHT对DPPH自由基的清除能力作为茶叶多糖对DPPH自由基的清除能力的对照。按132所述方法，分别研究了不同质量浓度的茶叶多糖对DPPH自由基的清除作用和5000MG/L的BHT溶液对DPPH自由基的清除能力，所得结果可见表22。05010015020025010255075100125质量浓度（MG/L）清除率茶叶多糖抗坏血酸毕业论文（设计）第6页表22茶叶多糖对DPPH自由基动态抗氧化能力时间吸光度BHT甲醇溶液茶多糖溶液50MG/L1500MG/L3000MG/L0108208910710抗氧化能力/吸光度11021644/0853229/069620980756/0822390/068030960300/0816250/067540935280/0809200/067050913227/080445/066960869182/079645/066770823152/078965/066480774102/077961/0661茶叶多糖的抗氧化能力随时间变化趋势见下图22从计算结果及图22的比较可以清楚地看出，茶叶多糖溶液对DPPH自由基的清001020304050607080246810时间（MIN清除率1500MG/L茶多糖溶液3000MG/L茶多糖溶液毕业论文（设计）第7页除能力略低于相同质量浓度的BHT溶液。同时，茶叶多糖的抗氧化能力随时间的变化有所波动，先呈上升趋势，然后下降，最后趋于平稳。由此可见，茶叶多糖溶液对DPPH自由基有较好的清除能力。3总结与讨论11，12试验以抗坏血酸和茶叶多糖溶液的清除率来进行比较，结果表示，O2自由基产生50清除效应所需的茶叶多糖的质量浓度为11557MG/L，这表明茶叶多糖在体外可以清除O2自由基。但其清除率和抗坏血酸相比要低得多。因此，茶叶多糖具有清除O2自由基的能力，但这个清除能力和抗坏血酸相比来说就不是很强。试验通过采用BHT对DPPH自由基的清除能力作为茶叶多糖对DPPH自由基的清除能力的对照试验，结果可以表明，茶叶多糖对DPPH自由基的清除能力比BHT抗氧化剂对DPPH自由基的清除能力要低10左右。同时通过数据和图谱可以发现茶叶多糖的抗氧化能力随着时间的变化会有所波动。通过文献查找，可以发现不同地区的茶叶种类和茶叶的新，陈程度对茶叶多糖的提取和抗氧化能力都有所不同的。一般情况下，陈茶中的多糖含量比新茶中多，所以陈茶的抗氧化能力比新茶强，因此建议大家饮用陈茶。通过以上两个对照试验我们可以清除了解茶叶多糖的抗氧化能力的强弱与茶叶多糖的浓度有关12。同时说明了茶叶多糖在抗衰老，抗炎症等方面有一定的作用。毕业论文（设计）第8页参考文献1王健,龚兴国多糖的抗肿瘤及免疫调节作用研究进展J中国生化药物杂志,2001,22152542谢明勇,聂少平茶叶多糖的研究进展J食品与生物技术学报,2006,2523聂少平,谢明勇,罗珍茶叶多糖的抗氧化活性研究J天然产物研究与开发,2005,1755495524申明月,聂少平,谢明勇,罗珍茶叶多糖的糖醛酸含量测定及抗氧化活性研究J,天然产物研究与开发,2007,198308335朱利娜,强伟,史俊友等唐古特白刺果粉的抗氧化作用研究J中国野生植物资源,2010,29282856倪德江,陈玉琼,谢笔钧等绿茶、乌龙茶、红茶的茶多糖组成、抗氧化及降血糖作用研究J营养学报,2004,26157607程超,李伟几种植物水溶性多糖