[生物医药论文精品]基于微量量热法的清开灵注射液质量一致性和稳定性初步研究

1基于微量量热法的清开灵注射液质量一致性和稳定性初步研究【摘要】目的研究清开灵注射液作用于金黄色葡萄球菌的生物热活性指纹图谱，探索清开灵注射液质量的生物活性评价新方法。方法采用微量量热法，在合适测试浓度下，分别测定各清开灵注射液样品生物热活性指纹图谱，并进行定性、定量分析。结果不同厂家及同厂家不同批次清开灵注射液样品的生物热活性指纹图谱相似度及热动力学参数存在不同程度差异，一个过期样品亦可被区分。结论该方法简便可靠，可为清开灵注射液的质量控制提供参考，为从活性角度研究中药注射液的质量一致性和稳定性提供了一种很好的思路。【关键词】微量量热法；清开灵注射液；金黄色葡萄球菌；生物热活性指纹图谱；一致性；稳定性INVESTIGATIONOFCONSISTENCYANDSTABILITYOFQINGKAILINGINJECTIONBASEDON/BYMICROCALORIMETRYABSTRACTOBJECTIVETOINVESTIGATETHEBIOACTIVITYFINGERPRINTOFQINGKAILINGINJECTIONONSTAPHYLOCOCCUSAUREUS,ANDTOSEARCHNEWMETHODFOREVALUATINGBIOACTIVITYOFQINGKAILINGINJECTIONMETHODSTHEBIOACTIVITYFINGERPRINTSOFDIFFERENTQINGKAILINGINJECTIONONSTAPHYLOCOCCUSAUREUSWEREDETERMINEDBYMICROCALORIMETRY,ANALYZEDQUALITATIVELYANDQUANTITIVELYANEXPIREDSAMPLEWASALSODISTINGUISHEDRESULTSTHESIMILARITYANDTHERMOMECHANICALPARAMETERSWERESOMETHINGDEFFRENCEOFQINGKAILINGINJECTIONFROMDIFFERENTFACTORIESANDDIFFERENTBATCHESCONCLUSIONTHERESULTSHOWEDTHATTHISMETHODISSINGLE,PRACTICABLE,ANDRELIABLEASAREFERENCEMETHODFORTHEQUALITYCONTROLOFQINGKAILINGINJECTIONANEWDIRECTIONWASPROVIDEDFORINVESTIGATINGCONSISTENCYANDSTABILITYOFTRADITIONALCHINESEMEDICINEINJECTIONKEYWORDSMICROCALORIMETRYQINGKAILINGINJECTIONSTAPHYLOCOCCUSAUREUSBIOACTIVITYFINGERPRINTCONSISTENCYSTABILITY清开灵注射液组方源于中医治疗急性热病传统处方“温病G989G4465G257中的G4445G4479G10287黄G1036。G11013G13978G18252、G10494G2447G8699G13978G18252、G8712G10287角G708G12893G709、黄G14461G14539、G10657G10676G8609G708G12893G709、G7636G4388、G7507G15025G7693、金G19146G14469G12573组G6116。1992G5192G3999清开灵注射液被G6931G5232医药G12661G10714G18108G19388指定为G1852G3281中医医G19510急G16798G708G12197G709G4472G5529G3803的中G6116药，G1867G7389清热G16311G8614、G2282G11204G17902G13488、G18278G12082开G12385的作2用，用于热病G12082G7139，中G20130G1571G11263，G12082G5547不清G12573G11163。清开灵注射液生G1147厂家G1259G3822，G8712G5191参差不G21796，质量G20652G1314不一，G2164G1055G1866组方、生G1147G5049G14414G3809G7446，G1363G5483G11458G2081的质控方法G18129G19602G1209G7389G6940G1457G16789清开灵注射液的质量。2006G5192，SFDAG5062G19036G4557中药注射液的活性评价G1582了相关G16280定1。中药质量生物控制G5062G6116为中药质量控制研究G2469G4649的G17247G21952。G1306G7171G11458G2081G17837方G19766的研究相G4557G15192G5381，G7389关方G19766的G6265G17959G7368G7171G4581G1055G2460G4581。G13479合G2081期研究3,4，G6117G1216提G1998从质量一致性、稳定性G1998G2469，G1209清开灵注射液的G6245菌活性为G11540G11536G9869，采用微量量热法，G1209生物热活性指纹图谱及热动力学参数定性定量的G15932G5461清开灵注射液的质量，为从活性角度评价清开灵注射液进行了G7389G11422G4593试，亦为G1457G19568清开灵注射液的G4445G1852G1363用提供参考。1实验仪器及材料11实验仪器G4466G20576G1214G3132采用G10802G1868THERMOMETRIC公司G1147的LKB2277生物热活性检测系统，LKB2132蠕动泵。G4466G20576时系统控温37。G7389关G1214G3132的G13479构原G10714见文献5,6,7。12实验材料金黄色葡萄球菌CCTCCAB910393G11013武汉大学中G3281G1868型培养物G1457藏中心提供。培养基为LB培养基取蛋白胨10G，酵G8609G128935G，氯G2282钠5G，溶于1000ML蒸馏G8712中，PH72，分装后于121G20652压蒸气灭菌20MIN，置4冰箱中G3803用。清开灵注射液样品系A、B两个大厂家提供，G1866中A厂家样品选择了G1457质期内各时间段的样品及一个过期样品。G1867体见G159321。G159321清开灵注射液样品一览G15932A1A2A3A4A5A0A6A7A9A8A10A11A13A12A11A15A16A17A18A19AS1811601200855201054A20A14A11A21AS2712604A20078312009830A20A14A11A21AS3710510A2007210200929A20A14A11A21AS4612407A2006101920081018A20A14A11A21AS5611307A200662200861A23A22A24A11AS6510605A20052252007224A26A24A11BS7700930200793020108AA20A14A11A21BS807112020071120201010EA20A14A11A213BS907121920071219201011DA20A14A11A21BS10080104200814201012DA20A14A11A212方法与结果21实验方法采用停流法检测。测定G2081分别用适量01MOL/LNAOH、01MOL/LHCL、75乙醇溶液和无菌G8712清洗G12661G17959和流G17902池，待G1214G3132G5483到稳定的基线后，用蠕动泵G120950ML/H的流速，将菌液和清开灵注射液混合液泵入微量热计中，当样品充满流G17902池后停泵，启动采集卡开G3999采集数据，跟踪记录流G17902池内细菌生长的G1147热曲线G708PT曲线G709，当采集的数据重新回到基线后，G4466G20576G13479束8。G7693据G4466G20576要求，将一定量的清开灵注射液G2164入到接种了金黄色葡萄球菌的培养液中，G1363菌含量为2106CELLS/ML，用振荡G3132混匀，G1209G3803进样。整个过程为无菌操作。22结果与讨论221金黄色葡萄球菌的生长热功率输出曲线图1金葡菌完整代谢曲线图1G717137下，停流法测定的金黄色葡萄球菌完整代谢曲线。曲线AG708PT曲线G709G7171所测定的细菌生长曲线，可G1209分G6116四个阶段停滞期、指数生长期、稳定期和衰亡期。分别G4557应于细菌G4557培养基中不同营养G6116分的利用情况及不同的代谢过程。采用指数生长模型G4557金黄色葡萄球菌的生长曲线进行线性拟合9，4LNPT/P0KT，则G5483到曲线BG708LNPT曲线G709，显示了金黄色葡萄球菌热功率输G1998随时间的变G2282特G5461。图中直线C即为指数生长期生长速率常数K的直线。222清开灵注射液“量效”关系考察图2金葡菌浓度梯度图用S8样品分别考察了0200L的8个浓度梯度的G6245菌活性，线性关系良好，当剂量到200L时，金葡菌生长曲线G5062严重变形，不G1889适用于指数生长模型，见图2曲线A。G11013图谱及参数分析，G2469G10628在一定G14551G3272内G7080150LG709，随清开灵注射液剂量G3698G2164，金黄色葡萄球菌生长曲线整体G2588“下G19489、后G5322G257G17247G2195；细菌指数生长期速率常数K、G7380大热功率P1、G12544一指数生长期G2469热量Q1、稳定期G7380大热功率P2G3355相应G1955G4579，G12544一指数生长期G17810G4804时间T1、稳定期G17810G4804时间T2、稳定期G2469热量Q2、G5647G2469热量QTG3355相应G3698大，G1000G3355G994剂量G6116G17751好的线性关系G708R分别为0994、0989、0983、0991、0985、0989、0998、0997G709。223不同清开灵注射液样品生物热活性指纹图谱初步分析2231相似度分析在G1209G990系G2027浓度中，选择和G12366白相G8616参数变G2282G17751大，G1306图谱不G2469生G7138显变形的浓度G70850LG709，测定了清开灵注射液不同样品作用于金黄色葡萄球菌的生长曲线。采用G2533量G1325角法G4557不同样品生物热活性指纹图谱进行相似度分析，G11842G16760了3个G1861G7389G4804A、B、C，G13479G7536见G159322、图3。G159322不同清开灵注射液生物热活性指纹图谱相似度分析A25A27S1S2S3S4S5S6S7S8S9S105A28A29A30S0906088108770862086008680988098709880989图3清开灵注射液相似度分析G947A指数生长期C稳定期BG7422G117052232生物热动力学参数分析提取清开灵注射液各样品生物热动力学参数。G1867体参数见G159323。G159323清开灵注射液生物热活性指纹图谱生物热动力学参数G708XS，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合分析，G15441G9994清开灵注射液剂量G994参数T1、P1、Q1、K、T2、P2、Q2、QTG3355G7389G17751好的线性关系，G1306指数生长期生长速率常数K和G5647G2469热量QTG7368G14033G15932G5461药物作用于细菌随时间生长变G2282特G5461和G5647体特G5461，G6937选K、QT作为基G7424评价参数。6G1209样品G13546G2507为G3252G13044变量，热动力学参数K、QT为G3252变量，进行G2345G3252G13044方差分析G708ANOVAG709，组间G7389显G14891性差异G708P005G709。提示清开灵注射液各样品间G7389一定的差异。见G159324。G159324G2345G3252G13044方差分析G708ANOVAG709SUMOFSQUARESDFMEANSQUAREFSIGKBETWEENGROUPS1369015104071000WITHINGROUPS00640000TOTAL14249QTBETWEENGROUPS500165329555739288169000WITHINGROUPS25212504063031TOTAL52537783492233G13520合G13870G12879分析G1209生物热活性指纹图谱相似度S、参数K、QT进行G3822指G7643G13870G12879分析，见图4。图4不同清开灵注射液样品G13870G12879分析所G7389样品G20330G1820被区分为两大G12879，G1866中S7S9S8S10被G13870为一G12879，为B厂家样品；S1S4S5S2S3S6被G13870为一G12879，为A厂家样品，G3355G994G4466G19481相G12538。样品S6为过期样品，可G994同厂家G1866G1194样品区分，G20576G16789了方法的可靠性。样品S5G1032G17829G1457质期，G1866生物热活性指纹图谱G17751G1457质期内G1866G1194样品G7389一定的差异，G16840G7138A厂家清开灵注射液G1032G17829G1457质期时，G6245菌作用G5062G2469生一定的变G2282，提示质量G2469生了G6925变。224讨论2241微量量热法G7171基于生G2282G2465应中G7234G17953存在的热G1144G6454G13792G5326G12447的，G14033G4466时、在线、动G5589、量G2282G3332G2465应微生物生长代谢过程中的动G5589整体G1461G5699，可提供G1867G7389G17751G5390G999G4658性特G5461的G1120G13512G1461G5699，G1866热谱曲线G7424G17535即可作为“指纹图”直接G1852G19766的G2465G7156微生物生长代谢过程中热量变G2282的整体特G5461，从G13792G7389G6940的G5369G15929了常G16280方法G1461G5699G2345一的7不G1728710。2242G7424研究在样品选择时考G15397了不同厂家、不同批次、G1457质期内不同阶段及过期样品，G1867G7389G17751G5390的代G15932性，可G15932G5461清开灵注射液质量一致性、稳定性。2253G7424研究应用G2533量G1325角法计G12651生物热活性指纹图谱的相似度，在原G7389的参数定量分析基G11796G990G1582到了G7094定性G2460定量，完G2904了生物热动力学谱图分析，为生物热动力学图谱及参数的G12197学分析提供参考。2244相同G7477G1226下，不同厂家清开灵注射液样品的生物热活性指纹图谱存在G17751大差异，在一定程度G990G2465G7156了清开灵注射液质量的差异性；样品S5G1032G17829G1457质期，G1866G6245菌生物热活性指纹图谱G5062G2469生一定的变G2282，提示质量G2469生了G6925变。G12520G13785将G13479合G1866G1194方法从物质G4630G19766进行G9157入研究。2245清开灵注射液为中药注射剂组方G3809G7446G1055G7380，靠G4581数指G7643G6116分的含量测定G19602G1209G1852G19766控制G1866质量，G7424研究从清开灵注射液的G6245菌活性角度评价了清开灵注射液质量的一致性、稳定性，G15441G9994G1075存在一定的G4628G19492性，G1306G4557G11458G2081G1059力的质控方G5347G7171一个G17751好的G15929充。【参考文献】1中G3281G20147品药品G11429G11575G12661G10714G4628G457G2164G5390中药注射剂注G1888G12661G10714G7389关G1119G4464的G17902G11705G708G5461求G5859见G12307G709，20062G13930G4579G8839，金G3490，G17225振中，G12573G16782中药质量控制G994评价模G