鲤鱼不同组织过氧化物酶的活性测定

1鲤鱼不同组织过氧化物酶的活性测定摘要A1A0A2A3A4A5A6A7A8A9A10A12A13A3A11A14A14A15A16A17A18A19A2A20A21A22A14A15A12A24A22A14A15A21A23A25A26A27A28A30A29A31A32A25A10A33A21A34A35A37A38A31A36A39A40A41A42A43A44A45A47A48A45A47A49A46A50A51A52A53A54A55A31A32A25A10A33A33A34A56A11A57A8A59A58A60A61A62A47A60A63A64A61A58A47A58A65A63A61A58A68A66A67A12A71A69A42A43A52A53A54A55A31A32A25A10A33A21A34A56A70A72A73A74A75A76A11A77A37关键词A31A32A25A10A33A80A4A5A6A7A80A33A34A35A80A11A14A14A15A16DETERMININGPEROXIDASEACTIVITYOFDIFFERENTTISSUESFROMCYPRINUSCARPIOABSTRACTITWASUSINGGUAIACOLASSUBSTRATEANDENZYMEACTIVITYWASSHOWEDBYTHEODVALUEVARIETYINTHEREACTIONLIQUID,ANDTHECATALYTICACTIVITYPEROXIDASEWASMEASUREDBYSPECTROPHOTOMETERANDBYETHEWAYCOMPARISONINGANDANALYSISINGPEROXIDASEACTIVITYOFDIFFERENTTISSUESFROMCYPRINUSCARPIOINADDITION,THERELEVANTDATAOFPEROXIDASEPODACTIVITYISTHATTHEKIDNEYIS1042U/GMIN,THECARDIACMUSCLEIS957A81A78A79A82A83A84A85,ANDTHEFLESHIS343A81A78A79A82A83A84A85THEEND,REPETITIONTESTISCARRIEDOUTTOCONFIRMTHEACCURACYANDPRECISIONOFTHEMETHODKEYWORDSPEROXIDASEANILINEENZYMEACTIVITYA86SPECTROPHOTOMETER过氧化物酶（PEROXIDASE，POD，EC11117）是一种生物氧化中的末端氧化酶A87A88A89，能够分解生物体内某些代谢产物需氧脱氢后产生的，对机体有害物质。它广泛的存在于生物各个组织器官，在肝脏和血液中含量较高，具有一定的解毒功能。POD作为细胞内重要的组成成分，具有许多非常重要的生理功能。由于其成分和结构的复杂性，同功酶的多样性，以及多基因编码特点，造成对其功能的认识尚不全面。POD在食品、医药、环保和化工等行业中已得到广泛应用。POD独特的温度稳定性和优良的反应性使其成为同类酶中极其重要的一种环保部门应用POD处理工业废水；将POD应用到医疗诊断试剂盒，生产其产品的性能与质量均超过了传统的HRPI（转录2G16855G14422G15519G11345G6251体A87A90A89）试剂盒；在G7653G14038生产工业中POD成功的代G7379了传统G2524成工业中的G11014G18287，G3835G3835G19489G1314了成G7424。G8504G3818，G16780G3822G3835G1856G2508G18129G1117G1820G5668后的G11752G12362G5332G2469了POD在生物G14467G10267、G3822种G3621G7021G2462G5326G12581G7460G7021G14026G2524剂生产中的应用；PODG8757G7591水和G8757G7591G3315G3768的生物G1474G3809中G1075G1262有极高的应用G1227G1552。G7424G8437G4466G20576的G1039G20076是G6518G12362POD的G8975性，G18331用的G4466G20576G7053G8873是G5852G2031G7420G18222G8873A87A91A89。G2375G1209G5852G2031G7420G18222（G18063G11014氧G3534G14531G18222）和H2O2为G5225物，过氧化物酶G1664化H2O2G6930G1998G7044生G5589氧，使G7092G14406的G5852G2031G7420G18222氧化成G13430G7849G14406的G3247G18063G11014氧G3534G17842G18222,G2029过氧化物酶G8975G2159的G3835G4579在一定G14551G3272内与产物G20080G14406的G9157G8985G2588G13459性G1863G13007，G6937G2499G17902过G8991定A436的G2476化G10587G7481G8991定过氧化物酶的酶G8975G2159G2345G1313，G1186G13792分G7524G8616较过氧化物酶的生物性、组织特性。G5852G2031G7420G18222过氧化氢G279G3247G18063G11014氧G3534G17842G18222水G4466G20576G5859G1053在于G7368具体、G1852G19766的了解、G6496G6581它的特性G2462G1664化G1328用环G3671，G1209G1427G7368G3921的在G10628代生G8975、高G7044G12197G6228G17839行应用。1、实验材料与方法11原料、试剂与仪器G11017分分G7524G3837G5191、G11752G19081、G13445G5079、G1924箱、冷冻离心机、微量G17839样器、G8616G14406杯、紫G3818G2499见分光光度计、秒表30的HA92OA92、0018MOL/L的G5852G2031G7420G18222、01MOL/L的磷酸缓冲液（PH70）和01MOL/L的磷酸缓冲液（PH72）、鲤鱼（市场上购买）312实验方法及步骤、121待G8991酶液的制备称取鲤鱼的心脏，肾脏和肌肉三种组织各48G，G6930G17839G11752G19081中，再分别加入20ML01MOL/L的PH72的磷酸缓冲液，于G1924浴中G11752磨。再用G13445G5079过滤，取滤液用冷冻离心机在10060R/MIN的条件下离心10MIN。沉淀弃去，取上清液，G2375得到酶原液。给鲤鱼的心脏、肾脏和肌肉三个不同组织的酶原液分别贴上标签，置于G1924箱中冷藏备用A87A88A89。122酶G8975G2159G8991定向G8616G14406杯中加入0008MOL/L的HA92OA92溶液005ML，01MOL/L的PH70的磷酸缓冲液28ML，0018MOL/L的G5852G2031G7420G18222005ML，于25的水浴中恒温10MIN，迅速加入待G8991酶液01ML，G1209磷酸缓冲液代G7379酶液G1328空G11345对照，反应液总体积3ML。用分光光度计在436NM下G8991定溶液的光吸收G1552（A），每30S读一G8437，共读3MIN。重G3809步骤3和4五G8437A87A93A89。123计算G1209每半分钟AA94A95A96G2476化001为1个G8975G2159G2345G1313。G1209时间为横坐标，AA94A95A96G1552为纵坐标G17839行G13459性G1328图（或用统计G7053G8873求得回归G7053程），G17839G13792计算AA94A95A96的G2476化速G10587（AA94A95A96MINA97A98）G7481定G1053酶G8975G2159G2345G13131U，最后计算鲤鱼不同组织每克鲜重样品中过氧化物酶PODG8975G2159的G3835G4579，G2375用AA94A95A96MINA97A98GA97A98FW表达过氧化物酶G8975性A87A93A89。A436NM/MINA样/MINA空G11345/MIN过氧化物酶的G8975G2159G2345G1313（U/GMIN）A436NM/MIN1548010010530其中，15为提取酶液总体积（ML），48为鲜重（G），01为G8991定时提取酶液体积（ML）,05为G8991定时反应时间T，30为酶液稀释倍数2、结果21实验结果4211绘制鲤鱼三种组织过氧化物酶的光吸收G1552曲G13459图G1209AA93A91A99G1552为纵坐标，G16772录时G2063G55为横坐标。表1鲤鱼三种不同组织光吸收G1552A时间A100MINA101051152253心脏011101210121012001200122肾脏027102770280028602880289肌肉002100230022002200220022表2重G3809性G4466G20576数G6466U/GMING5219G2507123456G5191均酶G8975心脏2886293427782823296128512871肾脏3099301832283156305731923126肌肉150915316411575167715511581A102A103A104A105A106A107A108A109A110A111A112A113A102A114A115A114A116A114A115A114A116A114A117A114A115A114A116A118A114A115A114A116A118A117A114A115A114A116A116A114A115A114A116A116A117A114A115A114A116A103A114A115A114A116A103A117A114A114A115A117A118A118A115A117A116A116A115A117A119A120A121A122A123A124A125A126A127A128A129A130A131A132A133A126A134A135A136A137A138A139A140A141A142A143A144A145A146A147A136A148A149A137A148A150A148A149A137A137A148A149A137A137A150A148A149A137A151A148A149A137A151A150A148A148A149A150A137A137A149A150A151A151A149A150A152A153A154A155A156A157A158A159A160A161A162A163A164A165A166A159A167A168A169A170A171A172A173A174A175A176A177A178A179A180A169A181A182A170A183A181A182A170A183A184A181A182A170A185A181A182A170A185A184A181A182A170A186A181A182A170A186A184A181A182A170A187A181A182A170A187A184A181A181A182A184A188A188A182A184A170A170A182A184A189A190A191A192A193A194A195A196A197A198A199A200A201A202A203A196A204A205522实验数据校对对G6164得到的重G3809性G4466G20576数G6466G1016G1016G17839行G7053G5058分G7524，G11487置G1461水G5191为001时是G2554有G7186G14891性G5058别，G2375G1972G8437G8991定G13479G7536重G3809性的G3921G3363。表3G7053G5058分G7524表1TG7828G20576,置G1461水G5191A010心脏1G25072G25073G25074G25075G25076G25071G2507010050070060112G25070010080120063G25070110050134G25070060145G2507009表4G7053G5058分G7524表2TG7828G20576,置G1461水G5191A010肾脏1G25072G25073G25074G25075G25076G25071G25070080040090110052G25070010070130063G25070040090054G25070100065G2507002表5G7053G5058分G7524表3TG7828G20576,置G1461水G5191A010肌肉1G25072G25073G25074G25075G25076G25071G25070090060070110082G25070040050100063G25070040090054G25070100065G2507012T09510181,T0958186。6G11013G1209上数G6466G2499G11705,G1857G8437G5191行G4466G20576G8991定G13479G7536的重G3809性较G3921,G16825酶G8975G8991定G7053G8873的稳定性较G3921，表G7138G7053G8873是G2499G19764的。3讨论31鲤鱼不同组织过氧化物酶的活性比较G17902过试G20576得到鲤鱼肾脏、心脏、肌肉三种不同组织过氧化物酶酶G8975性分别为3126G88/G、28G261G88/G、1581G88/G，G2499G1209G11487G1998过氧化物酶的G8975性在鱼类肾脏组织中最G5390，心脏组织G8437G1055，肌肉组织最G5381。311过氧化物酶对鲤鱼肾脏的G5445G2721肾脏是G8864G4627G13007统的组成器官G1055一，是机体的G1039要G6502G8856器官。它G17902过生成和G6502G1998G4627液，G6502G1998体内代谢废物G2462有害物质，重吸收有用物质，G2499G16855G14422水、G9195G17891G2399G2462酸G11909G5191G15925G7481G13512G6357机体内环G3671的稳定，它分G8864的各种物质与机体的G3822种代谢有G1863，G13792过氧化物酶（POD）是一种生物氧化中的末端氧化酶，能够分解生物体内某些代谢产物需氧脱氢后产生的，对机体有害物质。G19097、G19229、G8754等重G18341G4658是G5415G2081环G3671G8757G7591最重要的G3252G13044G1055一A206A207A208，一些重G18341G4658G3926G19097为G1166体G2462G2172物体G19762G5529需G1815G13044。G17829G5192G7481，G11013于工业的G2469G4649，环G3671中重G18341G4658特别是G19097的含量G17246G7481G17246高，其毒性已G5353G17227G1166G1216的G7234G17953重G16282。肾脏和肝脏是G19097的G1039要G15000积部G1313，G1075是G19097毒G1328用的G1039要G19786器官。G13792过氧化物酶同工酶能够反G7156生物生G19283G2469G13958的特G9869、体内代谢G10378G1929G1209G2462对G3818G11040环G3671的G17878应性，在G19097G7591毒下，G15826G15585肝、肾组织POD同工酶G5114G8975性的G5390G5381G2469生了G7138G7186G2476化，G17837种G10628G16949G2499能反G7156了G15826G15585对重G18341G4658毒害的G17878应性。G5415重G18341G4658G17839入G2172物体内后，G2172物G17902过同工酶的G6925G2476与G17837种不良环G3671G11468G17878应，使G2172物体得G1209生存下去。G11013G8504G2499见，G19097G7591毒G2499G5353G17227G2172物肝脏和肾脏的中毒性G6451害，G13792G17837种G6451害G2460与组织内POD同工酶的G2476化有G11540一定的G11468G1863性，提G12046POD同工酶的G2476化在G19097使肝、肾中毒的过程中G17227G11540重要G1328用。312过氧化物酶对鲤鱼心脏的G5445G2721心脏的G1328用是G6524G2172血液G8981G2172A209A210A211，向器官、组织提G1391G1817G17287的血G8981量，G1209G1391应氧和各种G14841G1871物质，G5194G5114G17220代谢的G13468产物G3926G1120氧化G11911、G4627酸等，使G13466G14002G13512G6357G8503G5132的代谢和功能。G11013G19757G14045G13007将使用后不需要的G1008G16211G5114G17220，G17828G17877到G6502G8856废物的器官，G1075G4613是G17902过G9195G17891G2462处理，回收G2499G1209再G2045用的部分，G6502G1998G7092用或有害部分。G17837一G3883G4506G19393的G12661G17959G13007统G4613是G5502环G13007统。G13792POD在心血G12661G1075有广泛的分G5079，具有G3822种生物G4410G6940应，G2499G1431G17839G14038G13950G13466G14002分化和G14038G13950生成，G3698G5390机体对G14020G4719G13044的G6947感性，G16855G14422体内糖G5191G15925，抑制炎症G3252子生成G2462炎症形7成，G5445G2721肿瘤生G19283等。过氧化物酶在组织过氧化反应过程中G2469挥重要的保护G1328用，是G6251心肌缺血G6451伤的重要G3252子。血G13430G15519G11345是脊椎G2172物G13430G13466G14002内的呼吸G15519G11345A212A213A214，在生物体内G17227G11540传输氧、分解HA2150A215、传递G11017子等与氧和能量代谢有G1863的重要G1328用G1166G1216对其的G11752G12362G1039要集中在其G13479构、输氧功能，G1209G2462G15519G11345质分子与G11017极G1055间G11017子转移过程的机理等G7053G19766对于其具有的过氧化物酶G1664化特性的G11752G12362有限。血G13430G15519G11345和G3837然过氧化物酶具有G11468同的铁卟啉辅G3534和G11468似的空间G13479构，G2499G1209G1328为过氧化物模拟酶G1664化HA2150A215氧化对G11014G3534G18222的反应，G2469G10628具有典型的过氧化物酶的特性，G5194且有良G3921的酶G1664化G8975性。313过氧化物酶对鲤鱼肌肉的G5445G2721在肌肉组织中，它的含量G11468对G4613较少了，G3252为肌肉组织G1039要G1328用是G1391能，G1209G2462G17842接,保护,支G6357和G14841G1871等G1328用，G17839行代谢分解的G1328用G11468对较G5381，G6164产生的代谢产物、代谢废物G1075G11468对堆积较少。32过氧化物酶在生物体内的作用酶是生物体内产生的具有专一性和高度G1664化G8975性的G15519G11345质，生物体的生G19283、G2469G13958、繁殖等各种生命G8975G2172部离不G5332酶的G1664化G1328用。过氧化物酶（PEROXIDASE，POD，EC11117）是G1209铁卟啉为辅G3534的氧化酶A216A217A218，G1664化HA219OA219氧化某些G18222类、芳香胺和G6251G3363血酸等还原性物质。它是一类G1186植物、G2172物、微生物中提取G1998G7481的氧化还原酶，其G1209血G13430G13044为辅G3534，参与生物体内的生理代谢。在生命G8975G2172过程中，过氧化物酶G1039要是G1664化分解生物体内的氧化物或过氧化物氧化分解其它毒G13044。G11013于过氧化物酶对氢受体HA219OA219具有独特的G8975化G1328用，其G2499G1209高G6940地G1664化G8975化HA219OA219。在G13466G14002代谢的氧化还原过程中G17227重要G1328用，G3926清除G13466G14002内的有害物质HA219OA219、保护酶G15519G11345G1209G2462G1431G17839生物体分解体内某些代谢产物需氧脱氢后产生的，对机体有害物质。它在肝脏和肾脏含量较高,具有一定的解毒功能。在G8504G7053G19766,已经有G16780G3822的G4410者对机体的生理G5859G1053G1209G2462在临床G7053G19766的G1328用做过G9157入的G11752G12362工G1328。除G8504G1055G3818,它还是生物体生G19283G2462G6251病重要生理生化指标。G3252G8504,不少G4410者G18129对G16825酶做了G9157G2063的G11752G12362,特别是植物体中过氧化物酶的G11752G12362,其特殊的理化性质已受到重G16282。8同样的，过氧化氢酶G1075G2499G1209帮助G1664化机体内的过氧化氢分解为水和分子氧G1209解毒，G6164G1209，G1016种酶在氧化还原G1328用体G13007中最G17227G1328用的酶G8975性，是生物体G6251病性的重要生化指标。过氧化物酶与过氧化氢酶的区别在于过氧化氢酶能使HA220OA220分解为HA220O和OA220。反应式G3926下G13792过氧化物酶还能G2045用HA220OA220氧化G18222类G2462胺类等有毒的代谢产物，G6937它对机体有双重的保护G1328用。在某些组织G13466G14002内还有一种含硒的谷胱甘肽过氧化物酶A216A221A222A223A224A218，是生物体内一种重要的含硒酶,硒是G16825酶G8975性中心的构成成分。硒是G1166类和G2172物的一种G5529需微量G1815G13044,它的缺乏和过量均G2499导致疾病的G2469生。在生物体内,它G1039要G17902过构成含硒酶G7481G2469挥G1328用。G16825酶能G2045用还原型谷胱甘肽（GSH）G1328G11017子G1391体使HA220OA220还原为HA220O，G1075能使其它过氧化物还原，G6164G1209对组织G13466G14002有保护G1328用，减少它G1216对机体的G6451伤G1328用。谷胱甘肽过氧化物酶是机体G6251氧化防御体G13007中重要的酶G1055一,能清除HA220OA220防止G13466G14002G14038质过氧化,延缓生命衰老。自G11013G3534G4410说是G10628代G6251衰老G4410说中的一种。自G11013G3534G4410说认为,自G11013G3534能使G13466G14002受到G6451害,导致G1166体衰老和死亡。同时,G17837种G4410说还认为凡能抑制和消除自G11013G3534的物质,均具有G6251衰老G1328用。G3252G8504G11752G12362和完善自G11013G3534G4410说,筛选能防御自G11013G3534G6451害的G6251衰老药物,对防治老G5192病和提高G1166类生存质量,延G5192益寿有G11540不G2499G1314估的G1328用。综上G6164述,G1166体产生的自G11013G3534能加速G1166体衰老和死亡,G13792抑制和清除自G11013G3534能延缓G1166体衰老过程。G3252G8504G11752G12362和应用G6251氧化剂和G6251氧化酶类药物,防御自G11013G3534对G1166体的健康G6451害有重要的G10628G4466G5859G1053。33对过氧化物酶的展望过氧化物酶是存在于生物体的一类较丰富的酶G15519G11345A225A226A227，G17902过化G4410手段G2524成的过氧化物模拟酶既G2499G1209保G6357G3837然酶的G1664化G8975性，G2460G2499G1209克服G3837然酶在稳定性G5058、G1227格昂贵等G7053G19766的不G17287；G13792固定化酶G2499G1209较G3921地避免酶易失G8975的缺G9869，G5194且G2499G1209根G6466需要设计固定化酶和载体的G13479构，制备高G8975G2159的固定化酶，同时使其能重G3809使用G13792不失G8975；对酶G1664化反应微环G3671模拟的G11752G12362，将为G1166G1216提G1391G7368G3822的有G1863于生物体内酶G1664化反应的G1461息，为揭G5332生命奥秘提G1391G1461息；优良的氢G1391体G5225物G2499G1209提高酶反应的G2721应性能，在G11752G12362酶与G5225物的构G6940G1863G13007、酶的G1328用特G9869G7053G19766有重要的G5859G1053