探究培养液中酵母菌数量的动态变化.ppt

1、探究培养液中酵母菌数量的动态变化,探究原理：酵母菌可以用液体培养基来培养。培养基中酵母菌种群的增长情况与培养液中的成分、空间、pH、温度等因素有关。我们可以根据培养液中的酵母菌数量和时间为坐标轴做曲线，从而掌握酵母菌的种群数量变化情况。 探究步骤： （1）将10 mL无菌马铃薯培养液或肉汤培养液加入试管中。 （2）将酵母菌接种入试管中的培养液。 （3）将试管放在25条件下培养。 （4）每天取样计数、推导计算酵母菌数量：血球计数板（2mm2mm方格，培养液厚0.1mm） （5）分析数据，画出曲线（7天），推测影响影响酵母菌种群数量变化的因素。,(二)酵母细胞数的测定操作方法 1.血球计数板的构造

2、 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面个刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为，其体积为0.1mm3。,计数室通常有两种规格。一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造；它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由1625=2516=400个小方格组成，见图。 2.血球计数板的使用 (1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵

3、母菌个数。 (2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即可。,(3)将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的厚玻片。 (4)将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸水纸吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数室内。 (5)计数时，如果使用16格25格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格（即100个小格）的酵母菌数。如果规格为25格16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。,(6)当遇到位于大格线上的酵母菌，一般

4、只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞)。 (7)对每个样品计数三次，取其平均值，按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。,3.计算公式 (1)16格25格的血球计数板计算公式： 酵母细胞数ml=100小格内酵母细胞个数100400104稀释倍数 (2)25格x16格的血球计数板计算公式： 酵母细胞数ml=80小格内酵母细胞个数80400104稀释倍数,4.血球计数板的清洁 血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干

5、净，则必须重复清洗直到干净为止。,计算公式,16格25格的血球计数板计算公式：酵母细胞数/ml=小格内酵母细胞个数/100400104稀释倍数 25格x16格的血球计数板计算公式：酵母细胞数/ml=小格内酵母细胞个数/80400104稀释倍数,方案设计： 一、提出问题 培养一种酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？也可以提出其他的探究问题，例如，在不同温度（以及通氧、通CO2等）条件下酵母菌种群数量增长的情况如何？不同培养液（如加糖和不加糖）中酵母菌种群数量增长的情况如何？等等。 二、猜想假设 酵母菌种群的数量随时间呈S型增长变化。 三、设计实验 全班同学分成甲、乙、丙等若干实验组。分别用等量培

6、养液，在相同适宜环境中培养等量酵母菌。每天用血球计数板，采用抽样检测的方法计数一个小方格内的酵母菌数量并作记录，连续7天。7天后，各组向全班汇报本小组7天的数据，算出每一天数据的全班平均值，根据平均值画出酵母菌种群数量的增长曲长。,探究培养液中酵母菌数量的动态变化,实验过程： 一、材料用具 探究所需要的菌种和无菌马铃薯培养液或肉汤培养液、试管、血球计数板（2mm2mm0.1mm方格）、滴管、显微镜等。 二、方法步骤和记录 1、取相同试管若干支，分别加入5ml肉汤培养液，塞上棉塞。 2、用高压锅进行高压蒸汽 灭菌后冷却至室温，标记甲、乙、丙等。 3、将酵母菌母液分别加入试管各5ml，摇匀后用血球

7、计数板计数起始酵母液个数，做好记录。 4、将各试管送进恒温箱，25 下培养7天。,探究培养液中酵母菌数量的动态变化,三、现象观察 每天同一时间，各组取出本组的试管，用血球计数板计数酵母菌个数，并作记录，连续观察7天。,探究培养液中酵母菌数量的动态变化,四、实验结论 1、根据表格平均值作出培养液中酵母菌种群数量7天中的变化曲线。,2、培养液酵母菌种群数量随时间呈_型增长变化。,探究培养液中酵母菌数量的动态变化,注意事项： 1、操作过程中要建立“有菌”的观念，不能随意谈笑。 2、 酵母菌计数方法：抽样检测法。先将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入。多余培养液用滤

8、纸吸去。稍待片刻，待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部，将计数板放在载物台的中央，计数一个小方格内的酵母菌数量，再以此为根据，估算试管中的酵母菌总数。 3、从试管中吸出培养液进行计数时，应将试管振荡几次，以便使酵母菌均匀分布，提高计数的代表性和准确性。 4、对于压在小方格界线上的酵母菌应计数同侧相邻两边上的菌体数，另两边不计数。 5、影响酵母菌种群数量的因素可能有养料、温度、pH、空间及有害代谢废物等,探究培养液中酵母菌数量的动态变化,问题探究： 1、如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当采取怎样的措施？ 2、本探究需要设置对照吗？如果需要，请讨论说明怎样设计；如不需要，请说明理由。,摇匀试管取1ml酵母菌培养