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文档简介

1、 分光光度法,实验四 叶绿素含量的测定,植物生物学实验（二）,一，实验目的与要求,掌握叶绿素a、b含量测定的方法； 了解叶绿素a、b含量和比值与环境因素之间的关系。,二、实验材料与试剂,材料 不同生境下的植物叶片。 试剂 80%丙酮、无水CaCO3、石英砂。,三、实验原理,（一）叶绿体色素的组成： 1.叶绿素 2.类胡萝卜素,叶绿素a 叶绿素b,胡萝卜素 叶黄素,3:1 (阳生) 2:1 (阴生),2：1,3：1,（二）、叶绿素a、b的结构式与化学性质,叶绿素的化学性质：,亲脂性亲水性 不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。,叶绿素a、b的光吸收总和在645nm和663nm

2、处各有一峰值。,（三）、叶绿素a、b的吸收光谱,Lambert-beer定律： A=nCL n=摩尔消光系数； C=溶液浓度； L=比色杯内径。 吸光度的加和性： 混合液在某一波长下的总吸光度就等于各组分在相应波长下吸光度的总和。,四、实验步骤,提取：叶片洗净、吸干、称重后于研钵中加入5mL80%丙酮、少许石英砂和碳酸钙，研磨匀浆后过滤，再用5mL80%丙酮冲洗滤渣，定容到10mL，混匀；,测定： 充分过滤后，以80%丙酮调零，测定叶绿素提取液在645nm和663nm处的光吸收值。 计算： 叶绿素a： C=12.21A663-2.81A645 叶绿素a（mg/gFW)=? 叶绿素b： C=20.13A645-5.03A663 叶绿素b（mg/gFW)=? 叶绿素a/叶绿素b=?,五、思考题：,1. 用无水乙醇或无水丙酮提取干燥材料中的叶绿体色素，对结果会有何影响？为什么？ 2. 研磨提取叶绿素时，为何要加入CaC

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