初始污染菌检验操作规程

1、初始污染菌检验操作规程1.目的 测定样品细菌总数可用来判明样品细菌污染的程度，以及生产单位工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况，是对样品进行卫生学评价的综合依据，确定灭菌前产品中微生物的数量和性质，为下一步灭菌提供参考依据。 2.适用范围 适用于所有需要消毒灭菌前的产品、洁净车间 3作业条件： 3.1无菌检测在洁净度为100级单向流空气区域内进行，严格遵守无菌操作，避免污染。 3.2超净台及工作台面，必须进行洁净度验证。 4作业方法与步骤 41制作营养琼脂培养基（参见培养基制作作业指导书），培养基需按要求培养16-18H后，检查无菌生长方可使用。 42无菌室洁净度验证 421取3只培养皿在超

2、净工作台平均位置打开上盖，暴露30min后盖好置3035培养48h后检查，3只培养皿上生长的菌落数平均应不超过1个 43产品采集与样品处理（制备供试液） 4.3.1用无菌手续称取10g可以破坏性类供试品,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡，保温于45水浴中510min，不时振摇。作为1：10供试液。 4.3.2对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。保温于45水浴中510min，不时振摇。作为1：10的供试液。 4.3.3采样数量：各类产品每批随机抽取10件样品。 4.3.4供试液10倍递减稀释 4.3.5待上述供试液自

3、然沉降后取上清液1ml，加入9ml生理盐水，制备1：100的供试液。 制备过程中尽量避免碎片等杂物的混入。 4.4接种 检验 4.4.1取上述供试液上清液作初始污染菌数检测，取4个培养皿，每个稀释级各吸取1ml至每个灭菌平皿，每个稀释级注2个平皿。 4.4.2经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至45-50 时，倾注上述各个平皿15ml，另倾注一个不加样品灭菌空平皿作空白对照。以顺时针或逆时针方向快速转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。 4.5培养 将已经凝固的平板倒置于37培养箱中，一般培养482h。计算平板上的菌落数。 4.6结果与判定 4.6.1计数方法：将平板置菌落计数器或从平板的背面直接以

4、肉眼用标记笔点计，以投射光衬以暗色背景，仔细观察，计数。必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。 4.6.2计数菌落层片状生长的平板不宜采用；计数符合要求的平板上的菌落，按下式计算结果 平均菌落数稀释倍数菌数 菌数/每件次（或g） = 件次或重量（g） 4.6.3菌落计数基本规则 4.6.3.1、选取平均菌落数在30300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。 如只有1个稀释级平均菌落数在30300之间，则将稀释级的菌落数乘以稀 释倍数报告。 4.6.3.2、如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30300之间，则先计算两稀释级菌落数的比值。 高稀释级的平均平板菌落数稀释倍数 比值= 低稀释级的平均平板菌

5、落数稀释倍数 当比值2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告。当比值2时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。 4.6.3.3、如各稀释级平均菌落数均在300以上，则按最高平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按最低平均菌落数乘以稀释倍数报告。 4.6.3.4、如各稀释级平均菌落数均不在30300之间，则以最 接近30或300的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。 4.6.3.5、如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平 均菌落数小于1时，应报告菌数为10个/g或ml。 4.6.3.6、如有3个稀释级平均菌落数均在30300之间，则以后2级计算级间比值报告。 4.6.3.7、菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告。大于100时，采用二位有效数字，在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算。在报告菌落数为“不可计”时，应表明样品的稀释度。 4.6.4如果样品菌落总数超过标准的规定，按（4.4.5复检方法）进行复检和撰写结果报告。 4.6.5复检方法 将留存的复检样品依前法稀释复测两次，两次结果平均值都达到标准的规定，则判定检验样品合格；其中有任何一次结果平均值超过标准规定，则判定被检样品不合格。 5. 相关表单、测试报告