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文档简介

1、ScienCell原代细胞培养方法 2018.06.07原代细胞在复苏和传代前一定要包被培养瓶，以促进细胞贴壁。以人脐静脉内皮细胞（sciencell，货号#8000）为例：1. 培养瓶包被包被液 纤维粘连蛋白（sciencell，货号#8248） 以1-2 ug/cm2的浓度包被培养瓶。可将1mg/ml的纤维粘连蛋白不含钙镁离子的磷酸盐缓冲液（sciencell，货号#0303）稀释100倍，T-75培养瓶中加入10ml左右，37度孵箱1小时或4度冰箱过夜，并用灭菌双蒸水洗涤培养瓶2遍（此步骤非常重要，必须清洗2遍），包被好的培养瓶不要放置超过24小时。2. 配制培养基以ECM培养基为例把胎

2、牛血清（sciencell，货号#0025）、生长因子（sciencell，货号#1052）和双抗（sciencell，货号#0503）加入培养液中，混匀后的完全培养基于4度保存，应尽快使用。可分装以延长效期。3. 细胞复苏在培养瓶中加入配制好的ECM培养基10ml（推荐复苏至T75培养瓶，如T25瓶子加5ml）从液氮中取出冻存原代细胞，37度水浴冻融，冻融过程中可以轻轻转动细胞，加快冻融速度（注意原代细胞复苏时一定不要离心），将融化的细胞放入已加入培养基的培养瓶中，再用1ml培养基洗涤细胞冻存管，保证原代细胞都被加入培养瓶中，然后静置于孵箱，12-16小时后更换培养基以除去DMSO。4. 原代细胞传代细胞生长至70-80%左右可以传代，传代比例1:2或1:3为佳。首先弃去培养基，PBS或D-Hanks液洗涤培养瓶2遍，加入适量0.25%Trypsin-EDTA ，37度孵育，轻拍培养瓶侧面，显微镜下观察原代细胞消化情况。细胞消化好后，加入适量的胰酶中和液以中和胰酶，然后将原代细胞和培养基转移至离心管中，1000rpm离心5分钟。然后弃去上清液，以1-2ml培养基重新悬浮原代细胞，加入包被好的已加入培养基的培养瓶中。根据原代细胞生长情况，大概每2天更换培养基。如果

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