基因型鉴定 protocol_第1页
基因型鉴定 protocol_第2页
基因型鉴定 protocol_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、精选文库一、基因型鉴定protocol1、剪尾取样及编号从鼠房取出需要基因型鉴定的小鼠（由于小鼠一般在21天时已经断奶，故小鼠剪尾的时间应不小于三周），查看鼠箱上的基因信息，根据基因信息从编号笔记本上找出相应编号，续编。在EP管上预先写明小鼠编号从鼠箱中取出老鼠（戴上手套后用手抓住小鼠尾部向上提出，提住鼠尾不放，将小鼠慢慢放至实验台上，此时小鼠会向前爬动，用另一只手从背侧捏住小鼠背部皮肤，要注意捏的位置尽量靠近颈的上部，防止小鼠的头部扭动），从小鼠尾端用剪刀剪下3mm左右鼠尾（不可超过5mm,会使小鼠受伤），将剪下的样品放入对应编号的EP管内，用电烙铁烫及小鼠尾部剪口处，一定要使伤口烫合，防止

2、其流血不止。然后对小鼠进行鼠耳编号。（注意：编号时要记录小鼠的性别）2、DNA提取向每只含样品的EP管内加入400微升消化液（含蛋白酶K），将其置于混合仪上消化，55（此温度下DNA在水中的溶解度最高，即最为稳定），3h。向消化后的样品中加入400微升异丙醇，反复颠倒，一般可见絮状分层（个别样品看不到）。之后放至离心机13000r，10min。去上清，加入750微升70%乙醇，13000r，10min。重复此操作一次。去上清，将EP管倒置于吸水纸上或置于空气中晾干。(最好晾干，倒置在吸水纸上有可能会使一部分DNA流失)3、PCR(例，三转小鼠，做三次PCR，每次PCR针对的基因不同，所用引物不

3、同，每次PCR做样品数+3（空对照：不加模板；正对照：突变型小鼠的样品；负对照：野生型小鼠的样品）个体系)。单个体系如下：ddW 1810*buffer （含Mg2+） 2.5dNTP(2.5mM) 2.5Primer R(20M) 0.25Primer F(20M) 0.25Taq酶 0.5Template 1程序：94 预热 4min94 变性 1min61 退火 1min 30个循环72 延伸 1min72 7min4 hold注意盖子盖紧。4、琼脂糖电泳配胶，根据规格来配，如80ml规格，称量0.8000g琼脂糖，加入80ml 0.5*TBE buffer。加热至沸腾（80ml90s;40ml90s;20ml30s）,待冷却至60时加0.001%的EB.倒至插有梳子的胶板上，待用。上样6*loading buf

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 辅导培训

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论