反相色谱法测定尼泊金甲酯

1、实 验 报 告实验课程： 仪器分析 学生姓名： 崔清玥 学 号： 专业班级： 化学（创新）1301实验名称：反相色谱法测定尼泊金甲酯一、实验目的1、了解反相色谱法测定试样中尼泊金甲酯的含量的实验原理和方法；2、了解高效液相色谱仪工作原理和使用方法；3、掌握外标法进行色谱定性分析的方法和原理。二、实验原理 1、尼泊金甲酯的物理化学性质 又称对羟基苯甲酸甲酯（结构式如右图），又叫尼泊金甲酯，白色结晶粉末或无色结晶，易溶于醇，醚和丙酮，极微溶于水，沸点270-280。主要用作有机合成、食品、化妆品、医药的杀菌防腐剂，也用作于饲料防腐剂。2、液相色谱工作原理在经典色谱分离方法上，色谱柱是以特殊的方法用

2、小颗粒填充物填充而成。并给流动相施加高压，以提高色谱分离效果。 3、外标法原理 先测量一系列尼泊金甲酯标准溶液的色谱峰，得到峰面积。然后用峰面积对溶度作图，得一标准曲线。然后在相同实验条件下测定样品中尼泊金甲酯的峰面积，由标准曲线上找出该峰面积下所对应的溶度，从而算出试样中尼泊金甲酯的含量。三、仪器及药品 高效液相色谱仪、色谱柱（长75mm，柱径4.6mm）、紫外检测器（254nm）、微量注射器（25L）、移液枪； 10mg/mL尼泊金甲酯标准溶液、流动相：甲醇：水=6：4混合试剂，流速为1mL/min、未知溶液、蒸馏水。四、实验过程 1.以流动相为溶剂，配制0.02mg/mL、0.04 mg

3、/mL、0.06 mg/mL、0.08 mg/mL 、0.10 mg/mL的尼泊金甲酯标准溶液。 2.设置好仪器的各参数，测定标准溶液（每次进样为20uL），得色谱峰并记录峰面积和出峰时间（死时间tR）。 3.进20L未知溶液，得色谱峰，记录峰面积和出峰时间（死时间tR）。重复测定三次。附：1.每组数据的查询处理 查询数据通道更新选中右击处理点击清除校正结果更新选中数据右击预览打印选择副本确定2.每组进样前，改变项目名称和进样量为20L。 3.根据标准溶液色谱图15中峰面积，绘出峰面积对浓度的标准曲线。五、数据记录和处理实验数据记录如下表：数据试剂浓度(mg/mL)tR(min)峰面积(Vs)

4、标准溶液10.023.06520.042.98330.063.02740.083.03250.103.0311.根据标准溶液色谱图15中峰面积，绘出峰面积对浓度的标准曲线。标准曲线：A=1.865107c+168222.根据混合样的色谱图确定尼泊金甲酯的峰面积，然后在标准曲线上查出被测组分的浓度。数据试剂浓度(mg/mL)tR(min)峰面积(Vs)未知溶液1待测3.0252待测3.0113待测3.013A1=，代入A=1.865107c+16822，得c1=0.054mg/mLA2=，代入A=1.865107c+16822，得c2=0.057mg/mLA3=，代入A=1.865107c+16822，得c3=0.053mg/mLc平均=0.055mg/mL，RSD=3.86六、思考题 1.外标法与内标法比较有什么优点？ 答：内标法是选择适当的物质作为内标物质，定量加入被测样品中，根据被测组分和内标物质的峰面积之比，乘以校正因子，对应内标物质加入量所进行含量测定的方法。外标法又称标准曲线法，是依照测量标准品所绘制的曲线来计量被测样品的含量的方法。外标法比内标法有以下优点：简单，适和大量样品分析。七、结果反思 实验过程中进样是要快速；溶液的配制要精准；每次要润洗次数要足够多；为得到的数据线性关系更佳，可多测量几次。1控制流速不得超过1ml/